專利名稱：一種核果類經濟林砧木的組織培養方法
技術領域：
本發明涉及一種核果類經濟林砧木的快速繁殖技術，特別是一種核果類經濟林砧木的組織培養方法，它適用于對核果類經濟林砧木進行快速繁殖。
背景技術：
核果類經濟林主要隸屬于薔薇科和鼠李科等，生產中多采用無性繁殖方法繁殖苗木。核果類經濟林主要的繁殖方法包括嫁接繁殖、扦插繁殖、根蘗繁殖和組織培養等。其中嫁接繁殖技術繁殖迅速、成活率高、技術易于掌握和推廣、結果早，在核果類經濟林良種苗木繁育方面的應用最為普遍。而在繁殖嫁接苗時，不同砧木對栽培品種生長和結果的影響較大，選擇適宜的砧木品種，可以有效地提高栽培品種的產量、質量甚至抗性。
我國目前在核果類經濟林苗木生產中普遍使用的砧木為原產我國的山桃
(Pmnus davidiana)、 毛杉^(Rpersica)、 山杏(Ameniaca sibirica)、 山櫻杉^(Rserrulata)、毛櫻桃(P.tomentosa)等，這些砧木品種在生產應用過程中不同程度的表現出抗性差，適生范圍相對較窄，與栽培品種親和力差，出現"大腳"現象或"小腳"現象、壽命短等缺陷。特別是這些砧木品種對流膠病和根癌病的抗性較弱，在我國，核果類經濟林特別是桃、李、杏的主要產區流膠病和根癌病發生普遍，在一些品種上發生十分嚴重，使果品產量低，品質差，樹體逐步衰弱，甚至死亡。這嚴重制約著核果類經濟林產業健康、持續穩定的發展。
世界各國對優良核果類經濟林砧木品種的選育都非常重視,尤其是美國等其它國家，優良核果類砧木品種培育的系統研究工作已經開展了50 80年，他們已經培育出了大量優良砧木品種。 一些砧木品種如VIKEN、 NAPLEB、CRUT、 MAPARD等具有顯著的抗流膠病和根癌病特性，并且對栽培品種的生長結果具有良好的促進作用。
但是，由于繁殖材料的限制，目前這些優良的核果類砧木品種在我國還不能進行大面積繁殖，嚴重影響了核果類優良砧木品種的繁殖，也嚴重阻礙了李、杏、杏李、杉〖、櫻桃等核果類經濟林的健康發展。因此，研究優良核果類砧木的組織培養繁殖技術，快速繁殖優良核果類砧木，對提高我國核果類經濟林品種的質量和產量十分重要。

發明內容
本發明的目的是針對核果類經濟林砧木的快速繁殖，而研究出一種核果類經濟林砧木的組織培養方法。該方法是采取核果類經濟林砧木帶腋芽的莖段，通過芽誘導培養基、增殖培養基培養出大量(數百倍于原材料的)叢生芽，然后通過生根培養基將這些叢生芽培養成完整植株。從而在大約半年時間內生產出數百倍于原材料數量、生長一致、完全保持原植株優良性狀的核果類經濟林砧木苗木，以滿足巿場需求。
本發明是這樣實現的 一種核果類經濟林砧木的組織培養方法材料是取核果類經濟林砧木品種，其中，核果類經濟林砧木的組織培養方法包括以下步驟第一步、采核果類經濟林砧木新品種VIKEN、 NAPLEB、 CRUT、MAPARD帶腋芽的莖段作為外植體，用清水洗凈，放在超凈工作臺上，先用75%的酒精消毒6 8秒，無菌水沖洗三次，再用0.1%升汞消毒6 8分鐘，無菌水沖洗三次；第二步、將滅菌后的外植體剪成0.5 1.5cm的莖段，植入芽誘導培養基中進行培養，培養條件為室溫25 28°C,光照強度2000 50001ux,光照時間每天12小時，20天后植入增殖培養基中，進行增殖培養，培養條件同上，培養時間為30天；第三步、生根培養，切取約2 3cm高的核果類經濟林砧木健壯苗，植入生根培養基，進行生根培養，培養條件同上，
生根時間為40天；第四步、待核果類經濟林砧木苗生根長至5 8cm時，洗凈 根部附著的培養基，移至無污染的紅壤土或/和黃壤土中，用塑料薄膜覆蓋保 濕，保持75% 85%空氣濕度，45天后移至大田，遮蔭一周即可。
本發明可以是這樣實現的芽誘導培養基為MS + 2.0mg 6-BA+0.5mgNAA，再加入瓊脂6.0g/L ,蔗糖30g/L, PH值為5.8，裝瓶后高 壓滅菌15 20分鐘。
本發明還可以是這樣實現的增殖培養基為MS+ (1.0-2.5 mg) 6-BA+ (0.45 0.80mg) NAA，再加入瓊脂6.0g/L ，蔗糖30g/L， PH值為5.8，裝瓶 后高壓滅菌15 20分鐘。
本發明還可以是這樣實現的生根培養基為MS+(0.8~1.2)mgIBA，再 加入瓊脂6.0g/L,蔗糖30g/L， PH值為5.8，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘。
本發明的積極效果是
1、 通過本發明的實施，可以100%保持原植株基因型及其所有的優良特性。
2、 .本發明可在短時間內(6 7個月)實現工廠化育苗，大批量生產整 齊一致的核果類經濟林砧木苗木，大幅度提高繁殖系數。
具體實施例方式
以下結合實施例對本發明作進一步的詳細說明。 實施例1
一種核果類經濟林砧木的組織培養方法，材料是取核果類經濟林砧木品 種VIKEN帶腋芽的莖段，第一步、采核果類經濟林砧木帶腋芽的莖段作為外 植體，用清水洗凈，放在超凈工作臺上，先用75%的酒精消毒6 8秒，無菌 水沖洗三次，再用0.1%升汞消毒6 8分鐘，無菌水沖洗三次；第二步、將滅菌后的外植體剪成lcm長的莖段，植入芽誘導培養基中進行培養，芽誘導培 養基為MS + 2.0mg6-BA+0.5mgNAA，再加入瓊脂6.0g/L,蔗糖30g/L， PH 值為5.8，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘；培養條件為室溫25 28°C,光照強 度2000 50001ux,光照時間每天12小時，20天后植入增殖培養基中，進行 增殖培養，增殖培養基為MS+1.0 mg 6-BA+0.45mg NAA，再加入瓊脂6.0g/L : 蔗糖30g/L， PH值為5.8，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘；培養條件同上，培 養時間為30天；第三步、生根培養，切取約2~3cm高的核果類經濟林砧木 健壯苗，植入生根培養基，進行生根培養，生根培養基為MS+0.8mglBA， 再加入瓊脂6.0g/L,蔗糖30g/L, PH值為5.8，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘， 培養條件同上，生根時間為40天；第四步、待核果類經濟林砧木苗生根長至 5~8cm時，洗凈根部附著的培養基，移至無污染的紅黃壤土中，用塑料薄膜 覆蓋保濕，保持75% 85%空氣濕度，45天后移至大田，遮蔭一周即可。 實施例2
一種核果類經濟林砧木的組織培養方法，材料是核果類經濟林砧木品種 NAPLEB帶腋芽的莖段，第一步、采核果類經濟林砧木帶腋芽的莖段作為外 植體，用清水洗凈，放在超凈工作臺上，先用75%的酒精消毒6 8秒，無菌 水沖洗三次，再用0.1%升汞消毒6 8分鐘，無菌水沖洗三次；第二步、將滅 菌后的外植體剪成0.8cm長的莖段，植入芽誘導培養基中進行培養，芽誘導 培養基為':MS+2.0mg6-BA+0.5mgNAA，再加入瓊脂6.0g/L,蔗糖30g/L， PH 值為5.S，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘，培養條件為室溫25 28°C,光照強 度2000 50001ux ，光照時間每天12小時，20天后植入增殖培養基中，進行 增殖培養，增殖培養基為MS + 2.5 mg 6-BA+0.80mg NAA,再加入瓊脂6.0g/L , 蔗糖30g/L， PH值為5.8，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘，培養條件同上，培 養時間為30天；第三步、生根培養，切取約2 3cm高的核果類經濟林砧木健壯苗，植入生根培養基，進行生根培養，生根培養基為MS+1.2mgIBA， 再加入瓊脂6.0g/L,蔗糖30g/L， PH值為5.8，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘， 培養條件同上，生根時間為40天；第四步、待核果類經濟林砧木苗生根長至 5 8cm時，洗凈根部附著的培養基，移至無污染的紅壤土中，用塑料薄膜覆 蓋保濕，保持75% 85%空氣濕度，45天后移至大田，遮蔭一周即可。 實施例3
一種核果類經濟林砧木的組織培養方法，材料是取核果類經濟林砧木品 種CRUT帶腋芽的莖段，第一步、采核果類經濟林砧木帶腋芽的莖段作為外 植體，用清水洗凈，放在超凈工作臺上，先用75%的酒精消毒6 8秒，無菌 水沖洗三次，再用0.1%升汞消毒6 8分鐘，無菌水沖洗三次；第二步、將滅 菌后的外植體剪成1.5cm長的莖段，植入芽誘導培養基中進行培養，芽誘導 培養基為MS + 2.0mg6-BA+0.5mgNAA，再加入瓊脂6.0g/L，蔗糖30g/L， PH 值為5.8，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘；培養條件為室溫25 28°C，光照 強度2000 50001ux,光照時間每天12小時，20天后植入增殖培養基中，進 行增殖培養，增殖培養基為MS + 2.0 mg 6-BA+0.5 mg NAA，再加入瓊脂 6.0g/L，蔗糖30g/L, PH值為5.8，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘，培養條件同 上，培養時間為30天；第三步、生根培養，切取約2 3cm高的核果類經濟林 砧木健壯苗，植入生根培養基，進行生根培養，生根培養基為MS+1.0 mg IBA， 再加入瓊脂6.0g/L，蔗糖30g/L， PH值為5.8，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘， 培養條件同上，生根時間為40天；第四步、待核果類經濟林砧木苗生根長至 5~8cm時，洗凈根部附著的培養基，移至無污染的紅黃壤土中，用塑料薄膜 覆蓋保濕，保持75% 85%空氣濕度，45天后移至大田，遮蔭一周即可。
實施例4
一種核果類經濟林砧木的組織培養方法，材料是取核果類經濟林砧木品種MAPARD帶腋芽的莖段，第一步、采核果類經濟林砧木帶腋芽的莖段作為 外植體，用清水洗凈，放在超凈工作臺上，先用75%的酒精消毒6 8秒，無 菌水沖洗三次，再用0.1%升汞消毒6 8分鐘，無菌水沖洗三次；第二步、將 滅菌后的外植體剪成1.2cm長的莖段，植入芽誘導培養基中進行培養，芽誘 導培養基為MS + 2.0mg6-BA+0.5mgNAA，再加入瓊脂6.0g/L ,蔗糖30g/L， PH值為5.8，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘，培養條件為室溫25 28°C,光 照強度2000 50001ux,光照時間每天12小時，20天后植入增殖培養基中， 進行增殖培養，增殖培養基為MS+1.5mg6-BA+0.5mgNAA，再加入瓊脂 6.0g/L,蔗糖30g/L， PH值為5.8，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘，培養條件同 上，培養時間為30天；第三步、生根培養，切取約2 3cm高的核果類經濟林 砧木健壯苗，植入生根培養基，進行生根培養，生根培養基為MS+0.9 mg IBA， 再加入瓊脂6.0g/L,蔗糖30g/L, PH值為5.8，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘， 培養條件同上，生根時間為40天；第四步、待核果類經濟林砧木苗生根長至 5~8cm時，洗凈根部附著的培養基，移至無污染的紅黃壤土中，用塑料薄膜 覆蓋保濕，保持75% 85%空氣濕度，45天后移至大田，遮蔭一周即可。
權利要求
1、一種核果類經濟林砧木的組織培養方法，采核果類經濟林砧木新品種VIKEN、NAPLEB、CRUT、MAPARD，其特征在于核果類經濟林砧木的組織培養方法包括以下步驟第一步、采核果類經濟林砧木新品種帶腋芽的莖段作為外植體，用清水洗凈，放在超凈工作臺上，先用75％的酒精消毒6～8秒，無菌水沖洗三次，再用0.1％升汞消毒6～8分鐘，無菌水沖洗三次；第二步、將滅菌后的外植體剪成0.5～1.5cm的莖段，植入芽誘導培養基中進行培養，培養條件為室溫25℃～28℃，光照強度2000～5000lux，光照時間每天12小時，20天后植入增殖培養基中，進行增殖培養，培養條件同上，培養時間為30天；第三步、生根培養，切取約2～3cm高的核果類經濟林砧木健壯苗，植入生根培養基，進行生根培養，培養條件同上，生根時間為40天；第四步、待核果類經濟林砧木苗生根長至5～8cm時，洗凈根部附著的培養基，移至無污染的紅壤土或/和黃壤土中，用塑料薄膜覆蓋保濕，保持75％～85％空氣濕度，45天后移至大田，遮蔭一周即可。
2、 根據權利要求1所述的一種核果類經濟林砧木的組織培養方法，其特征在于芽誘導培養基為MS+2.0mg 6-BA+0.5mgNAA，再加入瓊脂6.0g/L ，蔗糖30g/L，PH值為5.8，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘。
3、 根據權利要求1或2所述的一種核果類經濟林砧木的組織培養方法，其特征在于增殖培養基為MS+ (1.0^2.5 mg) 6-BA+ (0.45~0.80mg) NAA，再加入瓊脂6.0g/L,蔗糖30g/L， PH值為5.8，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘。
4、 根據權利要求1所述的一種核果類經濟林砧木的組織培養方法，其特征在于生根培養基為MS+(0.8 L2)mglBA，再加入瓊脂6.0g/L,蔗糖30g/L， PH值為5.8，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘。
全文摘要
本發明提供一種核果類經濟林砧木的組織培養方法，該方法是采取核果類經濟林砧木新品種VIKEN、NAPLEB、CRUT、MAPARD帶腋芽的莖段作為外植體，經滅菌，無菌水清洗，再將滅菌后的外植體剪成0.5～1.5cm的莖段，通過芽誘導培養基、增殖培養基培養出大量叢生芽，然后通過生根培養基將這些叢生芽培養成完整植株。從而在約半年時間內生產出數百倍于原材料數量、生長一致、完全保持原植株優良性狀的核果類經濟林砧木苗木，以滿足市場需求。通過本發明的實施，可以100％保持原植株基因型及其所有的優良特性。本發明可在6～7個月內實現工廠化育苗，大批量生產整齊一致的核果類經濟林砧木苗木，大幅度提高繁殖系數。
文檔編號A01H4/00GK101558741SQ20091006510
公開日2009年10月21日 申請日期2009年6月3日 優先權日2009年6月3日
發明者烏云塔娜, 傅建敏, 朱景樂, 李福海, 李芳東, 杜蘭英, 杜紅巖, 楊紹彬, 段經華, 許殿鋒, 鄧建軍, 琳 黃 申請人:國家林業局泡桐研究開發中心