本發明屬于植物組織培養技術領域，具體涉及一種桃葉衛矛葉片再生植株的生產方法。

二技術背景

桃葉衛矛因其木材材質好、種子含油高、觀賞價值高、人工林栽植面積大，已經成為21世紀改善人類生存環境，滿足人類生活需求最有潛力的園林樹種之一。

桃葉衛矛繁殖一般采用播種、扦插、分株繁殖等方法，但由于受種子園數量以及產量所限制，所獲得的優質苗木非常少，繁殖速度比較慢，播種繁殖種子的采集時間要求很強，采種后預處理復雜，后期管理要求高，在生產上很難采用種子繁殖的方法大規模培育苗木，如何利用植物組織培養的方法，進行優質苗木的選育，成為桃葉衛矛繁殖過程中關注的焦點。

三

技術實現要素：

本發明需要解決的問題是針對桃葉衛矛優質苗木繁育中的需求，發明了一種桃葉衛矛葉片再生植株的生產方法，為桃葉衛矛優質苗木的繁育和品種改良提供生產和研究材料。

本發明所述桃葉衛矛葉片再生植株的生產方法由以下步驟構成：

(1)外植體的選擇與消毒：

選擇生長健壯無病害的桃葉衛矛的幼嫩葉片作為外植體，將材料經流水沖洗1h，去除表面雜物，在無菌操作工作臺上，先用滅菌的無菌水沖洗3遍，再用75％無水乙醇消毒30s，接著用無菌水沖洗3遍，然后用0.1％氯化汞消毒處理3-6min，最后用滅菌的無菌水沖洗4遍；

(2)愈傷組織的誘導：

在超凈工作臺上，將消毒好的葉片切成6mm大小的方塊，接種于誘導愈傷培養基上(配方為：MS+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+30g/L蔗糖+6.5g/L瓊脂；Ph調為5.8)，葉的背面緊貼培養基，每瓶接種3-4塊，誘導光照條件14h/d，光照強度2000lux，溫度23-28℃；

(3)不定芽的誘導：

將經過繼代培養1次后的黃綠色愈傷組織轉接到誘導不定芽分化培養基上(配方為：MS+1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+30g/L蔗糖+6.5g/L瓊脂；Ph調為5.8)，誘導光照條件14h/d，光照強度2000lux，溫度23-28℃；

(4)根的誘導：

經過不定芽誘導得到再生芽，待再生芽長到4-5片葉子，長度0.8-1.2cm高時轉入生根培養基誘導生根(配方為：1/2MS+1.5mg/LIBA+0.5mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂；Ph調為5.8)，誘導光照條件14h/d，光照強度2000lux，溫度23-28℃；。

本發明所述桃葉衛矛葉片再生植株培養周期為55-65天。

本發明與現有技術相比，其有益效果是：本發明使用桃葉衛矛葉片作為材料，取材方便，數量充足，接種后在較短時間內形成愈傷組織直至生根形成幼苗植株，所得植株生長健壯，平均根長均明顯增大。繁殖系數為8.2，培養條件可人為控制。利用本方法，可以提高桃葉衛矛幼苗繁殖系數和成活率，培養周期短，變異少，培養條件可人為控制，操作方法簡單，為桃葉衛矛葉片作為優良的科研材料進行遺傳轉化和品種改良等研究奠定基礎，從而為桃葉衛矛大面積生產組培苗提供保障。為桃葉衛矛的大規模生產提供了優質的組培苗。

四附圖說明

圖1桃葉衛矛葉片外植體

圖2桃葉衛矛再生植株的愈傷組織

圖3桃葉衛矛再生植株的叢生芽

圖4桃葉衛矛再生植株的生根幼苗

五具體實施方式

1，繁殖材料的選擇

試驗材料取自金陵科技學院實驗站的兩年生桃葉衛矛葉片。

2，繁殖材料的消毒

將材料經流水沖洗1h去除表面雜物，在無菌操作工作臺上，先用無菌水沖洗3遍，再用75％無水乙醇消毒30s，接著無菌水沖洗3遍，然后用0.1％氯化汞消毒處理5-7min，最后用滅菌的無菌水沖洗4遍；見附圖1。

3，愈傷組織的誘導

在超凈工作臺上，將消毒好的葉片切成6mm大小的方塊，接種于愈傷誘導培養基上，葉的背面緊貼培養基，每瓶接種3-4塊，誘導光照條件14h/d，光照強度2000lux，溫度23-28℃；見附圖2

4，不定芽的誘導

將經過連續繼代培養2-3次后的黃綠色愈傷組織轉接到誘導不定芽分化培養基上，誘導光照條件14h/d，光照強度2000lux，溫度23-28℃；見附圖3

5，根的誘導

經過不定芽誘導得到再生芽，待再生芽長到4-5片葉子，長度1cm高時可轉入生根培養基誘導生根，誘導光照條件14h/d，光照強度2000lux，溫度23-28℃。幼苗生根情況，見附圖4。