一種玉竹組培葉片兩步成苗方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及生物技術領域，具體地，涉及玉竹組培葉片兩步成苗方法。
【背景技術】
[0002] 玉竹為百合科黃精屬多年生草本植物，根莖橫走，肉質黃白色密生多數須根。葉面 綠色，下面灰色。花腋生，通常1~3朵簇生。原產中國西南地區，但野生分布很廣。耐寒，亦耐 陰，喜潮濕環境，適宜生長于含腐殖質豐富的疏松土壤。《本草經集注》云〃莖干強直，似竹箭 桿，有節。〃故有玉竹之名。
[0003] 玉竹分布區在海拔約為500- 3000 m的林下或山野陰坡，玉竹根莖可供藥用，中藥 名亦為玉竹，秋季采挖，洗凈，曬至柔軟后，反復揉搓，晾曬至無硬心，曬干，或蒸透后，揉至 半透明，曬干，切厚片或段用。玉竹是黃精屬大宗藥材，具有降血糖、血脂、血壓等功效，市場 需求量巨大，開發前景廣闊。本發明旨在通過組織培養技術葉片兩步成苗法對玉竹種質資 源進行有效的繁育和保護，是目前對玉竹育苗最便捷、穩定的手段，可以節約大量的人力、 物力和場地，便于種質交換和轉移，避免有害病蟲的人為傳播，為玉竹種質資源開發利用提 供支持。

【發明內容】

[0004] 本發明目的在于提供一種玉竹組培葉片兩步成苗方法，能夠短時間內提供大量優 質適合栽培的玉竹種苗。
[0005] 為了實現本發明的上述目的，本發明提供了如下技術方案： 一種玉竹組培葉片兩步成苗法，其特征在于： (1) 葉片誘導分化不定芽培養:取玉竹幼嫩葉片，在75%乙醇中表面消毒30~45 s，無 菌水2~3次，投入0.1% Hgch 5 min,無菌水2~3次，0.1% Hgch 3 min,無菌水2~3次沖洗 干后切分為0.5 cmXl cm大小接種在誘導及分化培養基上，在溫度為21~25 °C，光照強度 1800~2600 lux,光照時間為8~10小時/天的條件下，10~15天葉片分化出不定芽； (2) 不定芽壯苗生根培養:選擇玉竹葉片分化1~1.5個月、幼嫩葉片上分化出的具有2 片以上葉子、高2~3 cm不定芽接種到壯苗生根培養基，在溫度為21~25 °C，光照強度2000 ~2800 lux，光照時間為8~10小時/天的條件下進行培養，1~2個月不定芽長至高4~6 cm的無菌苗，根長平均根數4條以上、平均根長達2.5~4cm，生根率98%。
[0006] 上述誘導及分化培養基為：以M S為基本培養基，每升添加6-芐氨基嘌呤(6-BAH ~2.0 mg、a-萘乙酸(ΝΑΑ)0·3~1.0 mg、瓊脂3.8~4.4 g和鹿糖20~25g, pH值5.8， 培養溫度為23± 2 °C，光照強度1800~2600 lux,光照時間為8~10小時/天； 上述壯苗生根培養基為：以1/2 MS為基本培養基，每升添加 ΝΑΑ0.5~1.5mg、6-BA 0.2 ~0.5、吲噪丁酸（ΙΒΑ)0·5~1.0 mg,瓊脂3.8~4.5g和蔗糖25~30g，pH值調節至 5.8〇
[0007] 采用本發明所述方法得到的種苗健壯、成活率高，能夠短時間內提供大量優質適 合栽培的玉竹種苗，并減少了配制培養基和轉瓶的步驟，節約了大量人力物力，因此簡單易 行、生產成本降低，有效解決了玉竹規模化育苗及種質資源保存問題。
【具體實施方式】
[0008] 下面結合實施例對本發明的技術方案進一步說明。
[0009] 玉竹組培葉片兩步成苗方法，包括以下步驟： (1)葉片誘導分化不定芽培養:取玉竹幼嫩葉片，在75%乙醇中表面消毒30~45 s，無 菌水2~3次，投入0.1% Hgcl2 5min,無菌水2~3次，0.1% Hgcl2 3min,無菌水2~3次沖洗干 后切分為0.5 cmXl cm大小接種在誘導及分化培養基上，在溫度為21~25°C，光照強度1800 ~2600 lux，光照時間為8~10小時/天的條件下，10~15天葉片分化出不定芽。 m :不麵W不輕MW

[0010] 最佳的不定芽誘導及分化培養基為：MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA0.3 mg/L+ KT 0.3 mg/L〇
[0011] (2)不定芽壯苗生根培養:選擇玉竹葉片分化I~I.5個月高2~3 cm不定芽接種 到壯苗生根培養基，在溫度為21~25 °C，光照強度2000~2800 lux，光照時間為8~10小 時/天的條件下進行培養，1~2個月不定芽長至高4~6 cm的無菌苗，根長平均根數4條以 上、平均根長達2.5~4cm,生根率98%。 表2 激素水TO不雜的調

[0012] 最佳的生根培養基為:MS+6-BA 0.2 mg/L+IBA 1.5 mg/L+ AC 0.5 mg/L。
[0013] 備注：6-BA(6-節氨基嘌呤），NAA(萘乙酸），KT(激動素），IBA(B引噪丁酸），AC (活性炭）。
【主權項】
1. 一種玉竹組培葉片兩步成苗方法，其特征在于： (1) 葉片誘導分化不定芽培養:取玉竹幼嫩葉片，在75%乙醇中表面消毒30~45 S，無 菌水2~3次，投入0.1% Hgcl2 5 min,無菌水2~3次，0.1% Hgcl2 3 min,無菌水2~3次沖洗 干后切分為0.5 cmXl cm大小接種在誘導及分化培養基上，在溫度為21~25 °C，光照強度 1800~2600 lux,光照時間為8~10小時/天的條件下，10~15天葉片分化出不定芽； (2) 不定芽壯苗生根培養:選擇玉竹葉片分化1~1.5個月、幼嫩葉片上分化出的具有2 片以上葉子、高2~3 cm不定芽接種到壯苗生根培養基，在溫度為21~25 °C，光照強度2000 ~2800 lux，光照時間為8~10小時/天的條件下進行培養，1~2個月不定芽長至高4~6 cm的無菌苗，根長平均根數4條以上、平均根長達2.5~4cm，生根率98%。
【專利摘要】一種玉竹組培葉片兩步成苗方法：取玉竹幼嫩葉片作為外植體進行滅菌處理，然后將其切分成0.5 cm×1 cm大小后接種到誘導及分化培養基上，1 ～1.5個月后選擇幼嫩葉片上分化出的具有2片以上葉子、高2～3 cm的不定芽苗轉接到壯苗生根培養基上，1～ 1.5個月無菌苗每株生根4條以上、根長達2.5～４ｃｍ，生根率98%。采用本發明所述方法得到的種苗健壯、成活率高，可在短期內提供大量玉竹的優質種苗，并減少了配制培養基和轉瓶的步驟，節約了大量人力物力，因此簡單易行、生產成本降低，有效解決了玉竹規模化育苗及種質資源保存問題。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號】CN105706929
【申請號】CN201610108415
【發明人】李翠, 張占江, 韋坤華, 韋瑩, 繆劍華, 李林軒, 王一諾, 肖冬
【申請人】廣西壯族自治區藥用植物園