本發明涉及一種植物組織培養方法，具體涉及一種利用抑菌培養基培育茉莉花的組培方法，屬生物
技術領域：
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背景技術：
：茉莉花系木樨科素馨屬植物，學名為Jasminumsambac(Linn.)Aiton，原產于印度、波斯灣等地區。我國的茉莉花種植面積約占世界種植面積的三分之二，鮮花產量居世界首位。由于茉莉花不僅是裝飾、觀賞的佳品，還具有很高的經濟價值。除可供窨制花茶外，還可提取芳香油作為香料，茉莉花香的主要成分是茉莉酮，香質純正優雅，風味殊勝，故為我國香料工業調制茉莉型香精的主要原料，又是茉莉花茶的花源。用茉莉花窨制的花茶，香氣清雅、鮮靈而芬芳，茶湯醇厚、濃郁而不濁，在國內外享有盛名。用茉莉花提取的茉莉油，又是貴重的日用化工原料。還可制作洗眼藥，醫治結膜炎等。茉莉花傳統是以扦插繁殖，繁殖方法簡便。但是，對于一些優良單株或瀕危品種，由于母株有限，可供扦插的枝條很少，難于在短時間內達到大量繁殖的目的。通過茉莉花組織培養，一方面可以不受季節影響，在短時間內達到大量繁殖的目的，從而實現規模化繁殖；另一方面，可以在保存其原有的優良性狀的基礎上，實現茉莉花的種質資源保存、提純復壯和轉基因研究等。茉莉花組織培養的成本主要包括組培苗生產所需的培養基、設施設備、供電成本、耗材和人工成本。常規的茉莉花組織培養方法要求外植體接種在高溫高壓滅菌后的無菌培養基中才能正常生長，耗能大，人工操作成本高。如果能通過藥物抑菌的方法來改造培養基，使培養基無需經過高溫高壓滅菌，就能夠獲得茉莉花的正常生長。然而，針對不同的植物品種難以篩選到一種合適的抗菌劑，往往是當培養基抗菌時，植物組織的生長就受到抑制；而植物組織正常生長，就無法獲得滿意的抗菌效果。其原因，一是還沒有一種抗生素對所有的菌類都有效，而且抗生素藥效期短；二是有些抗菌素、防腐劑在有效的濃度下，其殺菌、抗菌離子對植物組織直接產生傷害，有些則產生鹽害。必須選擇與植物組織親和、藥效期長(至少一個生長周期)，不產生鹽害并具有殺菌、抗菌活性的物質作為抗菌劑。因此，篩選合適的抗菌藥劑是抑菌組培技術得以應用的關鍵。本發明就是為茉莉花組織培養提供一種抑菌培養方法。一方面可以降低茉莉花組織培養對設施設備的要求，尤其不需要高溫高壓滅菌所需配置的高壓鍋設備，縮減了投資成本，電能消耗大幅度降低；另一方面，采用這種培養基開展茉莉花組織培養，組培環節大為簡化，人工操作的速度大幅提高，從而降低了人工成本。此外，由于改造后的培養基自身具有殺菌、抗菌或抑菌作用，能有效控制組織培養過程中的污染問題，又不會對茉莉花生長產生毒害或抑制，即不影響茉莉花的正常生長，從根本上簡化了茉莉花組織培養。技術實現要素：本發明的目的是提供一種利用抑菌培養基培育茉莉花的組培方法。本發明的目的是通過以下方法實現的。本發明的一種利用抑菌培養基培育茉莉花的組培方法，包括培養容器消毒、培養基配制、無菌水制備、誘導培養、增殖培養、生根培養和瓶苗移栽，其特征在于：1.培養容器消毒：將培養瓶、瓶蓋及接種用的塑料盤在100mg/L次氯酸鈉+10mg/L環絲氨酸+0.5mg/L十二烷基磺酸鈉的水溶液中浸泡不少于10h，保存備用；2.培養基配制：誘導培養基為MS+1～3mg/L6-BA+0.1～1.0mg/LIBA+40～100mg/L次氯酸鈉+1～5mg/L環絲氨酸+10～50mg/L丙酸鈣+0.05～0.2mg/L十二烷基磺酸鈉+30g/L蔗糖+3.0g/L瓊脂粉，pH5.8；增殖培養基為：MS+1～2mg/L6-BA+0.1～0.5mg/LIBA+40～100mg/L次氯酸鈉+1～5mg/L環絲氨酸+10～50mg/L丙酸鈣+0.05～0.2mg/L十二烷基磺酸鈉+30g/L蔗糖+3.0g/L瓊脂粉，pH5.8；生根培養基為1/2MS+1～3mg/LIBA+40～100mg/L次氯酸鈉+1～5mg/L環絲氨酸+10～50mg/L丙酸鈣+0.05～0.2mg/L十二烷基磺酸鈉+30g/L蔗糖+3.0g/L瓊脂粉，pH5.8；所述MS，為1962年，Murashige和Skoog公開的MS培養基；所述6-BA，指6-芐氨基嘌呤；所述IBA，指α-吲哚丁酸；配制培養基時，先稱各培養基配方中的蔗糖和瓊脂粉，加培養基總重量1/2的自來水，加熱至瓊脂粉完全溶解，再按各培養基配方配齊其他原料后，定容，然后用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl調pH值至5.8，分裝到消毒過的培養容器中，封口，冷卻凝固后備用；3.無菌水的制備：采用次氯酸鈉、環絲氨酸、十二烷基磺酸鈉和水配制無菌水，終濃度為100mg/L次氯酸鈉、10mg/L環絲氨酸、0.5mg/L十二烷基磺酸鈉，現配現用；4.誘導培養：剪取無病蟲害、生長健壯、半木質化的茉莉花新梢，剪去葉片后，剪成2～3cm的帶腋芽莖段，用洗衣粉浸泡沖洗15min后，用體積比為75％酒精消毒30s，再用重量體積比為0.1％升汞浸泡消毒12min，無菌水反復沖洗不少于3次；消毒后的莖段在無菌條件下接種于誘導培養基上，培養30d后長出新芽；培養室溫度為26℃，光照12h，光照強度為1000Lx；5.增殖培養：將誘導出的茉莉花新芽轉入增殖培養基中，30d后逐步長大或誘導出叢生芽，將長出的新芽再切成帶腋芽的莖段，或叢生芽切開，接種到增殖培養基上；每30d轉接一次，獲得大量幼芽；培養室溫度為26℃，光照12h，光照強度為1500Lx；6.生根培養：取高度為3～5cm芽苗，接種到生根培養基上，培養25d后成為完整植株；培養室溫度為26℃，光照12h，光照強度為1500Lx；7.瓶苗移栽：將生根培養獲得的完整植株取出，洗凈根部的培養基，用800倍的多菌靈浸泡30min后，移栽至透水性好的微酸性土壤中，大棚上層用遮光網遮蓋，移栽的環境溫度為22～28℃。本發明的應用效果：本發明的抑菌組培方法，利用化學試劑添加到各種培養基中，達到滅菌或抑菌的作用，配制的培養基無需高溫高壓滅菌。因此，在茉莉花誘導培養、增殖培養、生根培養各個階段，除了要考慮常用的評價指標外，還要考慮污染率的問題。1.誘導培養：通過實驗證實，本發明的一種利用抑菌培養基培育茉莉花的組培方法與常規的茉莉花組培方法相比，結果如表1所示，在誘導培養階段的外植體培養的成活率差異不明顯。表1本發明的抑菌組培方法對茉莉花誘導培養的影響組培方式外植體數外植體污染數成活率(％)常規組培方法603558.3抑菌組培方法603355.02.增殖培養：本發明的抑菌組培方法與常規組培茉莉花的增殖倍數和污染率的比較，結果如表2所示，增殖倍數和污染率二個指標都差異不明顯。從瓶苗的生長狀況看，本發明的抑菌組培方法的培養基由于不經過高溫高壓滅菌，激素和營養元素損失較少，茉莉花組培苗更壯，葉色更綠。表2本發明的抑菌組培方法對茉莉花增殖倍數和污染率的影響3本發明的抑菌組培方法對茉莉花生根率和污染率的影響：在組培苗生根過程中，本發明的抑菌組培方法與常規的茉莉花組培方法相比，結果如表3所示，生根率和污染率的差異不顯著。表3本發明的抑菌組培方法的茉莉花瓶苗生根情況組培方式平均生根率(％)平均污染率(％)常規組培方法900.3抑菌組培方法920.24.成本分析：本發明的抑菌組培方法與常規組培的成本分析見表4。本發明組培省去了高壓滅菌環節，簡化了組培程序，提高了工作效率。從直接費用計算，每年可以節約5.5萬元左右(以每天配制50L培養基計算)。常規組培還需要添置高壓鍋等設備及日常維護，此外，常規組培還存在實驗室安全等問題。表4本發明的茉莉花簡便組培方法與常規組培的成本分析表本發明具有如下有益效果：1.本發明的茉莉花抑菌組培方法中，培養容器和培養基都無需高溫高壓滅菌，減少了工作量和能源消耗，簡化了茉莉花組培技術環節，降低了茉莉花組培成本。2.本發明的茉莉花抑菌組培方法，操作簡單，只需按不同的培養基配方配制后即可，實用性強，推廣性好。3.本發明的茉莉花抑菌組培方法與常規的茉莉花組培方法對比，可以降低成本10％以上。具體實施方式為了進一步闡明本發明而不是限制本發明，以下結合實施例加以說明。實施例一：一種利用抑菌培養基培育茉莉花的組培方法一種利用抑菌培養基培育茉莉花的組培方法，包括以下步驟：1.培養容器消毒：將培養瓶、瓶蓋及接種用的塑料盤在取100mg/L次氯酸鈉+5mg/L環絲氨酸+0.5mg/L十二烷基磺酸鈉的水溶液中浸泡不少于10h，保存備用；2.培養基配制：誘導培養基為MS+2mg/L6-BA+0.5mg/LIBA+60mg/L次氯酸鈉+3mg/L環絲氨酸+30mg/L丙酸鈣+0.1mg/L十二烷基磺酸鈉+30g/L蔗糖+3.0g/L瓊脂粉，pH5.8；增殖培養基為：MS+1.5mg/L6-BA+0.3mg/LIBA+60mg/L次氯酸鈉+3mg/L環絲氨酸+30mg/L丙酸鈣+0.1mg/L十二烷基磺酸鈉+30g/L蔗糖+3.0g/L瓊脂粉，pH5.8；生根培養基為1/2MS+1～3mg/LIBA+60mg/L次氯酸鈉+3mg/L環絲氨酸+30mg/L丙酸鈣+0.1mg/L十二烷基磺酸鈉+30g/L蔗糖+3.0g/L瓊脂粉，pH5.8；配制培養基時，先稱各培養基配方中的蔗糖和瓊脂粉，加培養基總重量1/2的自來水，加熱至瓊脂粉完全溶解，再按各培養基配方配齊其他原料后，定容，然后用1.0mol/L的NaOH或1mol/L的HCl調pH值至5.8，分裝到消毒過的培養容器中，封口，冷卻凝固后備用；3.無菌水的制備：采用次氯酸鈉、環絲氨酸、十二烷基磺酸鈉和水配制無菌水，終濃度為100mg/L次氯酸鈉、10mg/L環絲氨酸、0.5mg/L十二烷基磺酸鈉，現配現用；4.誘導培養：剪取無病蟲害生長健壯的茉莉花新梢，剪去葉片后，剪成2～3cm長的帶腋芽莖段，用洗衣粉浸泡沖洗15min后，用體積比為75％酒精消毒30s，再用重量體積比為0.1％升汞浸泡消毒12min，無菌水反復沖洗3次。消毒后的莖段在無菌條件下接種于誘導培養基上，培養30d后長出新芽；培養室溫度為26℃，光照12h，光照強度為1000Lx；5.增殖培養：將誘導出的新芽轉入增殖培養基中，30d后逐步誘導出叢生芽。將叢生芽切開(或將長的新芽再切成帶腋芽的莖段)接種到增殖培養基上；每30d轉接一次，可獲得大量幼芽；培養室溫度為26℃，光照12h，光照強度為1500Lx；6.生根培養：取高度為3～5cm芽苗，接種到生根培養基上，培養25d后成為完整植株；培養室溫度為26℃，光照12h，光照強度為1500Lx；7.瓶苗移栽：將生根培養獲得的完整植株取出，洗凈根部的培養基，用800倍的多菌靈浸泡30min后，移栽至透水性好的微酸性土壤中，大棚上層用遮光網遮蓋，移栽的環境溫度為22～28℃。當前第1頁1 2 3