專利名稱：一種耐熱紫花苜蓿的培育方法
技術領域：
本發明涉及一種耐熱紫花苜蓿的培育方法。
背景技術：
苜蓿因其高產、優質、利用年限長、根系發達，可改良土壤結構，增加土 壤肥力，被譽為"牧草之王"。在我國，隨著農業產業結構和畜牧業結構的調整， 節糧型畜牧業，特別是草食動物養殖業，呈現良好的發展態勢，因為苜蓿在提 高奶牛、肉羊的單產中發揮決定性的作用，己成為我國"三元"種植結構調整
的首選詞料作物，苜蓿產業作為新興的朝陽產業，存在著廣闊的發展空間。
優良品種是獲得高產優質苜蓿的內在原因，也是產業化的基礎，但目前我 國優良苜蓿品種較少，加之原種數量少，良種產量低，遠遠滿足不了生產和生 態建設的需求。同時，由于夏季高溫的原因導致紫花苜蓿在我國南方難以種植， 南方的苜蓿干草基本是從北方調運，運輸成本極高，既提高了詞養成本，而且 質量難以保證，極大阻礙了南方草食畜禽的發展。
正是在該背景下，本發明提出一種耐熱紫花苜蓿的培育方法，旨在培育適 合南方種植的耐熱紫花苜蓿新品種，推動南方紫花苜蓿苜蓿產業化發展，增加 優質飼草的供應，促進我國草食動物養殖業的發展，增進農村經濟發展和農民 收入。

發明內容
本發明的目的在于提供一種耐熱紫花苜蓿的培育方法，以獲得適合南方種 植的耐熱紫花苜蓿新品種。
耐熱紫花苜蓿的培育方法，其特征在于包括以下步驟
1) 取主栽紫花苜蓿品種的子葉為外植體，接種至誘導培養基，于25士rc下
誘導愈傷組織；
2) 選取誘導形成1周的愈傷組織，轉移至添加1%(1-胡蘿卜素的誘導培養基， 培養至愈傷組織進入快速增殖期；
3) 挑取新增生的愈傷組織，置于溫度35'C和光照3000Lux下篩選1周，爾 后移至繼代培養基，繼代培養2周，重新置于35'C和3000Lux下篩選l周；
4) 選取仍存活的愈傷組織，轉移至分化培養基，誘導分化成苗，單株編號 種植；
5) 摘取頂端的2張新生葉，測定葉黃素含量，保留葉黃素含量高于0.1%的 紫花苜蓿植株，進行種子繁育；6)繼續種植步驟5)篩選的紫花苜蓿株系，室內外評價驗證葉黃素含量和 耐熱性的表達穩定性，對穩定的優良株系進行種子繁殖，培育能正常越夏的耐 熱紫花苜蓿。
上述的穩定性是指入選紫花苜蓿的葉黃素含量和耐熱性可在不同年份間(2 年及以上)、季節間(2季及以上)以及地點間(2個地點及以上)表達一致， 特性不受年份、季節以及地點的顯著影響。
本發明中，所說的誘導培養基為MS基本培養基添加NAA5mg、 BA0.5mg、 蔗糖30g、瓊脂粉6.8g， pH滅菌前5.8。
本發明中，所說的繼代培養基為MS基本培養基添加NAA0.5mg、 BA2mg、 蔗糖30g、瓊脂粉6.8g， pH滅菌前5.8。
本發明中，所說的分化培養基為MS基本培養基添加KTlmg、蔗糖30g、 瓊脂粉6.8g ， pH滅菌前5.8。
本發明具有以下幾方面的有益效果
培育的耐熱紫花苜蓿新品種適合我國南方種植，推動紫花苜蓿苜蓿在我國 南方的產業開發，增加優質飼草的供應，促進我國草食動物養殖業的發展，尤 其有利于增進南方丘陵山區的農村經濟發展和農民收入。
具體實施例方式
以下通過具體實例進一步說明本發明。
實施例1:
以紫花苜蓿品種"維多利亞"的子葉為外植體，接種至誘導培養基，于25土rc
下誘導形成愈傷組織，選擇誘導形成l周的愈傷組織，轉移至含添加1%01-胡蘿
卜素的誘導培養基，培養至2周后愈傷組織進入快速增殖期，挑取新增生的愈 傷組織，置于35。C和3000Lux下篩選l周，然后轉移至繼代培養基，繼代培養 2周，重新置于35'C和3000Lux下篩選l周，選擇存活的愈傷組織，轉移至分 化培養基，誘導分化成苗，單株編號種植幼苗976多株。摘取頂端的2張新生 葉，采用高效液相色譜法[色譜柱為C18柱(4.6mmxi50mm; 5pm)，流動相為 乙腈-甲醇(95: 5);流速0.7mL/min，檢測波長446nm;柱溫室溫。結果葉 黃素在7.686~17.93pg/mL范圍內線性關系良好]測定葉黃素含量，入選葉黃素含 量高于0.1%的紫花苜蓿植株5株，進行種子繁育，經室內外模擬評價葉黃素含 量和耐熱性的表達穩定性，獲得葉黃素含量0.13%和耐熱性穩定的優良紫花苜 蓿新材料HT-Alfal。種植培育出的HT-Alfal，可正常越夏，即盛夏炎熱季節葉 片保持綠色，能正常生長，可提供穩定提供優質營養的飼料，而普通紫花苜蓿 材料由于不耐熱，休眠停滯生產，葉片枯黃。
權利要求
1. 一種耐熱紫花苜蓿的培育方法，其特征在于包括以下步驟1)取主栽紫花苜蓿品種的子葉為外植體，接種至誘導培養基，于25±1℃下誘導愈傷組織；2)選取誘導形成1周的愈傷組織，轉移至添加1％α-胡蘿卜素的誘導培養基，培養至愈傷組織進入快速增殖期；3)挑取新增生的愈傷組織，置于溫度35℃和光照3000Lux下篩選1周，爾后移至繼代培養基，繼代培養2周，重新置于35℃和3000Lux下篩選1周；4)選取仍存活的愈傷組織，轉移至分化培養基，誘導分化成苗，單株編號種植；5)摘取頂端的2張新生葉，測定葉黃素含量，保留葉黃素含量高于0.1％的紫花苜蓿植株，進行種子繁育；6)繼續種植步驟5)篩選的紫花苜蓿株系，室內外評價驗證葉黃素含量和耐熱性的表達穩定性，對穩定的優良株系進行種子繁殖，培育能正常越夏的耐熱紫花苜蓿。
全文摘要
本發明涉及一種耐熱紫花苜蓿的培育方法，其特征在于包括以下步驟取主栽紫花苜蓿品種的子葉為外植體，在25±1℃下誘導形成愈傷組織，選擇1周的愈傷組織轉移至含添加1％α-胡蘿卜素的誘導培養基，培養至愈傷組織快速增殖期，挑取新增生的愈傷組織，置于高溫和強光下篩選2次，取存活的愈傷組織轉移至分化培養基分化成苗，按單株編號種植，摘取頂端的2張新生葉，測定并保留葉黃素含量高于0.1％的紫花苜蓿植株，進行種子繁育，繼續種植室內外評價驗證葉黃素含量和耐熱性的表達穩定性，對穩定的優良株系進行種子繁殖，培育能正常越夏的耐熱紫花苜蓿。本發明的耐熱紫花苜蓿，適合在我國南方種植，增加優質飼草的供應，促進我國草食動物養殖業的發展。
文檔編號A01H1/04GK101283673SQ20081006181
公開日2008年10月15日 申請日期2008年5月12日 優先權日2008年5月12日
發明者吳殿星, 王忠華, 舒小麗, 新 黃 申請人:浙江大學