專利名稱：一種棉花轉基因苗育種方法
技術領域：
本發明屬于生物學領域，涉及農作物轉基因育種，具體涉及一種棉花轉 基因苗育種方法。
背景技術：
目前在棉花轉基因育種中，外源基因的受體大多是細胞、組織、器官 等。受體通常需進行組織培養，經體細胞再生形成植株(無菌苗)。這種育 種方法形成的苗一般生長不夠健壯，移栽時由于根系發育較差而不易成活， 是棉花轉基因育種的限制因素之一。若采用嫁接法可以很好地解決這個問 題，大大地加快了轉基因育種的進程。

發明內容
本發明的目的就是針對現有技術的不足，提供一種棉花轉基因苗育種方 法，該方法將棉花轉基因無菌苗嫁接到健壯棉苗上，克服棉花轉基因苗根系 不發達且發育羸弱的現象，大大提高棉花轉基因苗的成活率。
本發明的具體步驟如下
步驟(l)在花盆中裝入富含有機質的土壤，用水澆透，在土壤中播種棉 種，將長出2 4片真葉時的棉苗作為預備砧木；
步驟(2)用組織培養的方法，將棉花轉基因后的受體培養成的根系羸弱
但其它器官發育正常的組培無菌苗作為接穗；
步驟(3)將作為接穗的組培無菌苗嫁接到作為預備砧木的棉苗上，育成
健壯的棉花轉基因植株，具體方法是①用手術刀去掉預備砧木的頂端部 分，保留下部1 2片真葉；②從子葉節正中沿下胚軸向下將預備砧木頂部劈
開1 2 cm作為砧木；(D將接穗下端削成和上述砧木切口相吻合的鍥形，并
插入砧木中(注意切面要光滑整齊)，用細線綁緊，花盆外面罩一層塑料薄 膜保濕，以防蒸發太快造成接穗萎蔫影響成活率，將花盆置于遮蔭棚內，溫度保持在20 3(TC，并保持通風；@6 8天后，接穗開始生長時去掉薄膜；
再經過10 20天去除細線，去除細線后3 5天內逐天增加光照時間1 2小 時，完成育種。
本發明方法通過組織培養棉花轉基因受體，然后將轉基因無菌苗嫁接到 正常發芽的健壯棉苗上，從而育成健壯的棉花轉基因植株。這種改良的棉花 轉基因育種方法，其優點是利用嫁接技術并借助正常發芽棉苗的健壯根系， 大大加快了棉花轉基因育種的進程。
具體實施例方式
下面結合實施例對本發明作詳細說明。 實施例1
歩驟(l)在花盆中裝入富含有機質的土壤，用水澆透，在土壤中播種棉
種，將長出2片真葉時的棉苗作為預備砧木；
步驟(2)用組織培養的方法，將棉花轉基因后的受體培養成的根系羸弱 但其它器官發育正常的組培無菌苗作為接穗；
步驟(3)將作為接穗的組培無菌苗嫁接到作為預備砧木的棉苗上，育成 健壯的棉花轉基因植株，具體方法是①用手術刀去掉預備砧木的頂端部 分，保留下部1片真葉；②從子葉節正中沿下胚軸向下將預備砧木頂部劈開 1 cm作為砧木；(D將接穗下端削成和上述砧木切口相吻合的鍥形，并插入砧
木中(注意切面要光滑整齊)，用細線綁緊，花盆外面罩一層塑料薄膜保
濕，以防蒸發太快造成接穗萎蔫影響成活率，將花盆置于遮蔭棚內，溫度保
持在2CTC，并保持通風；④8天后，接穗開始生長時去掉薄膜；再經過10 天去除細線，去除細線后5天內逐天增加光照時間1小時，完成育種。 實施例2
步驟(l)在花盆中裝入富含有機質的土壤，用水澆透，在土壤中播種棉 種，將長出3片真葉時的棉苗作為預備砧木；
步驟(2)用組織培養的方法，將棉花轉基因后的受體培養成的根系羸弱 但其它器官發育正常的組培無菌苗作為接穗；
步驟(3)將作為接穗的組培無菌苗嫁接到作為預備砧木的棉苗上，育成健壯的棉花轉基因植株，具體方法是①用手術刀去掉預備砧木的頂端部 分，保留下部2片真葉；②從子葉節正中沿下胚軸向下將預備砧木頂部劈開 1.5cm作為砧木；③將接穗下端削成和上述砧木切口相吻合的鍥形，并插入 砧木中(注意切面要光滑整齊)，用細線綁緊，花盆外面罩一層塑料薄膜保 濕，以防蒸發太快造成接穗萎蔫影響成活率，將花盆置于遮蔭棚內，溫度保 持在25°C，并保持通風； 7天后，接穗開始生長時去掉薄膜；再經過15
天去除細線，去除細線后4天內逐天增加光照時間1.5小時，完成育種。 實施例3
步驟(l)在花盆中裝入富含有機質的土壤，用水澆透，在土壤中播種棉
種，將長出4片真葉時的棉苗作為預備砧木；
步驟(2)用組織培養的方法，將棉花轉基因后的受體培養成的根系羸弱 但其它器官發育正常的組培無菌苗作為接穗；
步驟(3)將作為接穗的組培無菌苗嫁接到作為預備砧木的棉苗上，育成
健壯的棉花轉基因植株，具體方法是①用手術刀去掉預備砧木的頂端部
分，保留下部l片真葉；②從子葉節正中沿下胚軸向下將預備砧木頂部劈開2 cm作為砧木；③將接穗下端削成和上述砧木切口相吻合的鍥形，并插入砧木 中(注意切面要光滑整齊)，用細線綁緊，花盆外面罩一層塑料薄膜保濕，
以防蒸發太快造成接穗萎蔫影響成活率，將花盆置于遮蔭棚內，溫度保持在
30°C，并保持通風；④6天后，接穗開始生長時去掉薄膜；再經過20天去除 細線，去除細線后3天內逐天增加光照時間2小時，完成育種。
權利要求
1、一種棉花轉基因苗育種方法，其特征在于該方法的具體步驟是步驟(1)在花盆中裝入富含有機質的土壤，用水澆透，在土壤中播種棉種，將長出2～4片真葉時的棉苗作為預備砧木；步驟(2)用組織培養的方法，將棉花轉基因后的受體培養成組培無菌苗作為接穗；步驟(3)將作為接穗的組培無菌苗嫁接到作為預備砧木的棉苗上，育成健壯的棉花轉基因植株，具體方法是①用手術刀去掉預備砧木的頂端部分，保留下部1～2片真葉；②從子葉節正中沿下胚軸向下將預備砧木頂部劈開1～2cm作為砧木；③將接穗下端削成和上述砧木切口相吻合的鍥形，并插入砧木中，用細線綁緊，花盆外面罩一層塑料薄膜保濕；將花盆置于遮蔭棚內，溫度保持在20～30℃，并保持通風；④6～8天后，接穗開始生長時去掉薄膜；再經過10～20天去除細線，去除細線后3～5天內逐天增加光照時間1～2小時，完成育種。
全文摘要
本發明涉及一種棉花轉基因苗育種方法。目前育種方法形成的苗生長不夠健壯，移栽時由于根系發育較差而不易成活。本發明是在花盆中裝入富含有機質的土壤，用水澆透，在土壤中播種棉種，將長出2～4片真葉時的棉苗作為預備砧木；然后用組織培養的方法，將棉花轉基因后的受體培養成的根系羸弱但其它器官發育正常的組培無菌苗作為接穗；再將作為接穗的組培無菌苗嫁接到作為預備砧木的棉苗上，育成健壯的棉花轉基因植株。本發明方法將棉花轉基因無菌苗嫁接到健壯棉苗上，克服棉花轉基因苗根系不發達且發育羸弱的現象，大大提高棉花轉基因苗的成活率。
文檔編號A01H1/00GK101558736SQ20091009877
公開日2009年10月21日 申請日期2009年5月14日 優先權日2009年5月14日
發明者密 倪, 劉英新, 張海平, 文國吉, 王學德, 袁淑娜, 邵明彥 申請人:浙江大學