本發明涉及一種提高金線蓮種子萌發的方法，屬于現代中草藥栽培技術領域。

技術背景

金線蓮（Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl. A.roxburghii）即花葉開唇蘭，別名金蠶、金線蘭、金石松等，是蘭科開唇蘭屬的一種多年生草本植物，主要分布于亞洲的日本、中國、斯里蘭卡、印度和尼泊爾等國。金線蓮全草皆可入藥，其味甘，性平微寒，有清熱解毒、涼血平膽等功效。金線蓮是一種珍稀藥材，廣泛用于治療肝炎、腎炎、肺炎、小兒驚風高熱、糖尿病、高腫瘤、風濕病等，還兼治小兒發育不良及毒蛇咬傷。目前學者對金線蓮的研究集中在化學成分、提取工藝、藥理作用、臨床實驗等方面，最近仍有報道。但有關金線蓮種子生物學特性及萌發條件的研究未見報道。由于金線蓮長期無序采挖，導致金線蓮野生資源瀕臨枯竭。在自然條件下萌發，存在耗種量大、難發芽、成活率低等問題，給種質資源研究和人工種質試驗帶來了很大的困難。

技術實現要素：

為解決金線蓮種子自然條件下萌發困難的問題，本發明提供了一種提高金線蓮種子萌發的方法。它包括適合金線蓮種子萌發的最佳溫度、最佳光照、最佳赤霉素濃度，從而確定金線蓮種子萌發的最佳條件。

本發明提供的一種提高金線蓮種子萌發的方法，金線蓮種子萌發條件為：金線蓮種子置于25℃下培養，并進行黑暗處理和赤霉素GA₃處理，GA₃質量濃度為40mg/L。

優選的，選取籽粒飽滿和質地均勻的金線蓮種子，選用0.1%的高錳酸鉀溶液消毒15min，沖洗干凈；采用培養皿+雙層濾紙床，將金線蓮種子置于25 ℃下培養，并進行黑暗處理和GA₃處理，GA₃質量濃度為40mg/L。

優選的是，所述金線蓮種子購買于云南省農科院種子公司。

本發明主要涉及金線蓮種子萌發最佳條件的設計，包括最佳溫度、最佳光照、最佳的赤霉素濃度。致力于為以后金線蓮種子人工種植技術和規范化種植建設提供指導。本發明方法操作簡單、易于掌握，能很好的解決金線蓮種子種量大、難發芽、成活率低等問題，不僅提高金線蓮種子的萌發率，還大大提高了其萌發效率。僅需12天，發芽率即可達81.33±2.49%，大幅增加發芽率，并且大幅縮短時間。

附圖說明

圖1為不同光照和溫度對金線蓮種子萌發的影響，（a）為光照條件。

圖2為不同光照和溫度對金線蓮種子萌發的影響，（b）為黑暗條件。

圖3為25℃黑暗處理后，不同赤霉素濃度對金線蓮種子萌發的影響。

具體實施方式

具體實施案例：2015年6月中旬以后，連續對不同溫度、不同光照、不同赤霉素濃度處理的金線蓮種子的萌發情況進行記錄。后期關于其發芽率的統計分析，參照發芽率的計算方法、Spass17.0和Sigmaplot10.0。結果見圖1、圖2及圖3；步驟如下：

（1） 選材：試驗所用金線蓮種子購買于云南省農科院種子公司，選取籽粒飽滿、質地均勻的供試種子，選用濃度0.1%的高錳酸鉀溶液消毒15min，沖洗干凈；

（2） 種子發芽的最佳條件：采用培養皿+雙層濾紙床，將金線蓮種子分別置于15 ℃、20 ℃、25 ℃、30 ℃和35 ℃下培養，并在每個溫度條件進行光照和黑暗兩個處理，每種處理下5次重復，每次重復30粒種子，如圖1-2所示，25℃黑暗處理下在24D時發芽率達到最高；

（3）GA₃處理與種子萌發：在前述試驗的最適溫度和光照條件下，增加不同GA₃濃度處理。金線蓮種子分別放在GA₃質量濃度為20 mg/L、40 mg/L、80 mg/L、160 mg/L和320 mg/L 5個梯度，并以蒸餾水為對照，每次處理隨機取出30粒種子，5次重復，如圖3所示，在25℃黑暗條件下，GA₃質量濃度為40 mg/L時，發芽率在12時即可達到最高；

（4）實驗后期的管理：從處理第4天開始檢查記錄發芽種子數，到種子不再萌發為止，每天為種子加入適量同濃度的培養液，萌發到高峰期時，用消毒的鑷子為種苗翻下身，統計種子發芽率。

由圖1-2可知，在15 ℃、20 ℃、25 ℃、30 ℃4個光照（發現在35 ℃的光照和黑暗條件下，發芽率均為0）與黑暗對照組中，在黑暗條件下培養的發芽率都高于光照條件下培養的發芽率。經方差分析表明，在25 ℃條件培養下，黑暗條件下培養種子發芽率顯著高于光照條件下培養種子發芽率。其他溫度的光照和黑暗之間的發芽率差異也顯著。

由圖2可知， 20℃、30℃條件下培養，種子發芽率不超過60%，發芽率不是很高。隨著溫度的增加，金線蓮種子發芽率表現出先升后降的趨勢，并且25 ℃條件下發芽率顯著高于其他溫度下、黑暗條件下的發芽率。這表明，在雙層濾紙上、25℃及黑暗條件能提高金線蓮種子的萌發。與對照（72.67±2.45）%相比，40 mg/L、20 mg/L赤霉素處理對金線蓮種子萌發的促進作用顯著（P<0.05）。20 mg/L赤霉素處理，種子發芽率可達（73.33±3.80）%，40 mg/L赤霉素處理種子的發芽率最高為（81.33±2.49）%。而高于40 mg/L的赤霉素濃度，對種子萌發率都有抑制作用。表明適當濃度赤霉素處理可明顯縮短金線蓮種子萌發時間，提高種子發芽率。見圖3。

上述步驟中，金線蓮種子的萌發采用培養皿+雙層濾紙，雙層濾紙吸水性性比較好。探究種子發芽的最佳條件，將金線蓮種子置于15℃、20℃、25℃、30℃和35℃下培養，并在每個溫度條件進行光照和黑暗兩個處理。探究適合金線蓮種子萌發的赤霉素濃度，將金線蓮種子分別放在GA₃質量濃度為20 mg/L、40 mg/L、80 mg/L、160 mg/L、320 mg/L 5個梯度，并以蒸餾水為對照。金線蓮種子萌發到高峰期時，用消毒的鑷子為種苗翻下身，以防止種苗腐爛。