一種促進建蘭種子非共生萌發的方法
【專利摘要】本發明公開了一種促進建蘭種子非共生萌發的方法，通過人工授粉獲得建蘭種子，當授粉成功的果實生長到300~360天時，將種子播種在萌發培養基上進行萌發，種子萌發后形成白色或無色透明的圓型球莖，之后轉變為綠色根狀莖，培養25~30天時種子開始萌發，70天時萌發率達50~75%，從而實現了本發明的目的。本發明的優點有：種子萌發率高、萌發時間短、根狀莖質量好，實際操作性強，應用價值高等優點，對提高建蘭種子萌發效率和加快建蘭種苗生產具有非常積極的意義。
【專利說明】一種促進建蘭種子非共生萌發的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及傳統名貴花卉建蘭種子的萌發方法，具體涉及一種基于無菌播種技術的建蘭種子非共生萌發的方法，具有重要應用價值。
【背景技術】 [0002]建蘭(Cymbidiu ensifolium)又名四季蘭、夏蕙、劍蕙、秋蘭、劍葉蘭等，為蘭科 (Ocrhidacea)蘭屬(Cymbidium)多年生常綠草本植物,是國蘭中最具代表性的種類之一， 廣泛分布于東南亞各國，國內主要分布在福建、臺灣、云南、四川、安徽、廣西和廣東等省區， 分布范圍較廣。建蘭花期獨特，一年能數次開花且花期較長，是眾多國蘭中唯一能多次開花的品種，建蘭花多、別致，花型、花色都很豐富，且具有非常宜人的香味。研究發現建蘭葉片能吸附粉塵、吸收苯和甲醛等有毒氣體，被譽為“環保衛士”。與其他蘭科植物一樣， 由于生境破壞和過度采挖，野生建蘭已瀕臨滅絕，屬于“野生動植物瀕危物種國際貿易公約，，(Convention on International Trade in Endangered species of Wild Fauna and Flora, CITES)附錄I中的保護對象而被禁止貿易。
[0003]建蘭種子非常微小，胚未分化，無胚乳或僅有少量胚乳，自然萌發率極低，且所需時間特別長，一般要6-12個月或更長時間才能萌發。而通過生物技術手段對蘭科植物種子進行非共生萌發，可有效提高種子的萌發率和縮短萌發時間，有利于種苗生產取得成功，可產生良好的經濟效益。因些，通過生物技術促進建蘭種子非共生萌發可以有效提高萌發率并達到快速生產種苗的目的。

【發明內容】

[0004]本發明的目的是提供一種建蘭種子萌發率高、萌發時間短、根狀莖質量好的非共生萌發方法。
[0005]本發明選擇觀賞價值高、市場需求量較大、且適應性強的建蘭品種為材料，利用無菌播種技術對其種子進行非共生萌發研究。通過人工授粉獲得建蘭種子，當授粉成功的果實生長到30(T360天時，將種子播種在萌發培養基上進行萌發，種子萌發后形成白色或無色透明的圓型球莖，之后轉變為綠色根狀莖，培養25~30天時種子開始萌發，60天時萌發率達50~75%，從而實現了本發明的目的。
[0006]本發明一種促進建蘭種子非共生萌發的方法，包括以下具體步驟:
(1)人工授粉:在花朵開放廣2天內進行自花授粉，將同一植株不同花朵上的花粉相互授粉，同時去除唇瓣并進行套袋處理，防止外來花粉的干擾，5-7天后去除套袋，結實率 72.5~85% ；
(2)種子成熟度的選擇:授粉后采集不同生長天數的種子接種到萌發培養基上，進行萌發試驗，選擇人工授粉后生長300160天，蒴果充分膨大，果皮濃綠的果實種子為最佳材料；所述種子萌發培養基含:1/6MS、NAA6.(T10.0 mg L—1、椰子汁150~300 mL、活性炭
1.0~2.0 g L-1、蔗糖 20 g L-1、瓊脂 5.5 g L-1、pH 為 5.2 ;(3)種子播前處理:當蒴果發育到30(T360天時，整果剪下先用自來水清洗干凈，然后依次用體積分數為7(T75%的酒精溶液浸泡2-3分鐘后，用質量分數為0.2%的升汞溶液浸泡消毒15~20分鐘，再用無菌水沖冼4-6次，用無菌濾紙吸干果實表面的水分，縱向切開果實，將種子用無菌紗布包好在含有KT 0.r0.3 mg mL' IBA 0.fl mg mL—1的溶液中浸泡 4-6分鐘，再用無菌水洗2-3次；
(4)播種及培養:將處理好的種子接種到萌發培養基上，在溫度3(T32°C的黑暗條件下，培養25~50天時種子開始膨大形成無色透明或白色的圓型球莖，70天時萌發率達 50~75% ;所述種子萌發培養基含:1/6MS、NAA6.(Tl0.0 mg L'椰子汁150~300 mL、活性炭 1.0~2.0 g L—1、蔗糖 20 g L'瓊脂 5.5 g L—1、pH 為 5.2。
[0007]步驟(3)中所述種子浸泡溶液優選為=KT 0.3 mg mL—1、IBA 0.2 mg mL—1。
[0008]步驟(2)和(4)中所述種子萌發培養基優選為:1/6MS、NAA8.0 mg L_\椰子汁200 mL、活性炭 1.0 g L'鹿糖 20 g L'瓊脂 5.5 g L'pH 為 5.2。
[0009]所述培養基中，NAA為1-萘乙酸。
[0010]采用本方法，建蘭種子萌發所需時間為70天左右，萌發率達5(T75%。
[0011]本發明的優點有:種子萌發率高、萌發時間短、根狀莖質量好，實際操作性強，應用價值高等優點，對提高建蘭種子萌發效率和加快建蘭種苗生產具有非常積極的意義。
【具體實施方式】
[0012]下面結合實施例對本
【發明內容】
作進一步的說明，但不是對本發明的限定。
[0013]實施例1
建蘭品種寶島仙女種子的非共生萌發方法:
(1)人工授粉:在花朵開放廣2天內進行自花授粉，將同一植株不同花朵上的花粉相互授粉，同時去除唇瓣并進行套袋處理，防止外來花粉的干擾，5天后去除套袋，結實率 79.5% ；
(2)種子成熟度的選擇:授粉120天開始每30天采集一次果實進行萌發試驗，萌發培養基為:1/6MS、NAA8.0 mg L'椰子汁 200 mL、活性炭 1.0 g L—1、蔗糖 20 g L—1、瓊脂 5.5 g L' pH為5.2，在溫度25~28°C的黑暗條件下培養，結果以人工授粉后360天的種子為最佳材料；
(3)種子播前處理:當蒴果發育到360天時，整果剪下先用自來水清洗干凈，然后依次用體積分數為75%的酒精溶液浸泡2分鐘后，用質量分數為0.2%的升汞溶液浸泡消毒20 分鐘，再用無菌水沖冼6次。用無菌濾紙吸干果實表面的水分，縱向切開果實，將種子用無菌紗布包好在含有KT 0.3 mg mL' IBA0.2 mg mL—1的溶液中浸泡5分鐘，再用無菌水洗3 次；
(4)播種及培養:將處理好的種子接種到萌發培養基上，在溫度3(T32°C的黑暗條件下，培養25~30天時種子開始膨大形成無色透明的或白色的圓型球莖，70天時萌發率達 75%;所述種子萌發培養基含:1/6MS、NAA8.0 mg L_\椰子汁200 mL、活性炭1.0 g L_\蔗糖 20 g !^、瓊脂玨』g L—1、pH 為 5.2。
[0014]實施例2
建蘭品種荷花素種子的非共生萌發方法:(1)人工授粉:在花朵開放廣2天內進行自花授粉，將同一植株不同花朵上的花粉相互授粉，同時去除唇瓣并進行套袋處理，防止外來花粉的干擾，5天后去除套袋，結實率85% ；
(2)種子成熟度的選擇:授粉120天開始每30天采集一次果實進行萌發試驗，萌發培養基為:1/6MS、NAA6.0 mg L'椰子汁 150 mL、活性炭 1.0 g L—1、蔗糖 20 g L—1、瓊脂 5.5 g L' pH為5.2，在溫度25~28°C的黑暗條件下培養，結果以人工授粉后300天的種子為最佳材料；
(3)種子播前處理:當蒴果發育到300天時，整果剪下先用自來水清洗干凈，然后依次用體積分數為70%的酒精溶液浸泡2分鐘后，用質量分數為0.2%的升汞溶液浸泡消毒15 分鐘，再用無菌水沖冼6次。用無菌濾紙吸干果實表面的水分，縱向切開果實，將種子用無菌紗布包好在含有KT 0.2 mg mL'IBA 1.0 mg mL—1的溶液中浸泡5分鐘，再用無菌水洗3 次；
(4)播種及培養:將處理好的種子接種到萌發培養基上，在溫度3(T32°C的黑暗條件下，培養4(T50天時種子開始膨大形成無色透明的或白色的圓型球莖，70天時萌發率達 50%;所述種子萌發培養基含:1/6MS、NAA6.0 mg L_\椰子汁150 mL、活性炭1.0 g L_\蔗糖 20 g !^、瓊脂玨』g L—1、pH 為 5.2。
[0015] 實施例3
建蘭品種七仙女種子的非共生萌發方法:
(1)人工授粉:在花朵開放廣2天內進行自花授粉，將同一植株不同花朵上的花粉相互授粉，同時去除唇瓣并進行套袋處理，防止外來花粉的干擾，5天后去除套袋，結實率 72.5% ；
(2)種子成熟度的選擇:授粉120天開始每30天采集一次果實進行萌發試驗，萌發培養基為:1/6MS、NAA10.0 mg L—1、椰子汁 300 mL、活性炭 2.0 g L'蔗糖 20 g L'瓊脂 5.5 g L' pH為5.2，在溫度25~28°C的黑暗條件下培養，結果以人工授粉后300天的種子為最佳材料；
(3)種子播前處理:當蒴果發育到300天時，整果剪下先用自來水清洗干凈，然后依次用體積分數為70的酒精溶液浸泡2分鐘后，用質量分數為0.2%的升汞溶液浸泡消毒15分鐘，再用無菌水沖冼6次。用無菌濾紙吸干果實表面的水分，縱向切開果實，將種子用無菌紗布包好在含有`KT 0.1 mg mL' IBA 0.1 mg mL—1的溶液中浸泡5分鐘，再用無菌水洗3 次；
(4)播種及培養:將處理好的種子接種到萌發培養基上，在溫度3(T32°C的黑暗條件下，培養3(T50天時種子開始膨大形成無色透明的或白色的圓型球莖，70天時萌發率達 56.7% ;所述種子萌發培養基含:1/6MS、NAA10.0 mg L_\椰子汁300 mL、活性炭2.0 g L' 鹿糖 20 g L'瓊脂 5.5 g L' pH 為 5.2。
【權利要求】
1.一種促進建蘭種子非共生萌發的方法，其特征在于包括以下步驟:(1)人工授粉:在花朵開放1-2天內進行自花授粉，將同一植株不同花朵上的花粉相互授粉，同時去除唇瓣并進行套袋處理，防止外來花粉的干擾，5-7天后去除套袋；(2)種子成熟度的選擇:授粉后采集不同生長天數的種子接種到萌發培養基上，進行萌發試驗，選擇人工授粉后生長300160天，蒴果充分膨大，果皮濃綠的果實種子為最佳材料；所述種子萌發培養基含:1/6MS、NAA6.0-10.0 mg L—1、椰子汁150~300 mL、活性炭 1.0~2.0 g L-1、蔗糖 20 g L-1、瓊脂 5.5 g L-1、pH 為 5.2 ;(3)種子播前處理:當蒴果發育到30(T360天時，整果剪下先用自來水清洗干凈，然后依次用體積分數為7(T75%的酒精溶液浸泡2-3分鐘后，用質量分數為0.2%的升汞溶液浸泡消毒15~20分鐘，再用無菌水沖冼4-6次，用無菌濾紙吸干果實表面的水分，縱向切開果實，將種子用無菌紗布包好在含有KT 0.r0.3 mg mL' IBA 0.fl mg mL—1的溶液中浸泡 4-6分鐘，再用無菌水洗2-3次；(4)播種及培養:將處理好的種子接種到萌發培養基上，在溫度3(T32°C的黑暗條件下，培養25~50天時種子開始膨大形成無色透明或白色的圓型球莖；所述種子萌發培養基含:1/6MS、NAA6.0~10.0 mg L'椰子汁 150~300 mL、活性炭 1.0~2.0 g I71、蔗糖 20 g L' 瓊脂 5.5 g L'pH 為 5.2。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征是:步驟(3)中所述種子播前處理溶液含:KT0.3 mg mL \ IBA 0.2 mg mL 1O
3.根據權利要求1所述的方法，其特征是:步驟(2)和(4)中所述種子萌發培養基含: 1/6MS, NAA8.0 mg L—1、椰子汁 200 mL、活性炭 1.0 g L'蔗糖 20 g L'瓊 脂 5.5 g L'pH 為 5.2。
【文檔編號】A01H4/00GK103548669SQ201310498077
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年10月22日 優先權日:2013年10月22日
【發明者】唐鳳鸞, 趙志國, 黃寧珍, 何金祥, 付傳明, 石云平 申請人:廣西壯族自治區中國科學院廣西植物研究所