專利名稱：一種黃桷蘭組培育苗的方法
技術領域：
本發明涉及喬木園林植物組培育苗方法，尤其涉及一種黃桷蘭組培育苗的方法。
背景技術：
黃桷蘭(學名:Michelia champaca)為木蘭科含笑屬常綠闊葉喬木,又名白蘭花、黃玉蘭。黃桷蘭是著名的觀賞綠化植物，又是名貴的花香樹種，花葉齊觀，枝干挺撥，樹形美麗，葉色蒼翠，開花期長，花朵潔白素雅，花芳香濃郁，香味清新淡雅。黃桷蘭對二氧化硫和氯氣等有害氣體表現出較強的抗性和吸收能力，是很好的防污染綠化樹種，同時，黃桷蘭作為一種香料植物，還可以兼做香料和藥物，從中可提取出香精油與干燥香料物質用于化工和醫療方面。因此，黃桷蘭倍受人們的青睞，盆栽可布置庭院、廳堂、書房、會議室，露地栽培美化環境、凈化空氣，香化庭院居室，是一種市場需求量大的富貴樹種。然而，黃桷蘭由于雌雄蕊退化，一般都不能產生果實和種子，其自然繁殖率極低，種子少且易失活。黃桷蘭莖細胞分化程度高，繁殖再生能力差，扦插也不易生根，人們對黃桷蘭的組織培養殖技術研究還處于探索階段。目前商業上主要采取嫁接和高空壓條的方法進行繁殖，這類方法繁殖時間長、繁殖數量極其有限，遠不能滿足市場需求。

發明內容
本發明的目的是提供一種黃桷蘭組培育苗的方法，能夠大量繁殖黃桷蘭幼苗，以彌補現有技術的不足。一種黃桷蘭組培育苗的方法，包括以下步驟:選擇生長健 壯、無病蟲害當年生半木質化并帶有3-5個飽滿側芽與頂芽的黃桷蘭嫩枝。剪掉葉片，對枝條表面消毒，再流水沖洗消毒液，并刷洗去掉外植體上的粉塵；再將枝條剪成帶1-2個芽的小段，經過70%酒精浸泡、0.1%氯化汞浸泡、8%次氯酸鈉溶液浸泡，用無菌水沖洗，無菌紙吸去材料上殘留水，在無菌環境中修剪莖段，每莖段必須保留一芽，芽下端留1-1.5 cm長，切口剪成斜面，芽上端留0.5-1 cm長，切口剪平。預培養:將剪成斜面的莖段下端插入到少量B5培養基的培養瓶，每個培養瓶中只插一株莖段，防止消毒不徹底引起交叉污染，調控培養室溫度為23±2°C，光照強度為1500LX、每天光照12小時，預培養一周。初代培養:一周后，選擇無污染的莖段轉接到初代培養基上，置于溫室中進行初代培養，調控培養室溫度為23+2°C，光照強度為1500LX、每天光照12小時。經40-55天，分化出芽。繼代培養:將初代培養誘導出的芽從基部切下，轉接到繼代培養基培養，調控室內溫度為23±2°C、光照強度為2000-2500IX，光照時間為每天13小時。約35天后長出帶3_5個葉片的無根苗。繼代培養后可切取帶1-2葉莖段再次轉接到繼代培養基上，待腋芽萌發生長到3-5個葉片時，又可如此反復再次切段繁殖，實現大量組培。生根培養:將長有3-5個葉片的健壯無根小苗，轉接到生根培養基中進行生根培養，人為調控室內溫度為23±2°C、光照強度為3000-3500IX，光照時間為每天14小時，20天后開始有根長出，30— 45天后根可長到1-1.5 Cm。組培苗馴化:當生根的組培苗生長到苗高5-7公分cm或帶有3_5片時，將培養瓶打開，在常溫下煉苗3-5天，取出組培苗用清水洗凈苗上殘留培養基，在殺菌劑水溶液中浸泡10秒鐘，栽植于通透性好的煉苗基質中，澆水并搭上小拱棚遮陰保濕。最初要保持較高的空氣濕度，每隔5-6天逐漸降低空氣相對濕度，依次為90%、80%、70%、60%、50%，平時保持基質濕潤和透氣，30天后開始有新根萌發。經過組培苗馴化后可移至大棚或花盆栽培。本發明所采用的具體培養基培配方:初代培養基:B5+IBA0.1-0.5 mg /L+ 氯吡脲 1.0-1.5 mg /L+KT0.1-0.5 mg /L+ 活性炭1-2 mg /L，加入食用白糖28-35g/L、粉狀瓊脂7_10g/L，調整培養基PH為5.5-6.0。繼代培養基:B5+IBA0.1-0.5 mg /L+ 氯吡脲 1.0-2.0 mg /LKT0.1-0.5 mg /L,加入食用白糖28-35g/L、粉狀瓊脂7-10g/L，調整培養基PH為5.5-6.0。生根培養基:Β5+ΙΒΑ1.0-1.5 mg/L+IAA0.1_0.5 mg/L+GA30.2 mg/L，加入食用白糖28-35g/L、粉狀瓊脂7-10g/L，調整培養基PH為5.5-6.0。本發明所采用的各種培養基和接種工具均要經過在高壓蒸氣滅菌器中進行高溫聞壓滅菌。本發明組培苗馴化采用珍珠巖作為煉苗基質，珍珠巖洗凈，用0.5%甲醛溶液消毒處理。實施本發明，可以控制和減少外植體在初期培養階段的污染，降低和消除外植體在初代培養期間易產生褐變死亡的現象，提高了黃桷蘭組織培養成功率，實現了黃桷蘭組織培養增值效果好，數量多的組培繁殖育苗。解決了長期以來困擾人們對黃桷蘭繁殖育苗扦插不易生根成活，嫁接、壓條生根時間長、繁殖數量少，難以滿足市場對黃桷蘭苗木需求的難題。
具體實施例方式下面結合實例，對本發明做進一步的說明:實施例一:一種黃桷蘭組培育苗的方法，包括以下步驟:1、外植體的選取與消毒:選擇生長健壯、無病蟲害當年生半木質化并帶有3-5個飽滿側芽與頂芽的黃桷蘭嫩枝。回到實驗室剪掉葉片,用棉球蘸上0.2%新潔爾滅擦拭枝條表面，再流水沖洗30分鐘，其間輕輕刷洗外植體上的粉塵。再將枝條剪成帶1-2個芽的小段，先用70%酒精浸泡10秒鐘，無菌水沖洗一次，用0.1%氯化汞浸泡材料5分鐘,無菌水沖洗4次，用5%次氯酸鈉溶液浸泡5分鐘，最后用無菌水沖洗5次，每次無菌水沖洗時間為30秒，用無菌紙吸去材料上殘留水分后備用。 2、外植體接種與培養
(I)外植體預培養:在超凈工作臺上修剪莖段，每莖段必須保留一芽，芽下端留1-1.5 cm長，切口剪成斜面，芽上端留0.5-1 cm長，切口剪平，將剪成斜面的下端插入到培養基。為了有效控制雜菌污染，先單個接種到只裝有少量B5培養基的培養瓶中進行預培養，放置于溫室中培養，調控培養室溫度為23+2°C，光照強度為1500LX、每天光照12小時，預培
養一周。(2)初代培養:預培養后，選擇無污染的外植體轉接到初代培養基中進行初代培養，調控培養室溫度為23+2°C，光照強度為1500LX、每天光照12小時，經40-55天，部分外植體長出芽；初代培養基配方為B5+IBA0.1 mg /1+氯吡脲1.0 mg /L+KT-0.1 mg /L+活性炭I mg /L+抗壞血酸30 mg /I,加入食用白糖28_35g/L、粉狀瓊脂7_10g/L，調整培養基PH為5.5o(3)繼代培養:將初代培養誘導出的芽從基部切下，轉接到繼代培養基中進行繼代培養，調控室內溫度為23±2°C、光照強度為2000-2500IX，光照時間為每天13小時。約35-40天后長出帶3-5個葉片的無根苗，切取帶1-2葉莖段轉接到繼代培養基上，待腋芽萌發生長到3-5個葉片時，又可如此反復再次切段繁殖。繼代培養基為B5+IBA0.1 mg /L+氯吡脲1.0 mg /L+KT0.1 mg /L，加入食用白糖28_35g/L、粉狀瓊脂7_10g/L，調整培養基PH為
5.5o(4)生根培養:將長有3-5個葉片的健壯無根小苗，轉接到生根培養基中進行生根培養，調控室內溫度為23±2°C、光照強度為3000-3500IX，光照時間為每天14小時，25-30天后開始有根長出，45天后根長到1-1.5 Cm。生根培養基配方為B5+IBA1.0 mg /L+IAA0.1mg /L，加入食用白糖28-35g/L、粉狀瓊脂7_10g/L，調整培養基PH為5.5。3、組培苗馴化與移栽:當生根的組培苗生長到苗高5-7公分cm或帶有3-5片時，將培養瓶打開，在常溫 下煉苗3-5天，取出組培苗用清水洗凈苗上殘留培養基，在殺菌劑水溶液中浸泡10秒鐘，栽植于通透性好的煉苗基質中，澆水并搭上小拱棚遮陰保濕。最初要保持較高的空氣濕度，每隔5-6天逐漸降低空氣相對濕度，依次為90%、80%、70%、60%、50%，平時保持基質濕潤和透氣，黃桷蘭生根很慢，30天后開始有新根萌發，經過60-70天，小苗可以定植。本發明組培苗馴化采用珍珠巖作為煉苗基質，是因為珍珠巖保濕又通透性好，新買的珍珠巖就用清水淋洗干凈，用過的珍珠巖要提前用0.5%甲醛溶液消毒處理。本發明組培苗馴化所用的殺菌劑，由500倍液多菌靈溶液中加入10 mg /L吲哚丁酸配制而成，浸泡組培苗起殺菌和促進生根的作用。實施例二:一種黃桷蘭組培育苗的方法，包括以下步驟:1、外植體的選取與消毒:選擇生長健壯、無病蟲害當年生半木質化并帶有3-5個飽滿側芽與頂芽的黃桷蘭嫩枝。回到實驗室剪掉葉片,用棉球蘸上0.3%新潔爾滅擦拭枝條表面，再流水沖洗50分鐘，其間輕輕刷洗外植體上的粉塵。再將枝條剪成帶1-2個芽的小段，先用70%酒精浸泡12秒，無菌水沖洗一次，用0.5%氯化汞浸泡材料6分鐘,無菌水沖洗4次，用8%次氯酸鈉溶液浸泡5分鐘，最后用無菌水沖洗5次，每次無菌水沖洗時間為50秒，用無菌紙吸去材料上殘留水分后備用。
2、外植體接種與培養(I)外植體預培養:在無菌環境中修剪莖段，每莖段必須保留一芽，芽下端留1-1.5 Cm長，切口剪成斜面，芽上端留0.5-1 cm長，切口剪平，將剪成斜面的下端插入到培養基。為了有效控制雜菌污染，先單個接種到只裝有少量B5培養基的培養瓶中進行預培養，放置于溫室中培養，調控培養室溫度為23+2°C，光照強度為1500LX、每天光照12小時，預培
養一周。(2)初代培養:預培養一周后，選擇無污染的外植體轉接到初代培養基中進行初代培養，調控培養室溫度為23+2°C，光照強度為1500LX、每天光照12小時。經40-55天，部分外植體長出芽。初代培養基配方為B5+IBA0.25 mg /L+氯吡脲1.5 mg /L+KT-0.3 mg /L+活性炭1.5 mg /L+抗壞血酸40 mg /L,加入食用白糖28_35g/L、粉狀瓊脂7_10g/L，調整培養基PH 為 5.8。(3)繼代培養:將初代培養誘導出的芽從基部切下，轉接到繼代培養基中進行繼代培養，調控室內溫度為23±2°C、光照強度為2000-2500IX，光照時間為每天13小時。約35天后長出帶3-5個葉片的無根苗，切取帶1-2葉莖段轉接到繼代培養基上，待腋芽萌發生長至IJ 3-5個葉片時，又可如此反復再次切段繁殖。繼代培養基配方為85+四40.1啤/1+氯吡脲1.0 mg /L KT0.1 mg /L，加入食用白糖28_35g/L、粉狀瓊脂7-10g/L，調整培養基PH為5.8。(4)生根培養:將長有3-5個葉片的健壯無根小苗，轉接到生根培養基中進行生根培養，調控室內溫度為23±2°C、光照強度為3000-3500IX，光照時間為每天14小時，20天后開始有根長出，40天后根長到1-1.5 Cm。生根培養基配方為B5+IBA1.0 mg /L+IAA0.3 mg/L，加入食用白糖28-35g/L、粉狀瓊脂7-10g/L，調整培養基PH為5.8。3、組培苗馴化與移栽:當生根的組培苗生長到苗高5-7公分Cm或帶有3-5片時，將培養瓶打開，在常 溫下煉苗3-5天，取出組培苗用清水洗凈苗上殘留培養基，在殺菌劑水溶液中浸泡10秒鐘，栽植于通透性好的煉苗基質中，澆水并搭上小拱棚遮陰保濕。最初要保持較高的空氣濕度，每隔5-6天逐漸降低空氣相對濕度，依次為90%、80%、70%、60%、50%，平時保持基質濕潤和透氣，黃桷蘭生根很慢，30天后開始有新根萌發，經過60-70天，小苗可以定植。本發明組培苗馴化采用珍珠巖作為煉苗基質，是因為珍珠巖保濕又通透性好，新買的珍珠巖就用清水淋洗干凈，用過的珍珠巖要提前用0.5%甲醛溶液消毒處理。本發明組培苗馴化所用的殺菌劑，由500倍液多菌靈溶液中加入10 mg /L吲哚丁酸配制而成，浸泡組培苗起殺菌和促進生根的作用。實施例三:一種黃桷蘭組培育苗的方法，包括以下步驟:1、外植體的選取與消毒:選擇生長健壯、無病蟲害當年生半木質化并帶有3-5個飽滿側芽與頂芽的黃桷蘭嫩枝。回到實驗室剪掉葉片,用棉球蘸上0.5%新潔爾滅擦拭枝條表面，再流水沖洗60分鐘，其間輕輕刷洗外植體上的粉塵。再將枝條剪成帶1-2個芽的小段，先用70%酒精浸泡15秒鐘，無菌水沖洗一次，用1.0%氯化萊浸泡材料8分鐘,無菌水沖洗4次,用10%次氯酸鈉溶液浸泡5分鐘，最后用無菌水沖洗5次，每次無菌水沖洗時間為60秒，用無菌紙吸去材料上殘留水分后備用。
2、外植體接種與培養:(I)外植體預培養:在超凈工作臺上修剪莖段，每莖段必須保留一芽，芽下端留1-1.5 cm長，切口剪成斜面，芽上端留0.5-1 cm長，切口剪平，將剪成斜面的下端插入到培養基。為了有效控制雜菌污染，先單個接種到只裝有少量B5培養基的培養瓶中進行預培養，放置于溫室中培養，調控培養室溫度為23+2°C，光照強度為1500LX、每天光照12小時，預培
養一周。(2)初代培養:預培養一周后，選擇無污染的外植體轉接到初代培養基中進行初代培養，調控培養室溫度為23+2°C，光照強度為1500LX、每天光照12小時。經40-55天，部分外植體長出芽。初代培養基配方為B5+IBA0.5 mg /L+氯吡脲1.5 mg /L+KT0.5 mg /L+活性炭2 mg /L+抗壞血酸50 mg /L,加入食用白糖28_35g/L、粉狀瓊脂7_10g/L，調整培養基PH為 6.0。(3)繼代培養:將初代培養誘導出的芽從基部切下，轉接到繼代培養基中進行繼代培養，調控室內溫度為23±2°C、光照強度為2000-2500IX，光照時間為每天13小時。約35天后長出帶3-5個葉片的無根苗，切取帶1-2葉莖段轉接到繼代培養基上，待腋芽萌發生長到3-5個葉片時，又可如此反復再次切段繁殖。繼代培養基配方為B5+IBA0.5 mg /L+氯吡脲2 mg /L+KT0.5 mg /L,加入食用白糖28_35g/L、粉狀瓊脂7_10g/L，調整培養基PH為6.0。(4)生根培養:將長有3-5個葉片的健壯無根小苗，轉接到生根培養基中進行生根培養，調控室內溫度為23±2°C、光照強度為3000-3500IX，光照時間為每天14小時，15-20天后開始有根長出，30— 45天后根可長到1.5-2.0 Cm。生根培養基配方為B5+IBA1.5 mg /L+IAA0.5 mg /L，加入食用白糖28_35g/L、粉狀瓊脂7-10g/L，調整培養基PH為6.0。3、組培苗馴化與移栽:當生根的組培苗生長到苗高5-7公分Cm或帶有3-5片時，將培養瓶打開，在常溫下煉苗3-5天，取出組培苗用清水洗凈苗上殘留培養基，在殺菌劑水溶液中浸泡10秒鐘，栽植于通透性好的煉苗基質中，澆水并搭上小拱棚遮陰保濕。最初要保持較高的空氣濕度，每隔5-6天逐漸`降低空氣相對濕度，依次為90%、80%、70%、60%、50%，平時保持基質濕潤和透氣，黃桷蘭生根很慢，30天后開始有新根萌發，經過60-70天，小苗可以定植。本發明組培苗馴化采用珍珠巖作為煉苗基質，是因為珍珠巖保濕又通透性好，新買的珍珠巖就用清水淋洗干凈，用過的珍珠巖要提前用0.5%甲醛溶液消毒處理。本發明組培苗馴化所用的殺菌劑，由500倍液多菌靈溶液中加入10 mg /L吲哚乙丁酸配制而成，浸泡組培苗起殺菌和促進生根的作用。
權利要求
1.一種黃桷蘭組培育苗的方法，其特征是:選擇生長健壯、無病蟲害當年生半木質化并帶有3-5個飽滿側芽與頂芽的黃桷蘭嫩枝。剪掉葉片，對枝條表面消毒，再流水沖洗消毒液，并刷洗去掉外植體上的粉塵；再將枝條剪成帶1-2個芽的小段,經過酒精浸泡、0.1%氯化汞浸泡、8%次氯酸鈉溶液浸泡，用無菌水沖洗，無菌紙吸去材料上殘留水，在無菌環境中修剪莖段，每莖段必須保留一芽，芽下端留1-1.5 cm長，切口剪成斜面，芽上端留0.5-1cm長，切口剪平；將剪成斜面的莖段下端插入到少量B5培養基的培養瓶，每個培養瓶中只插一株莖段，防止消毒不徹底引起交叉污染，調控培養室溫度為23±2°C，光照強度為1500LX、每天光照12小時，預培養一周；一周后，選擇無污染的莖段轉接到初代培養基上，置于溫室中進行初代培養，調控培養室溫度為23±2°C，光照強度為1500LX、每天光照12小時。經40-55天，分化出芽；將初代培養誘導出的芽從基部切下，轉接到繼代培養基培養，調控室內溫度為23±2°C、光照強度為2000-2500IX，光照時間為每天13小時。約35天后長出帶3-5個葉片的無根苗；將長有3-5個葉片的健壯無根小苗，轉接到生根培養基中進行生根培養，人為調控室內溫度為23±2°C、光照強度為3000-3500IX，光照時間為每天14小時，20天后開始有根長出，30— 45天后根可長到1-1.5 cm ;當生根的組培苗生長到苗高5-7公分cm或帶有3-5片時，將培養瓶打開，在常溫下煉苗3-5天，取出組培苗用清水洗凈苗上殘留培養基，在殺菌劑水溶液中浸泡10秒鐘，栽植于通透性好的煉苗基質中，澆水并搭上小拱棚遮陰保濕。最初要保持較高的空氣濕度，每隔5-6天逐漸降低空氣相對濕度，依次為90%、80%、70%、60%、50%，平時保持基質濕潤和透氣，30天后開始有新根萌發；經過組培苗馴化后可移至大棚或花盆栽培。
2.如權利要求1所述的一種黃桷蘭組培育苗的方法，其特征是:繼代培養后切取帶1-2葉莖段再次轉接到繼代培養基上，待腋芽萌發生長到3-5個葉片時，如此反復切段繁殖，實現大量組培。
3.如權利要求1或2所述的一種黃桷蘭組培育苗的方法，其特征是:所采用的具體培養基培配方為:初代培養基:B5+IBA0.1-0.5 mg /L+ 氯吡脲 1.0-1.5 mg /L+KT0.1-0.5 mg /L+活性炭1-2 mg /L，加 入食用白糖28-35g/L、粉狀瓊脂7-10g/L，PH為5.5-6.0 ;繼代培養基:B5+IBA0.1-0.5 mg /L+ 氯吡脲 1.0-2.0 mg /L KT0.1-0.5 mg /L,加入食用白糖 28_35g/L、粉狀瓊脂 7-10g/L, PH 為 5.5-6.0 ;生根培養基:B5+IBA1.0-1.5 mg /L+IAA0.1-0.5 mg /L+GA30.2 mg /L，加入食用白糖28_35g/L、粉狀瓊脂7-10g/L，PH為5.5-6.0 ;組培苗馴化采用珍珠巖作為煉苗基質，珍珠巖洗凈，用0.5%甲醛溶液消毒處理。
全文摘要
一種黃桷蘭組培育苗的方法，選擇生長健壯、無病蟲害當年生半木質化并帶有3-5個飽滿側芽與頂芽的黃桷蘭嫩枝，剪掉葉片，表面消毒滅菌，剪成帶1-2個芽的小段，經過預培養、初代培養、繼代培養、生根培養、組培苗馴化后可移至大棚或花盆栽培，實施本發明，可以控制和減少外植體在初期培養階段的污染，降低和消除外植體在初代培養期間易產生褐變死亡的現象，提高了黃桷蘭組織培養成功率，實現了黃桷蘭組織培養增值效果好，數量多的組培繁殖育苗，解決了長期以來困擾人們對黃桷蘭繁殖育苗扦插不易生根成活，嫁接、壓條生根時間長、繁殖數量少，難以滿足市場對黃桷蘭苗木需求的難題。
文檔編號A01H4/00GK103238520SQ20131018824
公開日2013年8月14日 申請日期2013年5月20日 優先權日2013年5月20日
發明者何素芬, 顧大勤 申請人:宜賓云辰喬木園林有限責任公司