專利名稱：一種地黃多倍體誘導(dǎo)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物選育方法，特別是一種地黃多倍體誘導(dǎo)方法。
背景技術(shù)：
地黃，特別是懷地黃，具有很好的藥用價(jià)值。由于多種病蟲害，導(dǎo)致其產(chǎn)量降低，品質(zhì)退化。因而，優(yōu)良品種的選育已成為懷地黃生產(chǎn)亟待解決的問題。多倍體的巨大型效應(yīng)， 不僅使植株具有巨大的營(yíng)養(yǎng)器官，更高的營(yíng)養(yǎng)成分含量，同時(shí)它對(duì)逆境的抗耐性也增強(qiáng)。對(duì)于藥用植物來說，多倍體植株由于染色體的加倍，藥用成分的含量也會(huì)有所增加，其中活性成分的含量也會(huì)相應(yīng)增加。同時(shí)染色體加倍還增強(qiáng)了多倍體植株的生態(tài)適應(yīng)性及對(duì)逆境的抗耐性。本實(shí)驗(yàn)以懷地黃試管苗為材料，研究不同秋水仙素濃度及處理時(shí)間對(duì)懷地黃多倍體誘導(dǎo)的影響，并從細(xì)胞學(xué)方面對(duì)其進(jìn)行鑒定，尋找懷地黃多倍體誘導(dǎo)的有效方法，為懷地黃優(yōu)良品種的選育提供新的途徑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種品質(zhì)優(yōu)和抗耐性強(qiáng)的一種地黃多倍體誘導(dǎo)方法。實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)方案是，一種地黃多倍體誘導(dǎo)方法，其特征在于有以下步驟(1)將懷地黃試管苗切除葉片后的帶芽莖段在快繁培養(yǎng)基MS+NAA 0. 01 0. 05mg/L+6-BA 0. 05 0. 5mg/L中培養(yǎng)4 5d，(2)然后放入濃度為0%、0. 02%,0. 05%,0. 08%,0. 的秋水仙素溶液中，浸泡時(shí)間為24h、48h、72h，浸泡后用無菌水沖洗干凈后接種到MS培養(yǎng)基上， 12h · d-1光照下培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度均為(28士2)°C，(3)將形態(tài)明顯變異的試管苗帶芽莖段接種到MS+NAA 0. 01 0. 05mg/L+6-BA 0. 05 0. 5mg/L培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)2 3次后，即可得到地黃多倍體試管苗。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)比較多倍體誘導(dǎo)的地黃的品質(zhì)優(yōu)良且抗耐性較強(qiáng)的顯著優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式結(jié)合下述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明(1)懷地黃多倍體的誘導(dǎo)將懷地黃試管苗切除葉片后的帶芽莖段在快繁培養(yǎng)基MS+NAA0. 01 0. 05mg/ L+6-BA 0. 05 0. 5mg/L 中培養(yǎng) 4 5d。然后放入濃度為 0 %、0. 02 %、0. 05 %、0. 08 %、 0. 的秋水仙素溶液中，浸泡時(shí)間為24h、48h、72h。浸泡后用無菌水沖洗干凈后接種到MS 培養(yǎng)基上，12h · Cf1光照下培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度均為(28士2) °C。將形態(tài)明顯變異的試管苗帶芽莖段接種到MS+NAA 0. 01 0. 05mg/L+6-BA 0. 05 0. 5mg/L培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)2 3次， 20d后進(jìn)行初步的形態(tài)學(xué)觀察，初步確定秋水仙素濃度為0. 處理時(shí)間為24h時(shí)，誘導(dǎo)效果最好，存活率達(dá)29. 0 %，誘導(dǎo)率44. 44%。(2)多倍體的形態(tài)鑒定變異株與對(duì)照相比，其葉片寬而大，邊緣有缺刻，葉色濃綠，根短而粗壯，并出現(xiàn)輕
3微木質(zhì)化，根據(jù)這些表型特征對(duì)變異材料進(jìn)行初選。(3)多倍體的氣孔鑒定撕取植株基部向上第2 3葉片的下表皮制片，在OLYMPUS顯微鏡下觀察并測(cè)量氣孔大小，隨機(jī)分別測(cè)定50個(gè)對(duì)照和變異株氣孔的長(zhǎng)徑和短徑，計(jì)算其平均值，發(fā)現(xiàn)變異植株的氣孔顯著增大。(4)多倍體的染色體鑒定取氣孔顯著增大的變異植株30株，每株隨機(jī)取白色根尖作試材進(jìn)行染色體觀察。 采用改良苯酚品紅染色法制片，在顯微鏡下觀察并攝像。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對(duì)照植株染色體數(shù)目是 2n = 56，變異植株的染色體數(shù)目是2n = 112，這說明通過試驗(yàn)獲得了四倍體。
權(quán)利要求
1. 一種地黃多倍體誘導(dǎo)方法，其特征在于有以下步驟(1)將懷地黃試管苗切除葉片后的帶芽莖段在快繁培養(yǎng)基MS+NAA 0. 01 0. 05mg/L+6-BA 0. 05 0. 5mg/L中培養(yǎng)4 5d，(2)然后放入濃度為0%、0.02%、0.05%、0.08%、0.1%的秋水仙素溶液中，浸泡時(shí)間為24h、48h、72h，浸泡后用無菌水沖洗干凈后接種到MS培養(yǎng)基上，12h · cf1光照下培養(yǎng)， 培養(yǎng)溫度均為(28士2)°C，(3)將形態(tài)明顯變異的試管苗帶芽莖段接種到MS+NAA0. 01 0. 05mg/L+6-BA 0. 05 0. 5mg/L培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)2 3次后，即可得到地黃多倍體試管田ο
全文摘要
一種地黃多倍體誘導(dǎo)方法，(1)將懷地黃試管苗切除葉片后的帶芽莖段在快繁培養(yǎng)基MS+NAA 0.01～0.05mg/L+6-BA 0.05～0.5mg/L中培養(yǎng)4～5d，(2)然后放入濃度為0％、0.02％、0.05％、0.08％、0.1％的秋水仙素溶液中，浸泡時(shí)間為24h、48h、72h，浸泡后用無菌水沖洗干凈后接種到MS培養(yǎng)基上，12h·d-1光照下培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度均為(28±2)℃，(3)將形態(tài)明顯變異的試管苗帶芽莖段接種到MS+NAA 0.01～0.05mg/L+6-BA0.05～0.5mg/L培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)2～3次后，即可得到地黃多倍體試管苗。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)比較多倍體誘導(dǎo)的地黃的品質(zhì)優(yōu)良且抗耐性較強(qiáng)。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102318556SQ20111020957
公開日2012年1月18日 申請(qǐng)日期2011年7月19日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月19日
發(fā)明者張曉麗, 李明軍, 王建軍, 趙喜亭, 陳明霞, 龔玉佳 申請(qǐng)人:河南師范大學(xué)