專利名稱：一種盾葉薯蕷三倍體植株再生的方法
技術領域：
本發明涉及一種多倍體植物再生方法，特別是一種盾葉薯蕷三倍體植株再生的方法。
背景技術：
盾葉薯蕷既有食用價值，還有藥用價值。盾葉薯蕷的皂素含量是薯蕷科中含量最高的植物。因此，盾葉薯蕷在醫藥界有“藥用黃金”的美稱。目前，在盾葉薯蕷的人工栽培上，多以塊莖作為繁殖材料，少部分用種子作繁殖材料，二者均難以滿足當前生產的迫切要求。因此，選擇并快速繁殖皂素含量高的優良單株在盾葉薯蕷栽培中具有十分重要的意義。 多倍體植株因為染色體的增加，會表現出與二倍體植株不同的一些特征，如生長快、器官的巨型性，農業及醫藥有用的內含物增多，抗逆性增強，性成熟晚等優點。其中，三倍體植株不僅具有多倍體植株所具有的優良性狀，還因其減數分裂行為異常而多敗育，降低了植物的生殖能耗，更有利于營養生長和有效成分的積累。被子植物種子中的胚乳是由一個精核和二個極核融合而成的，屬于天然的三倍體組織。因而，通過對胚乳進行培養從而獲得三倍體再生植株的技術進行研究，就能夠獲得產量、皂素含量均較高的新品種。

發明內容
本發明目的是提供一種產量高和品質優的一種盾葉薯蕷三倍體植株再生的方法。 本發明的技術方案是，一種盾葉薯蕷三倍體植株再生的方法，其特征在于盾葉薯蕷胚乳愈傷組織的誘導形成和繼代培養，取盾葉薯蕷種子，在無菌條件下進行滅菌，在解剖鏡下剝離出無菌胚乳，接種在MS+2，4-D 0. 5 ang/L+6-BA 0. 5 2. Omg/L的培養基上，在培養室進行培養，誘導形成愈傷組織；盾葉薯蕷胚乳愈傷組織的再分化將上述愈傷組織在在無菌條件下接種在MS+6-BA 2. 0 3. Omg/L+NAA 0. 1 0. 4mg/L+KT0 0. 5mg/L的再生培養基上，在培養室進行培養，獲得再生植株；盾葉薯蕷再生植株的快速繁殖將再生植株切成帶芽莖段，接禾中在MS+6-BA1. 5 2. 5mg/L+KT 0 1. Omg/L+NAA 0. 1 0. 5mg/L的快繁培養基上，在培養室進行培養，得到大量的再生植株，以上各步驟中的工作臺為超凈工作臺，上述各步驟培養室的培養條件為溫度25士2°C，光照時間為14h/d，光照強度為20001x。本發明與現有技術比較具有產量高和品質優的的顯著特點。
具體實施例方式結合以上實施例對本發明作進一步的說明，本發明有以下步驟(1).盾葉薯蕷胚乳愈傷組織的誘導形成和繼代培養從田間盾葉薯蕷的植株上選取生長狀態較好的種子，在超凈工作臺上對其進行滅菌，在解剖鏡下完整的剝離出無菌胚乳，并將其接種在MS+2，4-D 0. 5 ang/L+6-BA 0. 5 2. Omg/L的培養基上，培養后發現，誘導形成的淡黃色愈傷組織，顆粒透亮，分散性好，疏松易脆，濕潤，生長迅速，適宜作為長期繼代培養的材料。
(2).盾葉薯蕷胚乳愈傷組織的再分化(再生植株的獲得)在超凈工作臺上，將I型愈傷組織在接種在MS+6-BA 2. 0 3. Omg/L+NAA 0. 1 0. 4mg/L+KT O 0. 5mg/L的再分化培養基上，在培養室條件下進行培養，多次繼代后，可獲得再生植株。(3).盾葉薯蕷再生植株的快速繁殖在超凈工作臺上，將胚乳愈傷組織再分化形成的再生植株切成2 3cm的帶芽莖段，接種在 MS+6-BA L 5 2. 5mg/L+KT O 1. Omg/L+NAA 0. 1 0. 5mg/L 的快繁培養基中， 在培養室條件下進行培養，30d時，可獲得大量再生植株。以上各步培養條件均為溫度25士2°C，光照時間為14h/d，光照強度為20001x。盾葉薯蕷三倍體再生植株的鑒定采用觀察法、氣孔法和染色體鑒定法對獲得的再生植株進行鑒定，確定其為三倍體植株。其中，觀察法發現三倍體與二倍體在形態方面有明顯的區別，如矮化，莖桿粗壯，葉片較大且變厚，葉色加深等現象；氣孔法發現三倍體再生植株葉片的氣孔數量顯著低于二倍體植株葉片的氣孔數量，而氣孔的長、寬則顯著高于二倍體植株葉片的氣孔長和寬；染色體鑒定法則從染色體角度確認了由胚乳而來的再生植株染色體為3n = 30。
權利要求
1. 一種盾葉薯蕷三倍體植株再生的方法，其特征在于盾葉薯蕷胚乳愈傷組織的誘導形成和繼代培養，取盾葉薯蕷種子，在無菌條件下進行滅菌，在解剖鏡下剝離出無菌胚乳， 接種在MS+2，4-D 0. 5 ang/L+6-BAO. 5 2. Omg/L的培養基上，在培養室進行培養，誘導形成愈傷組織；盾葉薯蕷胚乳愈傷組織的再分化將上述愈傷組織在在無菌條件下接種在 MS+6-BA 2. 0 3. Omg/L+NAA 0. 1 0. 4mg/L+KT 0 0. 5mg/L 的再生培養基上，在培養室進行培養，獲得再生植株；盾葉薯蕷再生植株的快速繁殖將再生植株切成帶芽莖段，接種在 MS+6-BA 1. 5 2. 5mg/L+KT 0 1. Omg/L+NAA 0. 1 0. 5mg/L 的快繁培養基上，在培養室進行培養，得到大量的再生植株，以上各步驟中的工作臺為超凈工作臺，上述各步驟培養室的培養條件為溫度25士2°C，光照時間為14h/d，光照強度為20001x。
全文摘要
一種盾葉薯蕷三倍體植株再生的方法，取盾葉薯蕷種子，在無菌條件下進行滅菌，在解剖鏡下剝離出無菌胚乳，接種在MS+2，4-D 0.5～2mg/L+6-BA 0.5～2.0mg/L的培養基上，在培養室進行培養，誘導形成愈傷組織；將上述愈傷組織在在無菌條件下接種在MS+6-BA 2.0～3.0mg/L+NAA 0.1～0.4mg/L+KT 0～0.5mg/L的再生培養基上，在培養室進行培養，獲得再生植株；將再生植株切成帶芽莖段，接種在MS+6-BA 1.5～2.5mg/L+KT 0～1.0mg/L+NAA 0.1～0.5mg/L的快繁培養基上，在培養室進行培養，得到大量的再生植株，以上各步驟中的工作臺為超凈工作臺，上述各步驟培養室的培養條件為溫度25±2℃，光照時間。本發明具有產量高和品質優。
文檔編號A01H4/00GK102388799SQ201110209569
公開日2012年3月28日 申請日期2011年7月19日 優先權日2011年7月19日
發明者劉永康, 張曉麗, 李明軍, 趙喜亭, 郭婧, 陳明霞 申請人:河南師范大學