本發明涉及菠蘿育苗技術領域，尤其涉及一種md2菠蘿生根培養基及其組培苗快繁方法。

背景技術：

md2金菠蘿果重一般1-2公斤，圓筒形，葉緣無刺，葉片細長表面光滑，且葉片數量比其他品種多10％，果皮薄，花腔淺。果肉金黃，肉質細致，纖維中，口感綿密，入口即化，風味濃郁，口感佳。特別是皮較薄而且去皮不用切溝，甜味重無需泡鹽水，去皮就可以直接食用，食用非常方便。md2金菠蘿芳香多汁，貯存期長，如果在7.5攝氏度條件下，可保存長達25天，因此是目前大宗鮮果貿易的主要外銷品種。

傳統的md2菠蘿繁殖主要靠各種營養體芽苗如頂芽、托芽、腋芽和塊莖芽進行無性繁殖，這些種苗需要在采果后對菠蘿植株施肥，等新芽長出3～4月后采收各種營養體進行種植。如今有一些其他菠蘿品種組織培養的報道，但是由于不同品種之間基因型有較大差異，不同的品種之間的組織培養方法存在較大的差異。md2菠蘿靠傳統的營養體繁殖方法其生長速度慢，繁殖系數低，短時間內無法滿足規模化種植種苗的需求，各營養體之間生長差異較大，優良遺傳性狀不穩定，且容易將母株病蟲害帶給下一代。因此，為了緩解市場md2菠蘿種苗緊缺現狀，急需提供一種md2菠蘿組培快繁技術，解決上述技術問題。

技術實現要素：

有鑒于此，本發明提供了一種md2菠蘿生根培養基及其組培苗快繁方法，所述md2菠蘿生根培養基的生根培養效果優異，通過組織培養的方式使md2菠蘿種苗得到快速繁殖。

本發明采用的技術手段如下：一種md2菠蘿生根培養基，所述md2菠蘿生根培養基中含有多效唑。

進一步的，所述md2菠蘿生根培養基包括1/2ms+iba0.5～1.0mg/l+多效唑1.0～2.0mg/l+蔗糖20g/l+瓊脂6.0～7.0g。

本發明還提供一種md2菠蘿組培苗快繁方法，首先選擇md2菠蘿吸芽、消毒，然后對其進行預培養、增殖培養、生根培養、移栽，所述生根培養基為1/2ms+iba0.5～1.0mg/l+多效唑1.0～2.0mg/l+蔗糖20g/l+瓊脂6.0～7.0g，ph值為5.5～6.0。

進一步的，所述生根培養的人工光照條件為：置于25～30℃每天光照12h，光強2000～3000lx。

進一步的，所述生根培養的自然光照條件為：置于25～30℃的室內自然光照培養。

進一步的，所述md2菠蘿吸芽消毒條件為：用0.1％的氯化汞溶液消毒15～20min。

進一步的，所述預培養的培養基為ms+6-ba3.0mg/l+iba0.2mg/l+蔗糖30g/l+瓊脂6.0～7.0g固體培養基，ph值為5.5～6.0，置于25～30℃培養10～15天，每天光照12～14h，光強2000～3000lx。

進一步的，所述增殖培養的培養基為ms+6-ba1.0～2.0mg/l+iba0.1～0.3mg/l+蔗糖30g/l+瓊脂6.0～7.0g，ph值為5.5～6.0，置于25～30℃每天光照12h，光強2000～3000lx，隨培養時間的增加，在葉腋周圍形成大量從生芽，30天轉接一次。

進一步的，所述室外移栽的具體操作為：將經過生根培養15天的苗置于室外自然光下煉苗15～20天，然后開蓋1～3天，洗凈根部培養基并移栽到沙床中假植，保持一定的空氣濕度并逐漸增加光照，1周后施肥，當組培苗長至較健壯時移栽到大田中。

進一步的，所述室外移栽的具體操作為：將經過自然光照生根培養30～45天后的苗，開蓋1～3天，洗凈根部培養基并移栽到沙床中假植，保持一定的空氣濕度并逐漸增加光照，1周后施肥，當組培苗長至較健壯時移栽到大田中。

與現有技術相比，本發明的有益效果是：本發明通過組織培養的方式使md2菠蘿種苗得到快速繁殖，繁殖速度快、數量多，可解決md2菠蘿栽培生產過程中種苗短缺問題，避開由于使用營養體直接繁殖各種弊端，而且不受季節和氣候條件影響。本發明在生根培養中加入多效唑后生根更整齊，根更粗壯，根吸收營養更好；葉片光合作用得到增強，心葉厚度和硬度增加，在移栽后能更好地保持葉片水分，抵抗細菌真菌的侵害，增強了組培苗抗逆性，移栽成活率也得到較大提高，并且可以使用自然光照進行生根培養，節省了電能，在自熱光照下培養的生根苗可直接移栽到苗圃假植，節約了煉苗的人工成本。

另外，本發明的md2菠蘿生根培養基利用1.0～2.0mg/l多效唑，結合1/2ms+iba0.5～1.0mg/l+蔗糖20g/l+瓊脂6.0～7.0g，生根更整齊，根系更粗壯，葉色濃綠，葉片光合作用得到增強，心葉厚度和硬度增加；本發明的人工光照生根培養條件能使增殖培養后生長較弱小的組培苗較自然光照培養生根更良好；本發明的自然光照生根培養條件溫度范圍為一般室內溫度范圍，保持了較好的培養效果，又減少了空調使用時間；本發明只使用0.1％的氯化汞溶液消毒15～20min，即能將污染率控制在較低水平，減少了使用其他去污劑和消毒液對外植體的損傷；本發明的經預培養步驟，污染的外植體即可被篩選出來，較高的6-ba預培養為增殖培養做準備；利用本發明的增殖培養的培養基以及培養條件，隨培養時間的增加，在葉腋周圍形成大量從生芽，30天轉接一次，md2組培苗的數量以指數級增長，種苗達到了快繁的目的。

具體實施方式

以下對本發明的原理和特征進行描述，所舉實施例只用于解釋本發明，并非用于限定本發明的范圍。

實施例1

一種md2菠蘿生根培養基，所述md2菠蘿生根培養基包括1/2ms+iba0.5mg/l+多效唑1.0mg/l+蔗糖20g/l+瓊脂6.0g。

利用上述md2菠蘿生根培養基的md2菠蘿組培苗快速繁殖方法，包括以下步驟：

(1)外植體的選擇和消毒：于晴朗天氣選取生長健壯的md2菠蘿吸芽，去除頂端分生組織周圍葉片，用0.1％的氯化汞溶液震蕩消毒15min，然后用無菌水沖洗3次，并用干燥無菌紙巾吸干表面殘留水分。

(2)吸芽預培養：將步驟(1)的頂端分生組織縱切為均勻的2塊，接種于ms+6-ba3.0mg/l+iba0.2mg/l+蔗糖30g/l+瓊脂6.0g固體培養基，ph值調節為5.5，置于25℃培養10d，每天光照12h，光強2000lx。

(3)增殖培養：將步驟(2)的分生組織再均分為二，轉接到ms+6-ba2.0mg/l+iba0.1mg/l+蔗糖30g/l+瓊脂6.0g，調節ph值為5.5，置于25℃每天光照12h，光強2000lx，隨培養時間的增加，在葉腋周圍形成大量從生芽，30d轉接一次。

(4)生根培養：將步驟(3)得到的2cm以上的無菌苗轉接到1/2ms+iba0.5mg/l+多效唑1.0mg/l+蔗糖20g/l+瓊脂6.0g，ph值為5.5，置于25℃每天光照12h，光強2000lx。

(5)室外移栽：將經過步驟(4)培養15天的苗置于室外自然光下煉苗15天，然后開蓋1天，洗凈根部培養基并移栽到沙床中假植，保持一定的空氣濕度并逐漸增加光照，移栽3d即在根部長出大量的根毛，1周后施肥，當組培苗長至較健壯時移栽到大田中。

實施例2

一種md2菠蘿生根培養基，所述md2菠蘿生根培養基包括1/2ms+iba1.0mg/l+多效唑2.0mg/l+蔗糖20g/l+瓊脂7.0g。

利用上述md2菠蘿生根培養基的md2菠蘿組培苗快速繁殖方法，包括以下步驟：

(1)外植體的選擇和消毒：于晴朗天氣選取生長健壯的md2菠蘿吸芽，去除頂端分生組織周圍葉片，用0.1％的氯化汞溶液震蕩消毒20min，然后用無菌水沖洗5次，并用干燥無菌紙巾吸干表面殘留水分。

(2)吸芽預培養：將步驟(1)的頂端分生組織縱切為均勻的2塊，接種于ms+6-ba3.0mg/l+iba0.2mg/l+蔗糖30g/l+瓊脂7.0g固體培養基，ph值調節為6.0，置于30℃培養15d，每天光照14h，光強3000lx。

(3)增殖培養：將步驟(2)的分生組織再均分為二，轉接到ms+6-ba2.0mg/l+iba0.1mg/l+蔗糖30g/l+瓊脂7.0g，調節ph值為6.0，置于約30℃每天光照12h，光強3000lx，隨培養時間的增加，在葉腋周圍形成大量從生芽，30d轉接一次。

(4)生根培養：將步驟(3)得到的2cm以上的無菌苗轉接到1/2ms+iba1.0mg/l+多效唑2.0mg/l+蔗糖20g/l+瓊脂7.0g，ph值為6.0，置于約30℃每天光照12h，光強3000lx。

(5)室外移栽：將經過步驟(4)培養15d的苗置于室外自然光下煉苗20d，然后開蓋3天，洗凈根部培養基并移栽到沙床中假植，保持一定的空氣濕度并逐漸增加光照，移栽3d即在根部長出大量的根毛，1周后施肥，當組培苗長至較健壯時移栽到大田中。

實施例3

一種md2菠蘿生根培養基，所述md2菠蘿生根培養基包括1/2ms+iba0.8mg/l+多效唑1.5mg/l+蔗糖20g/l+瓊脂6.5g。

利用上述md2菠蘿生根培養基的md2菠蘿組培苗快速繁殖方法，包括以下步驟：

(1)外植體的選擇和消毒：于晴朗天氣選取生長健壯的md2菠蘿吸芽，去除頂端分生組織周圍葉片，用0.1％的氯化汞溶液震蕩消毒18min，然后用無菌水沖洗4次，并用干燥無菌紙巾吸干表面殘留水分。

(2)吸芽預培養：將步驟(1)的頂端分生組織縱切為均勻的2塊，接種于ms+6-ba3.0mg/l+iba0.2mg/l+蔗糖30g/l+瓊脂6.5g固體培養基，ph值調節為5.8，置于28℃培養10d，每天光照13h，光強2500lx。

(3)增殖培養：將步驟(2)的分生組織再均分為二，轉接到ms+6-ba2.0mg/l+iba0.1mg/l+蔗糖30g/l+瓊脂6.5g，調節ph值為5.8，置于28℃每天光照12h，光強2500lx，隨培養時間的增加，在葉腋周圍形成大量從生芽，30d轉接一次。

(4)生根培養：將步驟(3)得到的2cm以上的無菌苗轉接到1/2ms+iba0.8mg/l+多效唑1.5mg/l+蔗糖20g/l+瓊脂6.5g，ph值為5.8，置于約28℃每天光照12h，光強2500lx。

(5)室外移栽：將經過步驟(4)培養15d的苗置于室外自然光下煉苗18d，然后開蓋2天，洗凈根部培養基并移栽到沙床中假植，保持一定的空氣濕度并逐漸增加光照，移栽3d即在根部長出大量的根毛，1周后施肥，當組培苗長至較健壯時移栽到大田中。

實施例4

一種md2菠蘿生根培養基，所述md2菠蘿生根培養基包括1/2ms+iba0.5mg/l+多效唑1.0mg/l+蔗糖20g/l+瓊脂6.0g。

利用上述md2菠蘿生根培養基的md2菠蘿組培苗快速繁殖方法，包括以下步驟：

(1)外植體的選擇和消毒：于晴朗天氣選取生長健壯的md2菠蘿吸芽，去除頂端分生組織周圍葉片，用0.1％的氯化汞溶液震蕩消毒15min，然后用無菌水沖洗3次，并用干燥無菌紙巾吸干表面殘留水分。

(2)吸芽預培養：將步驟(1)的頂端分生組織縱切為均勻的2塊，接種于ms+6-ba3.0mg/l+iba0.2mg/l+蔗糖30g/l+瓊脂6.0g固體培養基，ph值調節為5.5，置于25～30℃培養10d，每天光照12h，光強2000lx。

(3)增殖培養：將步驟(2)的分生組織再均分為二，轉接到ms+6-ba1.0mg/l+iba0.3mg/l+蔗糖30g/l+瓊脂6.0g，調節ph值為5.5，置于25℃每天光照12h，光強2000lx，隨培養時間的增加，在葉腋周圍形成大量從生芽，30d轉接一次。

(4)生根培養：將步驟(3)得到的2cm以上的無菌苗轉接到1/2ms+iba0.5mg/l+多效唑1.0mg/l+蔗糖20g/l+瓊脂6.0g，ph值為5.5，置于25～30℃的室內自然光照培養30d。

(5)室外移栽：將經過步驟(4)培養生根苗，開蓋1天，洗凈根部培養基并移栽到沙床中，保持一定的空氣濕度并逐漸增加光照，移栽3d即在根部可長出大量的根毛，1周后施肥，當組培苗長至較健壯時移栽到大田中。

實施例5

一種md2菠蘿生根培養基，所述md2菠蘿生根培養基包括1/2ms+iba1.0mg/l+多效唑2.0mg/l+蔗糖20g/l+瓊脂7.0g。

利用上述md2菠蘿生根培養基的md2菠蘿組培苗快速繁殖方法，包括以下步驟：

(1)外植體的選擇和消毒：于晴朗天氣選取生長健壯的md2菠蘿吸芽，去除頂端分生組織周圍葉片，用0.1％的氯化汞溶液震蕩消毒20min，然后用無菌水沖洗5次，并用干燥無菌紙巾吸干表面殘留水分。

(2)吸芽預培養：將步驟(1)的頂端分生組織縱切為均勻的2塊，接種于ms+6-ba3.0mg/l+iba0.2mg/l+蔗糖30g/l+瓊脂7.0g固體培養基，ph值調節為6.0，置于30℃培養10d，每天光照14h，光強3000lx。

(3)增殖培養：將步驟(2)的分生組織再均分為二，轉接到ms+6-ba1.0mg/l+iba0.3mg/l+蔗糖30g/l+瓊脂7.0g，調節ph值為6.0，置于30℃每天光照12h，光強3000lx，隨培養時間的增加，在葉腋周圍形成大量從生芽，30d轉接一次。

(4)生根培養：將步驟(3)得到的2cm以上的無菌苗轉接到1/2ms+iba1.0mg/l+多效唑2.0mg/l+蔗糖20g/l+瓊脂7.0g，ph值為6.0，置于25～30℃的室內自然光照培養45d。

(5)室外移栽：將經過步驟(4)培養生根苗，開蓋3天，洗凈根部培養基并移栽到沙床中，保持一定的空氣濕度并逐漸增加光照，移栽3d即在根部可長出大量的根毛，1周后施肥，當組培苗長至較健壯時移栽到大田中。

實施例6

一種md2菠蘿生根培養基，所述md2菠蘿生根培養基包括1/2ms+iba0.8mg/l+多效唑1.5mg/l+蔗糖20g/l+瓊脂6.5g。

利用上述md2菠蘿生根培養基的md2菠蘿組培苗快速繁殖方法，包括以下步驟：

(1)外植體的選擇和消毒：于晴朗天氣選取生長健壯的md2菠蘿吸芽，去除頂端分生組織周圍葉片，用0.1％的氯化汞溶液震蕩消毒18min，然后用無菌水沖洗4次，并用干燥無菌紙巾吸干表面殘留水分。

(2)吸芽預培養：將步驟(1)的頂端分生組織縱切為均勻的2塊，接種于ms+6-ba3.0mg/l+iba0.2mg/l+蔗糖30g/l+瓊脂6.5g固體培養基，ph值調節為5.8，置于28℃培養12d，每天光照12h，光強2500lx。

(3)增殖培養：將步驟(2)的分生組織再均分為二，轉接到ms+6-ba1.0mg/l+iba0.3mg/l+蔗糖30g/l+瓊脂6.5g，調節ph值為5.8，置于28℃每天光照12h，光強2500lx，隨培養時間的增加，在葉腋周圍形成大量從生芽，30d轉接一次。

(4)生根培養：將步驟(3)得到的2cm以上的無菌苗轉接到1/2ms+iba0.8mg/l+多效唑1.5mg/l+蔗糖20g/l+瓊脂6.5g，ph值為5.8，置于25～30℃的室內自然光照培養40d。

(5)室外移栽：將經過步驟(4)培養生根苗，開蓋2天，洗凈根部培養基并移栽到沙床中，保持一定的空氣濕度并逐漸增加光照，移栽3d即在根部可長出大量的根毛，1周后施肥，當組培苗長至較健壯時移栽到大田中。

實施例7

本實施例與實施例3的區別在于，所述md2菠蘿生根培養基為1/2ms+iba0.8mg/l+蔗糖20g/l+瓊脂6.5g。

實施例8

本實施例與實施例6的區別在于，所述md2菠蘿生根培養基為1/2ms+iba0.8mg/l+蔗糖20g/l+瓊脂6.5g。

實施例9

本實施例與實施例3的區別在于，所述md2菠蘿生根培養基包括1/2ms+iba1.2mg/l+多效唑2.5mg/l+蔗糖20g/l+瓊脂6.5g。

實施例10

本實施例與實施例3的區別在于，所述md2菠蘿生根培養基包括1/2ms+iba0.3mg/l+多效唑0.5mg/l+蔗糖20g/l+瓊脂6.5g。

實施例1～6以及對比例1的md2菠蘿組培苗繁殖的結果如下：

通過上表，實施例1～6的md2菠蘿種苗繁殖速度快，生根快、根長齊時間較短，根粗，心葉厚、硬，移栽成活率高，培養效果優異。而實施例7～8生根慢、根長齊時間慢，根細，心葉薄、軟，移栽成活率較低，人工/自然光照生根培養效果較差。本發明在生根培養中加入多效唑后生根更整齊，根更粗壯，根吸收營養更好；葉片光合作用得到增強，心葉厚度和硬度增加，在移栽后能更好地保持葉片水分，抵抗細菌真菌的侵害，增強了組培苗抗逆性，移栽成活率也得到較大提高，并且可以使用自然光照進行生根培養，節省了電能，在自熱光照下培養的生根苗可直接移栽到苗圃假植，節約了煉苗的人工成本。

實施例9與實施例3對比，實施例9的md2菠蘿種苗生根慢，根長齊時間長，雖然根系粗度增加，但是生根率和移栽成活率下降；實施例10與實施例3對比，實施例10的md2菠蘿種苗生根慢，根長齊時間長，根粗降低，生根率和移栽成活率也下降。表明生根培養基中iba、多效唑的添加量對生根培養效果有較大的影響，本發明利用1/2ms+iba0.5～1.0mg/l+多效唑1.0～2.0mg/l+蔗糖20g/l+瓊脂6.0～7.0g的md2菠蘿生根培養基，生根更整齊，根系更粗壯，葉色濃綠，葉片光合作用得到增強，心葉厚度和硬度增加，極大促進了md2菠蘿組培苗的快速繁殖。

以上所述僅為本發明的較佳實施例而已，并不用以限制本發明，凡在本發明的精神和原則之內，所做的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明保護的范圍之內。