本發(fā)明涉及組織培養(yǎng)，具體地，涉及藍(lán)莓組織培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
：藍(lán)莓(Vacciniumspp.)為杜鵑花科越橘屬灌木果樹。藍(lán)莓果實(shí)被聯(lián)合國衛(wèi)生組織列為最佳營養(yǎng)價(jià)值的水果，同時(shí)被美國評(píng)為世界十大健腦食品，被國際糧農(nóng)組織列為人類五大健康食品之一。所以藍(lán)莓的社會(huì)需求量日益增長，各國相繼引種栽培。2009年以來我國藍(lán)莓產(chǎn)業(yè)出現(xiàn)快速發(fā)展，目前主要分布于五大區(qū)域：長白山及大小興安嶺地區(qū)、遼東半島、膠東半島、長江流域、云貴川及華南地區(qū)。隨著栽培面積和產(chǎn)量的不斷上升，相關(guān)應(yīng)用研究及應(yīng)用基礎(chǔ)研究越來越受到關(guān)注。組織培養(yǎng)在其他園藝作物上開展較多，但在藍(lán)莓上的研究較少，藍(lán)莓的組織培養(yǎng)不易成功，成活率低。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種藍(lán)莓組織培養(yǎng)方法，解決了用于藍(lán)莓組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基中激素配比不明確，用于組織培養(yǎng)的單莖段消毒不合理，進(jìn)而導(dǎo)致藍(lán)莓組織成活率低，培養(yǎng)不易成功的問題。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種藍(lán)莓組織培養(yǎng)方法，其中，所述藍(lán)莓組織培養(yǎng)方法包括：(1)取當(dāng)年生的藍(lán)莓嫩枝條，剪取3-4cm帶芽莖段；(2)將上述帶芽莖段用濃度為70-75體積％的酒精消毒10-30s，再用濃度為0.08-0.12體積％的升汞消毒6-8min，沖洗后備用；(3)將上述帶芽莖段切成1-2cm長的帶芽的單莖段；(4)將上述單莖段的下端插入初代培養(yǎng)基中進(jìn)行初代培養(yǎng)；其中，所述初代培養(yǎng)基中還含有玉米素和吲哚丁酸，且相對(duì)于1L的初代培養(yǎng)基，所述玉米素的含量為0.8-1.2mg，所述吲哚丁酸的含量為0.38-0.42mg；(5)將經(jīng)過初代培養(yǎng)后的單莖段接種到增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)；其中，所述增殖培養(yǎng)基中還含有玉米素和吲哚丁酸，且相對(duì)于1L的增殖培養(yǎng)基，所述玉米素的含量為1.4-1.6mg，所述吲哚丁酸的含量為0.08-0.12mg；(6)將經(jīng)過增殖培養(yǎng)后的單莖段接種到生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)；其中，所述生根培養(yǎng)基中還含有玉米素和吲哚丁酸，且相對(duì)于1L的生根培養(yǎng)基，所述玉米素的含量為0-0.1mg，所述吲哚丁酸的含量為0.28-0.32mg；所述初代培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基為WPM培養(yǎng)基或MS培養(yǎng)基。通過上述技術(shù)方案，本發(fā)明提供了一種藍(lán)莓組織培養(yǎng)方法，其中，所述藍(lán)莓組織培養(yǎng)方法包括：取當(dāng)年生的藍(lán)莓嫩枝條，剪取3-4cm帶芽莖段，之后將上述帶芽莖段用濃度為70-80體積％的酒精消毒10-30s，再用濃度為0.08-0.12體積％的升汞消毒6-10min，沖洗后備用；將上述帶芽莖段切成1-2cm長的帶芽的單莖段；將上述單莖段的下端插入初代培養(yǎng)基中進(jìn)行初代培養(yǎng)，之后再經(jīng)增殖培養(yǎng)和生根培養(yǎng)；通過明確合理設(shè)置初代培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基中激素的含量，以及對(duì)單莖段在接種前進(jìn)行合理的滅菌處理，使得藍(lán)莓的組織培養(yǎng)成活率高，易成功。本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點(diǎn)將在隨后的具體實(shí)施方式部分予以詳細(xì)說明。具體實(shí)施方式以下對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式進(jìn)行詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解的是，此處所描述的具體實(shí)施方式僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。本發(fā)明提供了一種藍(lán)莓組織培養(yǎng)方法，其中，所述藍(lán)莓組織培養(yǎng)方法包括：(1)取當(dāng)年生的藍(lán)莓嫩枝條，剪取3-4cm帶芽莖段；(2)將上述帶芽莖段用濃度為70-75體積％的酒精消毒10-30s，再用濃度為0.08-0.12體積％的升汞消毒6-8min，沖洗后備用；(3)將上述帶芽莖段切成1-2cm長的帶芽的單莖段；(4)將上述單莖段的下端(形態(tài)學(xué)上的下端)插入初代培養(yǎng)基中進(jìn)行初代培養(yǎng)；其中，所述初代培養(yǎng)基中還含有玉米素和吲哚丁酸，且相對(duì)于1L的初代培養(yǎng)基，所述玉米素的含量為0.8-1.2mg，所述吲哚丁酸的含量為0.38-0.42mg；(5)初代培養(yǎng)后，將經(jīng)過初代培養(yǎng)后的單莖段接種到增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)；其中，所述增殖培養(yǎng)基中還含有玉米素和吲哚丁酸，且相對(duì)于1L的增殖培養(yǎng)基，所述玉米素的含量為1.4-1.6mg，所述吲哚丁酸的含量為0.08-0.12mg；(6)增殖培養(yǎng)后，將經(jīng)過增殖培養(yǎng)后的單莖段接種到生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)；其中，所述生根培養(yǎng)基中還含有玉米素和吲哚丁酸，且相對(duì)于1L的生根培養(yǎng)基，所述玉米素的含量為0-0.1mg，所述吲哚丁酸的含量為0.28-0.32mg；所述初代培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基為WPM培養(yǎng)基或MS培養(yǎng)基。在上述方法中，步驟(1)中帶芽莖段在消毒前可以用少許洗衣粉洗凈后進(jìn)行流水沖洗，沖洗時(shí)間為1h以上，同時(shí)，上述操作過程都需要在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行，超凈工作臺(tái)使用前用75％的酒精棉將超凈工作臺(tái)內(nèi)仔細(xì)擦拭一遍，把實(shí)驗(yàn)用到的酒精棉、升汞酒精、解剖刀、鑷子、酒精燈、培養(yǎng)基、無菌水、無菌濾紙等提前放到超凈工作臺(tái)上，打開紫外滅菌燈，滅菌30min；同時(shí)，增殖和生根的接種過程不需要外植體的滅菌和消毒，直接在無菌的超凈工作臺(tái)上接種即可。為了進(jìn)一步提高組織培養(yǎng)的成活率，所述生根培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，且所述MS培養(yǎng)基包括有硝酸銨、硝酸鉀、七水硫酸鎂、磷酸二氫鉀和氯化鈣；且相對(duì)于1L的生根培養(yǎng)基，所述硝酸銨的含量為14-16g，所述硝酸鉀的含量為18-20g，所述七水硫酸鎂的含量為36-38g，所述磷酸二氫鉀的含量為15-18g，所述氯化鈣的含量為2-3g；同時(shí)，在本發(fā)明另一種實(shí)施方式中，所述生根培養(yǎng)基為WPM培養(yǎng)基，且所述WPM培養(yǎng)基包括有硫酸鉀、七水硫酸鎂、磷酸二氫鉀、硝酸銨和四水硝酸鈣；且相對(duì)于1L的WPM培養(yǎng)基，所述硫酸鉀的含量為9-12g，所述七水硫酸鎂的含量為3.6-3.8g，所述磷酸二氫鉀的含量為1.6-1.8g，所述硝酸銨的含量為3.8-4.2g，所述四水硝酸鈣的含量為27-28g。在本發(fā)明的一種優(yōu)選的方法中，為了使得組織培養(yǎng)能獲得充足的光照，合理設(shè)置培養(yǎng)條件，所述初代培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)和生根培養(yǎng)的培養(yǎng)條件相同，且所述培養(yǎng)條件為：溫度為22-28℃，光照時(shí)長為12-16h/d，光照強(qiáng)度為1900-2100lx。在本發(fā)明的一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，為了提高帶芽莖段的消毒效果，所述藍(lán)莓組織培養(yǎng)方法還包括：將步驟(2)中所述帶芽莖段浸泡于70-80體積％的酒精中震蕩消毒10-30s，之后浸泡至0.08-0.12體積％的升汞中震蕩消毒6-10min。在本發(fā)明的一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，為了防止帶芽莖段受到二次污染，同時(shí)避免帶芽莖段在接種前還殘留升汞和酒精，步驟(2)中所述沖洗采用滅菌水，沖洗次數(shù)為5-6次，且每次沖洗時(shí)間為4-5min。在本發(fā)明的一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，為了進(jìn)一步避免帶芽莖段在接種前還殘留升汞和酒精，步驟(3)中還包括將所述單莖段用無菌濾紙將其表面水分吸干。優(yōu)選的，所述初代培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基中還含有蔗糖和瓊脂，且每種培養(yǎng)基中所述蔗糖的濃度為28-32g/L，所述瓊脂的濃度為6-7g/L。在本發(fā)明的一種更為優(yōu)選的實(shí)施方式中，為了防止在接種過程中引入新的污染細(xì)菌，步驟(4)在酒精燈周圍進(jìn)行。在本發(fā)明的一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，為了進(jìn)一步提高組織培養(yǎng)的成活率，所述初代培養(yǎng)的時(shí)間為30天以上，所述增殖培養(yǎng)的時(shí)間為30天以上。上述方法的具體操作中，所有用到的東西全部都要放到超凈工作臺(tái)上紫外滅菌，如果條件允許，打開室內(nèi)的紫外燈，將白大褂、手套、口罩等一起滅菌，滅菌時(shí)，將門窗全部關(guān)閉，拉上窗簾。操作過程中，操作人員需戴上口罩、手套，穿好白大褂，關(guān)閉超凈工作臺(tái)上紫外燈，打開照明燈，把風(fēng)機(jī)調(diào)到最大。先用75％的酒精棉把手里里外外擦拭干凈，再把超凈工作臺(tái)上重新用75％的酒精棉擦拭干凈，打開酒精燈，放到工作臺(tái)中央，把解剖刀和鑷子在酒精燈上里里外外燒三遍，燒紅為準(zhǔn)，放入染色缸中備用(剖刀和鑷子必須徹底滅菌，在酒精燈上來回?zé)?，直到燒紅算一次，最少重復(fù)三次，同時(shí)需要注意的是解剖刀和鑷子要不斷用火燒，必須等到其冷卻后再操作，以防將外植體燙傷)。此外，在上述方法中用到的培養(yǎng)基的配制過程中，瓊脂不容易溶解，需要加熱，加熱時(shí)注意不要讓瓊脂沸出來，調(diào)節(jié)pH時(shí)，溫度應(yīng)控制在50℃以下，溫度過高會(huì)影響精確度，同時(shí)利用溫度補(bǔ)償。分裝培養(yǎng)基時(shí)，可適當(dāng)加熱后再分裝，邊攪拌邊分裝。在滅菌過程中，采用高溫滅菌方法，滅菌條件為：溫度121℃，壓力131kpa，時(shí)間23min。滅菌完成后立即關(guān)閉電源，打開放氣按鈕，這樣激素不易失活。滅菌完成后將培養(yǎng)基放置2～3天，確保無菌后方可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。上述使用的無菌濾紙：是將濾紙放到培養(yǎng)皿中，用報(bào)紙或牛皮紙包好再用皮筋捆好，放到滅菌鍋里一同滅菌，之后備用。上述使用的無菌水：是將蒸餾水放到滅菌鍋里滅菌即可得到。以下將通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述。實(shí)施例1(1)取當(dāng)年生的藍(lán)莓嫩枝條，剪取3cm帶芽莖段；(2)將上述帶芽莖段用濃度為70體積％的酒精消毒10s，再用濃度為0.08體積％的升汞消毒6min，沖洗后備用；(3)將上述帶芽莖段切成1cm長的帶芽的單莖段；(4)將上述單莖段的下端插入初代培養(yǎng)基(初代培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基)中進(jìn)行初代培養(yǎng)；其中，所述初代培養(yǎng)基中還含有玉米素和吲哚丁酸，且相對(duì)于1L的初代培養(yǎng)基，所述玉米素的含量為0.8mg，所述吲哚丁酸的含量為0.38mg，初代培養(yǎng)基中還加有蔗糖和瓊脂，相對(duì)于1L的初代培養(yǎng)基，所述蔗糖的含量為28g，所述瓊脂的含量為6g；(5)將經(jīng)過初代培養(yǎng)后的單莖段接種到增殖培養(yǎng)基(增殖培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基)中進(jìn)行增殖培養(yǎng)；其中，所述增殖培養(yǎng)基中還含有玉米素和吲哚丁酸，且相對(duì)于1L的增殖培養(yǎng)基，所述玉米素的含量為1.4mg，所述吲哚丁酸的含量為0.08mg，增殖培養(yǎng)基中還加有蔗糖和瓊脂，相對(duì)于1L的增殖培養(yǎng)基，所述蔗糖的含量為28g，所述瓊脂的含量為6g；(6)將經(jīng)過增殖培養(yǎng)后的單莖段接種到生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)(生根培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基)；其中，所述生根培養(yǎng)基中還含有吲哚丁酸，且相對(duì)于1L的生根培養(yǎng)基，所述吲哚丁酸的含量為0.28mg，生根培養(yǎng)基中還加有蔗糖和瓊脂，相對(duì)于1L的生根培養(yǎng)基，所述蔗糖的含量為28g，所述瓊脂的含量為6g；上述生根培養(yǎng)基中，所述生根培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，且所述MS培養(yǎng)基包括有硝酸銨、硝酸鉀、七水硫酸鎂、磷酸二氫鉀和氯化鈣；且相對(duì)于1L的MS培養(yǎng)基，所述硝酸銨的含量為14g，所述硝酸鉀的含量為18g，所述七水硫酸鎂的含量為36g，所述磷酸二氫鉀的含量為15g，所述氯化鈣的含量為2g。實(shí)施例2(1)取當(dāng)年生的藍(lán)莓嫩枝條，剪取4cm帶芽莖段；(2)將上述帶芽莖段用濃度為75體積％的酒精消毒30s，再用濃度為0.12體積％的升汞消毒8min，沖洗后備用；(3)將上述帶芽莖段切成2cm長的帶芽的單莖段；(4)將上述單莖段的下端插入初代培養(yǎng)基(初代培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基)中進(jìn)行初代培養(yǎng)；其中，所述初代培養(yǎng)基中還含有玉米素和吲哚丁酸，且相對(duì)于1L的初代培養(yǎng)基，所述玉米素的含量為1.2mg，所述吲哚丁酸的含量為0.42mg，初代培養(yǎng)基中還加有蔗糖和瓊脂，相對(duì)于1L的初代培養(yǎng)基，所述蔗糖的含量為32g，所述瓊脂的含量為7g；(5)將經(jīng)過初代培養(yǎng)后的單莖段接種到增殖培養(yǎng)基(增殖培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基)中進(jìn)行增殖培養(yǎng)；其中，所述增殖培養(yǎng)基中還含有玉米素和吲哚丁酸，且相對(duì)于1L的增殖培養(yǎng)基，所述玉米素的含量為1.6mg，所述吲哚丁酸的含量為0.12mg，增殖培養(yǎng)基中還加有蔗糖和瓊脂，相對(duì)于1L的增殖培養(yǎng)基，所述蔗糖的含量為32g，所述瓊脂的含量為7g；(6)將經(jīng)過增殖培養(yǎng)后的單莖段接種到生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)(生根培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基)；其中，所述生根培養(yǎng)基中還含有玉米素和吲哚丁酸，且相對(duì)于1L的生根培養(yǎng)基，所述玉米素的含量為0.1mg，所述吲哚丁酸的含量為0.32mg，生根培養(yǎng)基中還加有蔗糖和瓊脂，相對(duì)于1L的生根培養(yǎng)基，所述蔗糖的含量為32g，所述瓊脂的含量為7g；上述生根培養(yǎng)基中，所述生根培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，且所述MS培養(yǎng)基包括有硝酸銨、硝酸鉀、七水硫酸鎂、磷酸二氫鉀和氯化鈣；且相對(duì)于1L的MS培養(yǎng)基，所述硝酸銨的含量為16g，所述硝酸鉀的含量為20g，所述七水硫酸鎂的含量為38g，所述磷酸二氫鉀的含量為18g，所述氯化鈣的含量為3g。實(shí)施例3(1)取當(dāng)年生的藍(lán)莓嫩枝條，剪取4cm帶芽莖段；(2)將上述帶芽莖段用濃度為72體積％的酒精消毒20s，再用濃度為0.1體積％的升汞消毒7min，沖洗后備用；(3)將上述帶芽莖段切成2cm長的帶芽的單莖段；(4)將上述單莖段的下端插入初代培養(yǎng)基(初代培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基)中進(jìn)行初代培養(yǎng)；其中，所述初代培養(yǎng)基中還含有玉米素和吲哚丁酸，且相對(duì)于1L的初代培養(yǎng)基，所述玉米素的含量為1mg，所述吲哚丁酸的含量為0.4mg，初代培養(yǎng)基中還加有蔗糖和瓊脂，相對(duì)于1L的初代培養(yǎng)基，所述蔗糖的含量為30g，所述瓊脂的含量為6.5g；(5)將經(jīng)過初代培養(yǎng)后的單莖段接種到增殖培養(yǎng)基(增殖培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基)中進(jìn)行增殖培養(yǎng)；其中，所述增殖培養(yǎng)基中還含有玉米素和吲哚丁酸，且相對(duì)于1L的增殖培養(yǎng)基，所述玉米素的含量為1.5mg，所述吲哚丁酸的含量為0.1mg，增殖培養(yǎng)基中還加有蔗糖和瓊脂，相對(duì)于1L的增殖培養(yǎng)基，所述蔗糖的含量為30g，所述瓊脂的含量為6.5g；(6)將經(jīng)過增殖培養(yǎng)后的單莖段接種到生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)(生根培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基)；其中，所述生根培養(yǎng)基中還含有玉米素和吲哚丁酸，且相對(duì)于1L的生根培養(yǎng)基，所述玉米素的含量為0.05mg，所述吲哚丁酸的含量為0.3mg，生根培養(yǎng)基中還加有蔗糖和瓊脂，相對(duì)于1L的生根培養(yǎng)基，所述蔗糖的含量為30g，所述瓊脂的含量為6.5g；上述生根培養(yǎng)基中，所述生根培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，且所述MS培養(yǎng)基包括有硝酸銨、硝酸鉀、七水硫酸鎂、磷酸二氫鉀和氯化鈣；且相對(duì)于1L的生根培養(yǎng)基，所述硝酸銨的含量為15g，所述硝酸鉀的含量為19g，所述七水硫酸鎂的含量為37g，所述磷酸二氫鉀的含量為17g，所述氯化鈣的含量為2.5g。實(shí)施例4按照實(shí)施例3的方法進(jìn)行，不同的是，初代培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基為WPM培養(yǎng)基，其中，生根培養(yǎng)基中包括有硫酸鉀、七水硫酸鎂、磷酸二氫鉀、硝酸銨和四水硝酸鈣；且相對(duì)于1L的生根培養(yǎng)基，所述硫酸鉀的含量為10g，所述七水硫酸鎂的含量為3.7g，所述磷酸二氫鉀的含量為1.7g，所述硝酸銨的含量為4g，所述四水硝酸鈣的含量為27.5g。對(duì)比例1按照實(shí)施例3的方法進(jìn)行，不同的是，將上述帶芽莖段用濃度為60體積％的酒精消毒5s，再用濃度為0.05體積％的升汞消毒5min，沖洗后備用。對(duì)比例2按照實(shí)施例3的方法進(jìn)行，不同的是，將上述帶芽莖段用濃度為90體積％的酒精消毒40s，再用濃度為0.15體積％的升汞消毒12min，沖洗后備用。對(duì)比例3按照實(shí)施例3的方法進(jìn)行，不同的是，初代培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基中不添加玉米素和吲哚丁酸。對(duì)比例4按照實(shí)施例3的方法進(jìn)行，不同的是，初代培養(yǎng)基中，相對(duì)于1L的初代培養(yǎng)基，所述玉米素的含量為0.5mg，所述吲哚丁酸的含量為0.3mg；生根培養(yǎng)基中，相對(duì)于1L的增殖培養(yǎng)基，所述玉米素的含量為1mg，所述吲哚丁酸的含量為0.05mg；在生根培養(yǎng)基中，且相對(duì)于1L的生根培養(yǎng)基，所述玉米素的含量為0.1mg，所述吲哚丁酸的含量為0.25mg。對(duì)比例5按照實(shí)施例3的方法進(jìn)行，不同的是，初代培養(yǎng)基中，相對(duì)于1L的初代培養(yǎng)基，所述玉米素的含量為1.5mg，所述吲哚丁酸的含量為0.45mg；生根培養(yǎng)基中，相對(duì)于1L的增殖培養(yǎng)基，所述玉米素的含量為1.8mg，所述吲哚丁酸的含量為0.15mg；在生根培養(yǎng)基中，且相對(duì)于1L的生根培養(yǎng)基，所述玉米素的含量為0.12mg，所述吲哚丁酸的含量為0.35mg。表1實(shí)施例編號(hào)增殖培養(yǎng)20天后單莖段的長勢(shì)情況實(shí)施例1長勢(shì)較好，出現(xiàn)較多的枝葉實(shí)施例2長勢(shì)較好，出現(xiàn)較多的枝葉實(shí)施例3長勢(shì)較好，出現(xiàn)較多的枝葉實(shí)施例4長勢(shì)較好，出現(xiàn)較多的枝葉對(duì)比例1長勢(shì)較差，出現(xiàn)的枝葉較為稀疏對(duì)比例2長勢(shì)較差，出現(xiàn)的枝葉較為稀疏對(duì)比例3長勢(shì)較差，出現(xiàn)的枝葉較為稀疏對(duì)比例4長勢(shì)較差，出現(xiàn)的枝葉較為稀疏對(duì)比例5長勢(shì)較差，出現(xiàn)的枝葉較為稀疏通過上述表格可以看出，利用本發(fā)明范圍內(nèi)的方法進(jìn)行培養(yǎng)，增殖培養(yǎng)20天后，長勢(shì)較好，出現(xiàn)較多的枝葉，而利用本發(fā)明范圍外的方法進(jìn)行培養(yǎng)，增殖培養(yǎng)20天后，長勢(shì)較差，出現(xiàn)的枝葉較為稀疏，本發(fā)明通過明確合理設(shè)置初代培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基中激素的含量，以及對(duì)單莖段在接種前進(jìn)行合理的滅菌處理，使得藍(lán)莓的組織培養(yǎng)成活率高，易成功。以上詳細(xì)描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，但是，本發(fā)明并不限于上述實(shí)施方式中的具體細(xì)節(jié)，在本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思范圍內(nèi)，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行多種簡單變型，這些簡單變型均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。另外需要說明的是，在上述具體實(shí)施方式中所描述的各個(gè)具體技術(shù)特征，在不矛盾的情況下，可以通過任何合適的方式進(jìn)行組合，為了避免不必要的重復(fù)，本發(fā)明對(duì)各種可能的組合方式不再另行說明。此外，本發(fā)明的各種不同的實(shí)施方式之間也可以進(jìn)行任意組合，只要其不違背本發(fā)明的思想，其同樣應(yīng)當(dāng)視為本發(fā)明所公開的內(nèi)容。當(dāng)前第1頁1 2 3