專利名稱：一種煙草青枯病田間早期快速檢測方法
技術領域：
本發明涉及作物病害防治技術領域，具體是一種煙草青枯病田間早期快速檢測方法。
背景技術：
煙草青枯病又稱“煙瘟”，是一種典型的煙草維管束病害，近年來在我國主要產煙區呈加重發生趨勢，發病率一般在10% 25%，部分煙區高達50% 80%，甚至絕收，對煙葉產量和質量造成無法挽回的巨大損失，是制約我國煙草生產最具威脅的毀滅性病害之一。
煙草青枯病是一種細菌性病害，遇高溫多雨天氣易暴發流行。該病由青枯勞爾氏菌iRalstonia ■so/aflacea/ )侵染煙株維管束引起全株性系統癥狀,從苗期到成株期均可侵染發病。煙草青枯病發病早期，在晴天中午可見煙株一側I片葉凋萎下垂，萎蔫一側的莖上常有褪綠條斑，因萎蔫迅速葉片仍表現為綠色，故稱之為“青枯”。而煙草黑脛病的發病條件及為害癥狀與煙草青枯病十分相似，黑脛病作為一種真菌性的高溫高濕病害，同樣呈現為系統性萎蔫，特別是黑脛病田間早期癥狀也表現為煙株一側I片葉首先萎蔫、同側莖桿隱約可見褪綠條斑，這使得青枯病與黑脛病在田間早期檢測上極易造成混淆、引起誤診，以至于錯過最佳防治時期，為病害準確、及時、有效地防治造成很大困難，這也是煙草青枯病很難防治的原因之一。對于煙草青枯病的檢測，傳統上采取組織分離法，通過柯赫氏法則進行致病力測定加以明確，也可利用血清學方法如酶聯免疫吸附法(ELISA)、間接免疫熒光染色法(WAS)，以及應用分子生物學方法如核酸分子雜交、PCR擴增等技術進行特異性檢測等。但是這些方法均不同程度需要借助實驗室條件和專業技術人員才能完成，而且其操作流程較為復雜、易遭受外界因素的干擾、運行成本也極高。鑒于此，在生產中有必要建立簡便有效、操作性強的煙草青枯病田間早期檢測方法，以滿足基層技術人員及田間工作實際的需要，為煙草青枯病防治工作提供準確及時的依據。

發明內容
本發明的目的是提供一種煙草青枯病田間早期快速檢測方法，該方法基于煙草青枯病是一種細菌性病害，對早期出現的一側萎蔫葉片葉脈或發生變黑的側根維管束，通過解剖可觀察到煙草黑脛病所沒有的、特征性的菌溢現象，從而早期快速準確地檢測青枯病。本發明所提供的一種煙草青枯病田間早期快速檢測方法，通過如下步驟實現
(1)選取煙田田間具有早期癥狀的疑似病株，表現為煙株一側I 2片葉片萎蔫，萎蔫葉片的葉脈橫斷面變成褐色或黑色，根系一側1-2條側根有變黑現象；
(2)沿病健交界處剪下萎蔫葉片，保持病健交界處剪刀切口不變，將萎蔫葉片主葉脈剪成長100mm、寬15mm的條狀，或沿黑變側根病健交界處剪取長IOOmm變黑的側根；
(3)取常規玻璃試管，加水至4/5試管體積，將剪取的條狀主葉脈或變黑的側根放入盛水玻璃試管中，靜置3_5min ；(4)觀察主葉脈或側根維管束的剪刀切口處，是否有乳白色渾濁的液體溢出，即是否有細菌性病害典型的菌溢現象，若出現此現象，則為煙草青枯病。上述方法步驟(3)的常規玻璃試管，長度150mm、管口直徑25mm。
本發明的優點是應用該方法田間煙草青枯病早期檢測率明顯提高，準確率可達95%以上，可及時有效地指導田間病害防治，方法簡便明了，易掌握，具有廣泛的推廣應用價值。
具體實施例方式在重慶主要產煙區6-7月生產季節，疑似青枯病、黑脛病癥狀陸續開始出現，煙株表現為一側葉片萎蔫或一側根系變黑，而且此早期癥狀集中在田間顯現，極易引起混淆和誤檢，為有的放矢開展病害防治帶來巨大困難。從2008-2011年，經過四年的多點試驗和實踐測試，按照本發明方法進行操作，同時將所取對應樣本通過實驗室分離檢測加以印證，結果表明，選取一側萎蔫葉片主葉脈作診斷材料和依據，其準確率平均在95%以上，選取一側變黑根系作診斷材料和依據，其準確率平均在97%以上。在田間早期準確檢測的基礎上，迅速采取措施，對癥下藥使用72%農用鏈霉素開展煙草青枯病防治工作，及時有效地阻止了青枯病在田間的擴散蔓延，病害發生率與煙農常規對照相比下降了 85%，病情指數下降了 80%，單位面積煙葉產量接近健康無病煙田，其產量水平達到健康煙田的90%以上，煙田其經濟效益顯著提高。
權利要求
1.一種煙草青枯病田間早期快速檢測方法，其特征在于通過如下步驟實現 (1)選取煙田田間具有早期癥狀的疑似病株，表現為煙株ー側I 2片葉片萎蔫，萎蔫葉片的葉脈橫斷面變成褐色或黒色，根系ー側1-2條側根有變黑現象； (2)沿病健交界處剪下萎蔫葉片，保持病健交界處剪刀切ロ不變，將萎蔫葉片主葉脈剪成長100mm、寬15mm的條狀，或沿黑變側根病健交界處剪取長IOOmm變黑的側根； (3)取常規玻璃試管，加水至4/5試管體積，將剪取的條狀主葉脈或變黑的側根放入盛水玻璃試管中，靜置3_5min ； (4)觀察主葉脈或側根維管束的剪刀切ロ處，是否有乳白色渾濁的液體溢出，即是否有細菌性病害典型的菌溢現象，若出現此現象，則為煙草青枯病。
全文摘要
一種煙草青枯病田間早期快速檢測方法，基于煙草青枯病是一種細菌性病害，對早期出現的一側萎蔫葉片葉脈或發生變黑的側根維管束，通過解剖可觀察到煙草黑脛病所沒有的、特征性的菌溢現象，從而早期快速準確地檢測青枯病。應用該方法田間煙草青枯病早期檢測率明顯提高，準確率可達95%以上，可及時有效地指導田間病害防治，方法簡便明了，易掌握，具有廣泛的推廣應用價值。
文檔編號A01G7/00GK102668901SQ20121017828
公開日2012年9月19日 申請日期2012年6月1日 優先權日2012年6月1日
發明者肖崇剛, 陳國康, 馬冠華 申請人:西南大學