本發明涉及鐵皮石斛的種植技術領域，具體涉及一種可直接食用的鐵皮石斛組培苗的培養方法。
背景技術：
鐵皮石斛是九大仙草之首，具有豐富的保健價值，把鐵皮石斛的葉子和莖一起作為一種蔬菜食用，口感獨特，營養豐富，價錢比鐵皮石斛鮮條和干品便宜，更適合消費者購買。適應人群：學生、辦公室白領、女性、亞健康人群和老年人。
目前市場上的鐵皮石斛食用方法一般是鐵皮石斛鮮條或者干品進行食用，或者做成保健食品后服用，食用方法比較復雜。而鐵皮石斛種植從種子到食用一般需要3年時間，時間較長；且可采收的鐵皮石斛鮮條的食用時，還需要進一步加工。
現有技術都是等鐵皮石斛苗從組培瓶中移栽到特定的種植基質中，生長1年半左右時間，到達采收期采摘后才可食用。且在鐵皮石斛苗栽培過程中，必然需要添加一定量的肥料和農藥保證鐵皮石斛幼苗的生長，而這必然會有農藥或者重金屬的殘留，對人體有害。且種植周期較長，人工成本、種植成本較高。
技術實現要素：
為了克服現有技術中存在的缺點和不足，本發明的目的在于提供一種可直接食用的鐵皮石斛組培苗的培養方法，該培養方法培養時間短，培養得到的鐵皮石斛組培苗的根莖葉都可以直接食用；鐵皮石斛組培苗生長過程一直在組培瓶中進行，不需要添加農藥化肥，無農藥重金屬殘留，對人體絕對安全；且從種子到食用只有1年時間即可食用，大大縮短了生產周期。
本發明的目的通過下述技術方案實現：一種可直接食用的鐵皮石斛組培苗的培養方法，包括如下步驟：
（1）配制培養基；分別配制原球莖培養基和母苗生根苗培養基，滅菌，備用；
（2）原球莖培養：取成熟的鐵皮石斛種子，消毒后無菌播種至原球莖培養基中培養，得到原球莖；
（3）原球莖轉接：取原球莖粒接種到母苗生根苗培養基中培養，長出母苗；
（4）生根壯苗：取母苗，剔凈培養基和長根，得到獨立的單株苗，接種到母苗生根苗培養基中培養，待單株苗長到5-8cm、且均勻分布有3-4條根時出瓶，得到可直接食用的鐵皮石斛組培苗。
優選的，所述步驟（1）中，每升原球莖培養基包括如下組分：
只含大量元素的?MS培養液 100-150g/L
有機添加物 100-150g/L
瓊脂粉 5-9g/L
蔗糖 25-35g/L
活性炭 0.5-1.5g/L；
其中，所述有機添加物是由山藥、紅薯和芋頭以重量比0.8-1.2：0.4-0.6：0.4-0.6制得的提取物。
本發明的原球莖培養基通過采用活性炭，可吸附代謝過程中產生的廢棄物，促進鐵皮石斛的形態發生和器官形成。
山藥、紅薯、芋頭含有比土豆含量高的生長素和細胞分裂素，天然的植物激素更有利于原球莖的生長，且對人體無害。三者復配可以充分利用三者的營養成分，幫助石斛苗生長。本發明的原球莖培養基通過采用有機添加物，富含氨基酸，維生素，植物生長調節物、酶等有機復合物成分，可以促進細胞增殖。
本發明的原球莖培養基適合鐵皮石斛食用苗原球莖的誘導、增殖、分化、生根，且生長速度快，一般1年即可達到食用標準。
優選的，所述步驟（1）中，原球莖培養基的制備方法為：按配方量稱取山藥、紅薯和芋頭清洗干凈，去皮切碎煮25-35min后，超聲波振動20-30min使營養成分完全溶出，過濾，收集濾液，得到有機添加物；將濾液加入? MS培養液中，再加入瓊脂粉、活性炭和蔗糖，用l.0mol/LNaOH或0.lmol/LHC1調節pH至5.7-5.9，制得原球莖培養基。
優選的，所述步驟（1）中，每升母苗生根苗培養基包括如下組分：
只含大量元素的?MS培養液 100-150g/L
有機添加物 100-150g/L
瓊脂粉 5-9g/L
蔗糖 25-35g/L
活性炭 0.5-1.5g/L；
其中，所述有機添加物是由山藥、紅薯和芋頭以重量比0.4-0.6：0.8-1.2：0.8-1.2制得的提取物。
本發明的母苗生根苗培養基通過采用活性炭，可吸附代謝過程中產生的廢棄物，促進鐵皮石斛的形態發生和器官形成。
山藥、紅薯、芋頭含有比土豆含量高的生長素和細胞分裂素，天然的植物激素更有利于原球莖的生長，且對人體無害。三者復配可以充分利用三者的營養成分，幫助石斛苗生長。由于母苗和生根苗的生長不需要太多的植物激素，因此母苗生根苗培養基中的山藥成分降低。本發明的母苗生根苗培養基通過采用有機添加物，富含氨基酸，維生素，植物生長調節物、酶等有機復合物成分，可以促進細胞增殖。
本發明的母苗生根苗培養基適合鐵皮石斛食用苗原球莖的誘導、增殖、分化、生根，且生長速度快，一般1年即可達到食用標準。
優選的，所述步驟（1）中，母苗生根苗培養基的制備方法為：按配方量稱取山藥、紅薯和芋頭清洗干凈，去皮切碎煮25-35min后，超聲波振動20-30min使營養成分完全溶出，過濾，收集濾液，得到有機添加物；將濾液加入? MS培養液中，再加入瓊脂粉、活性炭和蔗糖，用l.0mol/LNaOH或0.lmol/LHC1調節pH至5.7-5.9，制得母苗生根苗培養基。
優選的，所述步驟（1）中，滅菌溫度為119-123℃，壓力為0.08-0.12Mpa，時間為20-30min。
優選的，所述步驟（2）具體為：將成熟的鐵皮石斛種子，采用酒精加次氯酸鈉消毒后進行無菌播種，在原球莖培養基的組培瓶中培養2-3個月，種胚由黃綠色轉變為綠色，并逐漸形成原球莖。
優選的，所述步驟（3）具體為：在無菌條件下，用小勺輕輕刮取150-200粒原球莖，均勻接種到滅菌過的母苗生根苗培養基中培養4-6個月，原球莖長出1-2cm株高的母苗。
優選的，所述步驟（4）具體為：在無菌條件下，用已經消毒過的鑷子把母苗夾出培養瓶，用鑷子和刀剔凈培養基，長根切去，使其成為獨立單株苗，按高度4cm以上、2-4cm和1-2cm分大、中、小三檔，將單株苗由小到大的順序接種至母苗生根苗培養基瓶中培養；當單株苗長到5-8cm，每一棵單株苗上都均勻分布有3-4條根時即可出瓶，得到可直接食用的鐵皮石斛組培苗。
優選的，所述步驟（2）-（4）中，培養的光照強度值范圍2000-3000LX，每天照射11-13h，培養溫度為25±1℃。
本發明的有益效果在于：本發明的培養方法培養時間短，培養得到的鐵皮石斛組培苗的根莖葉都可以直接食用；鐵皮石斛組培苗生長過程一直在組培瓶中進行，不需要添加農藥化肥，無農藥重金屬殘留，對人體絕對安全；且從種子到食用只有1年時間即可食用，大大縮短了生產周期。
本發明采用的原球莖培養基和母苗生根苗培養基均由純天然成分組成，不含激素，對人體完全無毒無害。本發明培養得到的鐵皮石斛組培苗從組培瓶中取出，直接清洗去除培養基部分就可以直接食用，適合炒菜、涼拌、煲湯等各種食用方法。
具體實施方式
為了便于本領域技術人員的理解，下面結合實施例對本發明作進一步的說明，實施方式提及的內容并非對本發明的限定。
實施例1
一種可直接食用的鐵皮石斛組培苗的培養方法，包括如下步驟：
（1）配制培養基；分別配制原球莖培養基和母苗生根苗培養基，滅菌，滅菌溫度為119℃，壓力為0.08Mpa，時間為20min，備用；
（2）原球莖培養：將成熟的鐵皮石斛種子，采用酒精加次氯酸鈉消毒后進行無菌播種，在原球莖培養基的組培瓶中培養2個月，種胚由黃綠色轉變為綠色，并逐漸形成原球莖；
（3）原球莖轉接：在無菌條件下，用小勺輕輕刮取150粒原球莖，均勻接種到滅菌過的母苗生根苗培養基中培養4個月，原球莖長出1-2cm株高的母苗；
（4）生根壯苗：在無菌條件下，用已經消毒過的鑷子把母苗夾出培養瓶，用鑷子和刀剔凈培養基，長根切去，使其成為獨立單株苗，按高度4cm以上、2-4cm和1-2cm分大、中、小三檔，將單株苗由小到大的順序接種至母苗生根苗培養基瓶中培養；當單株苗長到5-8cm，每一棵單株苗上都均勻分布有3-4條根時即可出瓶，得到可直接食用的鐵皮石斛組培苗。
所述步驟（1）中，每升原球莖培養基包括如下組分：
只含大量元素的?MS培養液 100g/L
有機添加物 100g/L
瓊脂粉 5g/L
蔗糖 25g/L
活性炭 0.5g/L；
其中，所述有機添加物是由山藥、紅薯和芋頭以重量比0.8：0.4：0.4制得的提取物。
所述步驟（1）中，原球莖培養基的制備方法為：按配方量稱取山藥、紅薯和芋頭清洗干凈，去皮切碎煮25min后，超聲波振動20min使營養成分完全溶出，過濾，收集濾液，得到有機添加物；將濾液加入? MS培養液中，再加入瓊脂粉、活性炭和蔗糖，用l.0mol/LNaOH或0.lmol/LHC1調節pH至5.7，制得原球莖培養基。
所述步驟（1）中，每升母苗生根苗培養基包括如下組分：
只含大量元素的?MS培養液 100g/L
有機添加物 100g/L
瓊脂粉 5g/L
蔗糖 25g/L
活性炭 0.5g/L；
其中，所述有機添加物是由山藥、紅薯和芋頭以重量比0.4-0.6：0.8-1.2：0.8-1.2制得的提取物。
所述步驟（1）中，母苗生根苗培養基的制備方法為：按配方量稱取山藥、紅薯和芋頭清洗干凈，去皮切碎煮25min后，超聲波振動20min使營養成分完全溶出，過濾，收集濾液，得到有機添加物；將濾液加入? MS培養液中，再加入瓊脂粉、活性炭和蔗糖，用l.0mol/LNaOH或0.lmol/LHC1調節pH至5.7，制得母苗生根苗培養基。
所述步驟（2）-（4）中，培養的光照強度值范圍2000LX，每天照射11h，培養溫度為24℃。
實施例2
一種可直接食用的鐵皮石斛組培苗的培養方法，包括如下步驟：
（1）配制培養基；分別配制原球莖培養基和母苗生根苗培養基，滅菌，滅菌溫度為120℃，壓力為0.09Mpa，時間為22min，備用；
（2）原球莖培養：將成熟的鐵皮石斛種子，采用酒精加次氯酸鈉消毒后進行無菌播種，在原球莖培養基的組培瓶中培養2.5個月，種胚由黃綠色轉變為綠色，并逐漸形成原球莖；
（3）原球莖轉接：在無菌條件下，用小勺輕輕刮取160粒原球莖，均勻接種到滅菌過的母苗生根苗培養基中培養4.5個月，原球莖長出1-2cm株高的母苗；
（4）生根壯苗：在無菌條件下，用已經消毒過的鑷子把母苗夾出培養瓶，用鑷子和刀剔凈培養基，長根切去，使其成為獨立單株苗，按高度4cm以上、2-4cm和1-2cm分大、中、小三檔，將單株苗由小到大的順序接種至母苗生根苗培養基瓶中培養；當單株苗長到5-8cm，每一棵單株苗上都均勻分布有3-4條根時即可出瓶，得到可直接食用的鐵皮石斛組培苗。
所述步驟（1）中，每升原球莖培養基包括如下組分：
只含大量元素的?MS培養液 110g/L
有機添加物 110g/L
瓊脂粉 6g/L
蔗糖 28g/L
活性炭 0.8g/L；
其中，所述有機添加物是由山藥、紅薯和芋頭以重量比0.9：0.5：0.5制得的提取物。
所述步驟（1）中，原球莖培養基的制備方法為：按配方量稱取山藥、紅薯和芋頭清洗干凈，去皮切碎煮28min后，超聲波振動22min使營養成分完全溶出，過濾，收集濾液，得到有機添加物；將濾液加入? MS培養液中，再加入瓊脂粉、活性炭和蔗糖，用l.0mol/LNaOH或0.lmol/LHC1調節pH至5.8，制得原球莖培養基。
所述步驟（1）中，每升母苗生根苗培養基包括如下組分：
只含大量元素的?MS培養液 110g/L
有機添加物 110g/L
瓊脂粉 6g/L
蔗糖 28g/L
活性炭 0.8g/L；
其中，所述有機添加物是由山藥、紅薯和芋頭以重量比0.5：0.9：0.9制得的提取物。
所述步驟（1）中，母苗生根苗培養基的制備方法為：按配方量稱取山藥、紅薯和芋頭清洗干凈，去皮切碎煮28min后，超聲波振動22min使營養成分完全溶出，過濾，收集濾液，得到有機添加物；將濾液加入? MS培養液中，再加入瓊脂粉、活性炭和蔗糖，用l.0mol/LNaOH或0.lmol/LHC1調節pH至5.8，制得母苗生根苗培養基。
所述步驟（2）-（4）中，培養的光照強度值范圍2200LX，每天照射11.5h，培養溫度為23.5℃。
實施例3
一種可直接食用的鐵皮石斛組培苗的培養方法，包括如下步驟：
（1）配制培養基；分別配制原球莖培養基和母苗生根苗培養基，滅菌，滅菌溫度為121℃，壓力為0.1Mpa，時間為25min，備用；
（2）原球莖培養：將成熟的鐵皮石斛種子，采用酒精加次氯酸鈉消毒后進行無菌播種，在原球莖培養基的組培瓶中培養2.5個月，種胚由黃綠色轉變為綠色，并逐漸形成原球莖；
（3）原球莖轉接：在無菌條件下，用小勺輕輕刮取175粒原球莖，均勻接種到滅菌過的母苗生根苗培養基中培養3個月，原球莖長出1-2cm株高的母苗；
（4）生根壯苗：在無菌條件下，用已經消毒過的鑷子把母苗夾出培養瓶，用鑷子和刀剔凈培養基，長根切去，使其成為獨立單株苗，按高度4cm以上、2-4cm和1-2cm分大、中、小三檔，將單株苗由小到大的順序接種至母苗生根苗培養基瓶中培養；當單株苗長到5-8cm，每一棵單株苗上都均勻分布有3-4條根時即可出瓶，得到可直接食用的鐵皮石斛組培苗。
所述步驟（1）中，每升原球莖培養基包括如下組分：
只含大量元素的?MS培養液 120g/L
有機添加物 120g/L
瓊脂粉 7g/L
蔗糖 30g/L
活性炭 1g/L；
其中，所述有機添加物是由山藥、紅薯和芋頭以重量比1：0.5：0.5制得的提取物。
所述步驟（1）中，原球莖培養基的制備方法為：按配方量稱取山藥、紅薯和芋頭清洗干凈，去皮切碎煮30min后，超聲波振動25min使營養成分完全溶出，過濾，收集濾液，得到有機添加物；將濾液加入? MS培養液中，再加入瓊脂粉、活性炭和蔗糖，用l.0mol/LNaOH或0.lmol/LHC1調節pH至5.8，制得原球莖培養基。
所述步驟（1）中，每升母苗生根苗培養基包括如下組分：
只含大量元素的?MS培養液 120g/L
有機添加物 120g/L
瓊脂粉 7g/L
蔗糖 30g/L
活性炭 1g/L；
其中，所述有機添加物是由山藥、紅薯和芋頭以重量比0.5：1：1制得的提取物。
所述步驟（1）中，母苗生根苗培養基的制備方法為：按配方量稱取山藥、紅薯和芋頭清洗干凈，去皮切碎煮30min后，超聲波振動25min使營養成分完全溶出，過濾，收集濾液，得到有機添加物；將濾液加入? MS培養液中，再加入瓊脂粉、活性炭和蔗糖，用l.0mol/LNaOH或0.lmol/LHC1調節pH至5.8，制得母苗生根苗培養基。
所述步驟（2）-（4）中，培養的光照強度值范圍2500LX，每天照射12h，培養溫度為25℃。
實施例4
一種可直接食用的鐵皮石斛組培苗的培養方法，包括如下步驟：
（1）配制培養基；分別配制原球莖培養基和母苗生根苗培養基，滅菌，滅菌溫度為122℃，壓力為0.11Mpa，時間為28min，備用；
（2）原球莖培養：將成熟的鐵皮石斛種子，采用酒精加次氯酸鈉消毒后進行無菌播種，在原球莖培養基的組培瓶中培養2.5個月，種胚由黃綠色轉變為綠色，并逐漸形成原球莖；
（3）原球莖轉接：在無菌條件下，用小勺輕輕刮取190粒原球莖，均勻接種到滅菌過的母苗生根苗培養基中培養5.5個月，原球莖長出1-2cm株高的母苗；
（4）生根壯苗：在無菌條件下，用已經消毒過的鑷子把母苗夾出培養瓶，用鑷子和刀剔凈培養基，長根切去，使其成為獨立單株苗，按高度4cm以上、2-4cm和1-2cm分大、中、小三檔，將單株苗由小到大的順序接種至母苗生根苗培養基瓶中培養；當單株苗長到5-8cm，每一棵單株苗上都均勻分布有3-4條根時即可出瓶，得到可直接食用的鐵皮石斛組培苗。
所述步驟（1）中，每升原球莖培養基包括如下組分：
只含大量元素的?MS培養液 140g/L
有機添加物 140g/L
瓊脂粉 8g/L
蔗糖 32g/L
活性炭 1.2g/L；
其中，所述有機添加物是由山藥、紅薯和芋頭以重量比1.1：0.5：0.5制得的提取物。
所述步驟（1）中，原球莖培養基的制備方法為：按配方量稱取山藥、紅薯和芋頭清洗干凈，去皮切碎煮32min后，超聲波振動28min使營養成分完全溶出，過濾，收集濾液，得到有機添加物；將濾液加入? MS培養液中，再加入瓊脂粉、活性炭和蔗糖，用l.0mol/LNaOH或0.lmol/LHC1調節pH至5.8，制得原球莖培養基。
所述步驟（1）中，每升母苗生根苗培養基包括如下組分：
只含大量元素的?MS培養液 140g/L
有機添加物 140g/L
瓊脂粉 8g/L
蔗糖 32g/L
活性炭 1.2g/L；
其中，所述有機添加物是由山藥、紅薯和芋頭以重量比0.5：1.1：1.1制得的提取物。
所述步驟（1）中，母苗生根苗培養基的制備方法為：按配方量稱取山藥、紅薯和芋頭清洗干凈，去皮切碎煮32min后，超聲波振動28min使營養成分完全溶出，過濾，收集濾液，得到有機添加物；將濾液加入? MS培養液中，再加入瓊脂粉、活性炭和蔗糖，用l.0mol/LNaOH或0.lmol/LHC1調節pH至5.8，制得母苗生根苗培養基。
所述步驟（2）-（4）中，培養的光照強度值范圍2800LX，每天照射12.5h，培養溫度為24.5℃。
實施例5
一種可直接食用的鐵皮石斛組培苗的培養方法，包括如下步驟：
（1）配制培養基；分別配制原球莖培養基和母苗生根苗培養基，滅菌，滅菌溫度為123℃，壓力為0.12Mpa，時間為30min，備用；
（2）原球莖培養：將成熟的鐵皮石斛種子，采用酒精加次氯酸鈉消毒后進行無菌播種，在原球莖培養基的組培瓶中培養3個月，種胚由黃綠色轉變為綠色，并逐漸形成原球莖；
（3）原球莖轉接：在無菌條件下，用小勺輕輕刮取200粒原球莖，均勻接種到滅菌過的母苗生根苗培養基中培養6個月，原球莖長出1-2cm株高的母苗；
（4）生根壯苗：在無菌條件下，用已經消毒過的鑷子把母苗夾出培養瓶，用鑷子和刀剔凈培養基，長根切去，使其成為獨立單株苗，按高度4cm以上、2-4cm和1-2cm分大、中、小三檔，將單株苗由小到大的順序接種至母苗生根苗培養基瓶中培養；當單株苗長到5-8cm，每一棵單株苗上都均勻分布有3-4條根時即可出瓶，得到可直接食用的鐵皮石斛組培苗。
所述步驟（1）中，每升原球莖培養基包括如下組分：
只含大量元素的?MS培養液 150g/L
有機添加物 150g/L
瓊脂粉 9g/L
蔗糖 35g/L
活性炭 1.5g/L；
其中，所述有機添加物是由山藥、紅薯和芋頭以重量比1.2： 0.6： 0.6制得的提取物。
所述步驟（1）中，原球莖培養基的制備方法為：按配方量稱取山藥、紅薯和芋頭清洗干凈，去皮切碎煮35min后，超聲波振動30min使營養成分完全溶出，過濾，收集濾液，得到有機添加物；將濾液加入? MS培養液中，再加入瓊脂粉、活性炭和蔗糖，用l.0mol/LNaOH或0.lmol/LHC1調節pH至5.9，制得原球莖培養基。
所述步驟（1）中，每升母苗生根苗培養基包括如下組分：
只含大量元素的?MS培養液 150g/L
有機添加物 150g/L
瓊脂粉 9g/L
蔗糖 35g/L
活性炭 1.5g/L；
其中，所述有機添加物是由山藥、紅薯和芋頭以重量比0.6： 1.2： 1.2制得的提取物。
所述步驟（1）中，母苗生根苗培養基的制備方法為：按配方量稱取山藥、紅薯和芋頭清洗干凈，去皮切碎煮35min后，超聲波振動30min使營養成分完全溶出，過濾，收集濾液，得到有機添加物；將濾液加入? MS培養液中，再加入瓊脂粉、活性炭和蔗糖，用l.0mol/LNaOH或0.lmol/LHC1調節pH至5.9，制得母苗生根苗培養基。
所述步驟（2）-（4）中，培養的光照強度值范圍3000LX，每天照射13h，培養溫度為26℃。
上述實施例為本發明較佳的實現方案，除此之外，本發明還可以其它方式實現，在不脫離本發明構思的前提下任何顯而易見的替換均在本發明的保護范圍之內。