專利名稱：杭白菊多倍體優(yōu)良品種的培育和一步成苗快繁技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種農(nóng)業(yè)生物新技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及ー種杭白菊多倍體優(yōu)良品種的培育和一歩成苗快繁技木。
背景技術(shù)：
菊花為菊科植物菊Chrysanthemum morifolium Ramat的干燥頭狀花序。菊花入藥歷史悠久，為常用大宗中藥材品種，同時(shí)又是藥食兩用，國內(nèi)外市場需求量越來越大，目前藥用的四大名菊有杭白菊、貢菊、滁菊和毫菊，分布于大江南北，其中杭白菊的生產(chǎn)量，市場需求量最大。但是目前杭白菊品種退化嚴(yán)重，為解決菊花品種退化問題、提高菊花藥材的產(chǎn)量和質(zhì)量，我們應(yīng)用組織培養(yǎng)技術(shù)首先對杭白菊進(jìn)行了莖尖培養(yǎng)脫病毒技術(shù)的研究，接著在無菌離體條件下，進(jìn)行了杭白菊多倍體的誘導(dǎo)和選育研究，并對誘導(dǎo)獲得的株系的產(chǎn)量性狀，化學(xué)成分含量和若干生理指標(biāo)進(jìn)行了測定，前后經(jīng)過8年的不懈努力，最終選育出了高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的杭白菊多倍體優(yōu)良品種，同時(shí)為了加快優(yōu)良品種的生產(chǎn)應(yīng)用推廣工作，研究成功了誘導(dǎo)杭白菊產(chǎn)生大量叢生芽的培養(yǎng)基，研究成功了試管苗一歩法培育技術(shù)，為杭白菊優(yōu)良品種的大面積推廣應(yīng)用，降低生產(chǎn)成本，提高經(jīng)濟(jì)效益提供了技術(shù)的可行性。

發(fā)明內(nèi)容
本專利包括以下4個(gè)方面的技術(shù)創(chuàng)新1.杭白菊改良熱處理脫病毒技術(shù)杭白菊是藥食兩用經(jīng)濟(jì)作物，各地發(fā)展很快，但是杭白菊很容易感染多種病毒病， 感染了病毒病的杭白菊品種退化，葉子皺縮，生長緩慢，花一年比一年小、畸形，品質(zhì)差，一般減產(chǎn)30-80%。并逐年加重。杭白菊的經(jīng)濟(jì)效益大幅度下降，嚴(yán)重地阻礙了杭白菊生產(chǎn)的發(fā)展。目前對病毒病還沒用有效的農(nóng)藥進(jìn)行防治，即使有一些農(nóng)藥可用，但是病毒病防治效果很差，還往往引起農(nóng)藥殘留超標(biāo)，病毒病已經(jīng)成為杭白菊生產(chǎn)的“癌癥”。對于杭白菊病毒病，我們研究成功了本專利的第一項(xiàng)技術(shù)一杭白菊改良熱處理脫病毒技術(shù)；應(yīng)用本專利技術(shù)脫病毒效果可以達(dá)到90%以上，培育出來的脫毒杭白菊在各地生產(chǎn)試驗(yàn)中均表現(xiàn)出明顯的增產(chǎn)效果，增產(chǎn)效果達(dá)到30-50%左右，一般杭白菊感病毒愈嚴(yán)重，應(yīng)用脫病毒苗后的增產(chǎn)效果愈明顯。2.杭白菊多倍體的誘導(dǎo)和選育技術(shù)在杭白菊脫病毒技術(shù)成功的基礎(chǔ)上，為了進(jìn)一步提高杭白菊的產(chǎn)量和質(zhì)量，進(jìn)行了培育杭白菊優(yōu)良品種的研究，我們進(jìn)行了無菌條件下的杭白菊多倍體的誘導(dǎo)和選育，形成了本專利技術(shù)的第2項(xiàng)技術(shù)一杭白菊多倍體的誘導(dǎo)和選育技木，研究結(jié)果表明菊花從生芽經(jīng)0. 2%秋水仙堿溶液處理3 后接入培養(yǎng)基中誘導(dǎo)多倍體的效率最高，達(dá)到13. 3%0 通過根尖染色體顯微鑒定；通過3年的田間試驗(yàn)選育工作，成功地選育出了高產(chǎn)，優(yōu)質(zhì)的杭白菊多倍體優(yōu)良品種，產(chǎn)量可以比二倍體脫病毒苗進(jìn)ー步提高30-50%?？梢蕴峁┥a(chǎn)上示范推廣應(yīng)用。
3.誘導(dǎo)杭白菊產(chǎn)生大量從生芽的培養(yǎng)基配方杭白菊脫病毒，多倍體優(yōu)良品種培育成功后，為了在生產(chǎn)上盡快推廣應(yīng)用，需要解決優(yōu)良品種種苗的快速繁殖的技術(shù)問題，才能夠在短時(shí)間內(nèi)繁殖才大量優(yōu)質(zhì)種苗提供生產(chǎn)上推廣應(yīng)用，為此經(jīng)過大量的培養(yǎng)基篩選試驗(yàn)，得到了杭白菊試管苗大量叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，得到了最佳杭白菊繁殖培養(yǎng)基配方，(MS+BA0. 2-1. 0mg/L+IAA0. 05-0. 5mg/L)；應(yīng)用該培養(yǎng)基配方，毎月杭白菊的繁殖速度可以達(dá)到20-30倍，為杭白菊優(yōu)良品種大面積生產(chǎn)奠定
/ ^fl LD O4.試管苗一歩法培育技術(shù)在以上研究工作的基礎(chǔ)上，杭白菊優(yōu)良品種試管苗可以在實(shí)驗(yàn)室達(dá)到エ廠化生產(chǎn)水平，但是每一株試管苗還是需要經(jīng)過2-3次培養(yǎng)，經(jīng)過2-3個(gè)月的培養(yǎng)才能夠生產(chǎn)出來， 為了進(jìn)一歩降低成本，提高生產(chǎn)應(yīng)用的可行性，提高杭白菊優(yōu)良品種推廣應(yīng)用的經(jīng)濟(jì)效益， 我們進(jìn)ー步進(jìn)行了培養(yǎng)基的簡化試驗(yàn)，探討能否進(jìn)行一歩法(一次接種培養(yǎng)技木)快速繁殖出大量的杭白菊優(yōu)良品種試管苗，經(jīng)過大量試驗(yàn)，最后建立了一歩法培養(yǎng)技術(shù)，試管苗僅僅通過一次接種在ー步法培養(yǎng)基上(MS+IAA0. 2-1. 0mg/L+PP333 0. 1-1. Omg/L)，就能夠在30天內(nèi)先后完成繁殖和生根兩個(gè)培養(yǎng)過程。應(yīng)用一歩法培養(yǎng)技木，可以降低生產(chǎn)成本 50%，同時(shí)在時(shí)間上進(jìn)一歩加快了繁殖速度，在生產(chǎn)中具有很好的應(yīng)用前景，必將進(jìn)ー步提高了杭白菊優(yōu)良品種推廣應(yīng)用的經(jīng)濟(jì)效益。本發(fā)明的有益效果對于杭白菊病毒病，我們研究成功了本專利的第一項(xiàng)技木---杭白菊改良熱處理脫病毒技術(shù)；應(yīng)用本專利技術(shù)脫病毒效果可以達(dá)到90%以上，培育出來的脫毒杭白菊在各地生產(chǎn)試驗(yàn)中均表現(xiàn)出明顯的增產(chǎn)效果，增產(chǎn)效果達(dá)到30-50% 左右，一般杭白菊感病毒愈嚴(yán)重，應(yīng)用脫病毒苗后的增產(chǎn)效果愈明顯。本專利技術(shù)的第2項(xiàng)技木--杭白菊多倍體的誘導(dǎo)和選育技木，誘導(dǎo)多倍體的效率最高達(dá)到13. 3%。并得到了最佳杭白菊繁殖培養(yǎng)基配方，應(yīng)用該培養(yǎng)基配方，毎月杭白菊的繁殖速度可以達(dá)到20-30倍， 同時(shí)應(yīng)用一歩法培養(yǎng)技術(shù)，可以降低生產(chǎn)成本50 %。


圖1為本發(fā)明的二倍體杭白菊的染色體2η =れ=40圖2為本發(fā)明的四倍體杭白菊的染色體2n = 4x = 80圖3為本發(fā)明誘導(dǎo)杭白菊多倍體的秋水仙處理時(shí)間和效果試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)圖
具體實(shí)施例方式本專利的技術(shù)流程1.采集杭白菊優(yōu)良品種的感病毒材料(芽)。2.將杭白菊芽洗浄，置于流水沖洗10分鐘。3.小心剝?nèi)ネ獠咳~片3-5張，取出中心芽。4.對有病毒的杭白菊芽進(jìn)行40_50°C高溫，5-20分鐘短時(shí)預(yù)處理。5.對杭白菊芽先后用0. 氯化汞，2%次氯酸鈉消毒10分鐘。6.將無菌狀態(tài)的杭白菊芽，置于體視顯微鏡下，進(jìn)行無菌解剖，取出0. 2-0. 5mm的分生組織作為生長點(diǎn)。
7.在無菌條件下，將生長點(diǎn)置于最優(yōu)化的細(xì)胞啟動培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)40天。獲得無病毒愈傷組織。8.在無菌條件下，將無病毒愈傷組織轉(zhuǎn)移到最佳杭白菊繁殖培養(yǎng)基上，培養(yǎng)30天獲得大量叢生芽。9.在無菌條件下，將獲得大量叢生芽轉(zhuǎn)移到杭白菊生長培養(yǎng)基上，經(jīng)過30天的培養(yǎng)，叢生芽生長成為無根試管苗。10.在無菌條件下，將無根試管苗轉(zhuǎn)移到杭白菊生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)20天，生長成為可以移栽的試管苗。11.在無菌條件下，將無病毒愈傷組織轉(zhuǎn)移到一歩法培養(yǎng)基上，培養(yǎng)30天獲得大量有根的試管苗，提供苗床育苗。12.將杭白菊試管苗移植到育苗苗床，經(jīng)過1-2月的培育，成為脫毒杭白菊原種小
田ο13.脫毒杭白菊原種小苗移植到苗圃中進(jìn)行正常氣候條件下的繁殖，當(dāng)年可以繁殖出50-100倍的脫毒杭白菊原種大苗，提供進(jìn)行生產(chǎn)示范推廣和繁殖。
權(quán)利要求
1.ー種杭白菊多倍體優(yōu)良品種的培育和一歩成苗快繁技術(shù)，運(yùn)用高溫殺滅杭白菊芽的病毒，再取得分生組織進(jìn)行培養(yǎng)和移栽，培育出脫病毒的試管苗用于生產(chǎn)，以及誘導(dǎo)多倍體及一歩法培養(yǎng)技木。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ー種杭白菊多倍體優(yōu)良品種的培育和一歩成苗快繁技木， 其特征在于為了達(dá)到徹底的脫病毒效果，首先對有病毒的杭白菊芽需要進(jìn)行高溫40-50°C， 5-20分鐘短時(shí)預(yù)處理，由于病毒一般不耐高溫，因此我們采用高溫短時(shí)處理，達(dá)到部分殺死或者鈍化病毒的效果，同時(shí)又不會殺死杭白菊芽，或者減少對芽的傷害。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ー種杭白菊多倍體優(yōu)良品種的培育和一歩成苗快繁技木，其特征在于菊花叢生芽經(jīng)0. 2%秋水仙堿溶液處理3 后接入培養(yǎng)基中誘導(dǎo)多倍體的效率最高，達(dá)到13.3%，通過根尖染色體顯微鑒定，成功地選育出了高產(chǎn)，優(yōu)質(zhì)的杭白菊多倍體優(yōu)良品種，產(chǎn)量可以比二倍體脫病毒苗進(jìn)ー步提高30-50 %。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ー種杭白菊多倍體優(yōu)良品種的培育和一歩成苗快繁技木， 其特征在于杭白菊試管苗大量叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，得到了最佳杭白菊繁殖培養(yǎng)基配方， (MS+BA0. 2-1. 0mg/L+IAA0. 05-0. 5mg/L)；應(yīng)用該培養(yǎng)基配方，每月杭白菊的繁殖速度可以達(dá)到20-30倍。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ー種杭白菊多倍體優(yōu)良品種的培育和一歩成苗快繁技木，其特征在于建立了一歩法培養(yǎng)技術(shù)，試管苗僅僅通過一次接種在一歩法培養(yǎng)基上 (MS+IAA0. 2-1. 0mg/L+PP333 0. 1-1. Omg/L)，就能夠在30天內(nèi)先后完成繁殖和生根ニ個(gè)培養(yǎng)過程。應(yīng)用一歩法培養(yǎng)技木，可以降低生產(chǎn)成本50%，同時(shí)在時(shí)間上進(jìn)一歩加快了繁殖速度，在生產(chǎn)中具有很好的應(yīng)用前景。
全文摘要
一種杭白菊多倍體優(yōu)良品種的培育和一步成苗快繁技術(shù)，對有病毒的杭白菊芽需要進(jìn)行脫病毒處理，取出生長點(diǎn)，置于最優(yōu)化的細(xì)胞啟動培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)40天，獲得無病毒愈傷組織，經(jīng)數(shù)次移栽，獲得大量叢生芽。杭白菊叢生芽經(jīng)0.2％秋水仙堿溶液處理36h后接入培養(yǎng)基中誘導(dǎo)多倍體的效率最高，達(dá)到13.3％。本發(fā)明同時(shí)建立了一步法培養(yǎng)技術(shù)，試管苗僅僅通過一次接種在一步法培養(yǎng)基上，就能夠在30天內(nèi)先后完成繁殖和生根二個(gè)培養(yǎng)過程。應(yīng)用一步法培養(yǎng)技術(shù)，可以降低生產(chǎn)成本50％，同時(shí)在時(shí)間上進(jìn)一步加快了繁殖速度在生產(chǎn)中具有很好的應(yīng)用前景，必將進(jìn)一步提高了杭白菊優(yōu)良品種推廣應(yīng)用的經(jīng)濟(jì)效益。
文檔編號A01H4/00GK102550417SQ20121000806
公開日2012年7月11日 申請日期2012年1月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月12日
發(fā)明者高山林 申請人:天津中植科生物技術(shù)有限公司