本發明屬于甘草組織培養技術領域,尤其涉及一種噻苯隆甘草增殖培養基。
背景技術:
甘草,(學名:glycyrrhizauralensisfisch)別名:國老、甜草、烏拉爾甘草、甜根子。豆科、甘草屬多年生草本,根與根狀莖粗壯,是一種補益中草藥。對人體很好的一種藥,藥用部位是根及根莖,藥材性狀根呈圓柱形,長25~100厘米,直徑0.6~3.5厘米。外皮松緊不一,表面紅棕色或灰棕色。根莖呈圓柱形,表面有芽痕,斷面中部有髓。氣微,味甜而特殊。功能主治清熱解毒、祛痰止咳、脘腹等。喜陰暗潮濕,日照長氣溫低的干燥氣候。甘草多生長在干旱、半干旱的荒漠草原、沙漠邊緣和黃土丘陵地帶。根和根狀莖供藥用。傳統的甘草獲取方法是采挖葉生植物資源,造成水土流失和嚴重土壤沙漠化。另外,甘草種子主要來自野生甘草,其品種混雜,種子稀缺,發芽率極低,野生資源不適應規模化和標準化生產的需要。同時由于人們破壞性地對葉生甘草采挖,使野生植物幾乎滅絕,對甘草的保護性利用迫在眉睫,但由于甘草種植發芽率不高和人們對其此生代謝物的需求,從而使甘草的組織培養對研究和生產具有重要作用,然而現有的甘草組培增值系數太低,已經無法滿足目前的需求增長速度。
稀土元素是17種特殊的元素的統稱,它的得名是因為瑞典科學家在提取稀土元素時應用了稀土化合物,所以得名稀土元素。然而稀土是歷史遺留下來的名稱,稀土是從18世紀末開始陸續發現,當時人們常把不溶于水的固體氧化物稱為土,例如,將氧化鋁稱為“陶土”,氧化鈣稱為”堿土“等。稀土一般是以氧化物狀態分離出來的,當時比較稀少,因而得名為稀土(rareearth,簡稱re或r),然而經過大量的科學研究,在組織培養當中添加了稀土元素會大大地提高組織培養的質量。
鈰是周期系第ιιι族副族鑭系元素,一種稀土元素。原子序數58。穩定同位素:136、138、140、142。灰色金屬,有展性。密度:正方晶體6.9,立方晶體6.7。熔點799℃,沸點3426℃。鈰是一種銀灰色的活潑金屬,粉末在空氣中易自燃,易溶于酸。鈰的名稱來源于小行星谷神星的英文名。鈰在地殼中的含量約0.0046%,是稀土元素中豐度最高的。
技術實現要素:
基于現有技術中甘草的需求量巨大但供給品質參差不齊,且現有培養基的誘導效率低的問題,本發明提供一種噻苯隆甘草增殖培養基,其以ms培養基為基礎培養基,并添加tdz(噻苯隆)、naa(萘乙酸)、活性炭、硝酸鈰、維生素、瓊脂粉和白砂糖,其在培養基當中添加了噻苯隆,調整了激素的組成成分及比例以及添加了稀土元素,提高了甘草的增值率,本發明具有增值系數高的優點。
一種噻苯隆甘草增殖培養基,其以ms培養基為基礎培養基,并添加tdz(噻苯隆)、naa(萘乙酸)、活性炭、硝酸鈰、維生素、瓊脂粉和白砂糖。
其中,tdz(噻苯隆)的濃度為0.04-0.08mg/l、naa(萘乙酸)的濃度為1-4mg/l、活性炭的濃度為0.05-0.2mg/l、硝酸鈰的濃度為1-5g/l,維生素的濃度為0.1-0.5mg/l,瓊脂粉的濃度為8-12g/l、白砂糖的濃度為5-10g/l。
其中,tdz(噻苯隆)的濃度為0.05-0.07mg/l、naa(萘乙酸)的濃度為2-3mg/l、活性炭的濃度為0.1-0.15mg/l、硝酸鈰的濃度為2-4g/l,維生素的濃度為0.2-0.4mg/l,瓊脂粉的濃度為9-11g/l、白砂糖的濃度為6-8g/l。
其中,所述的培養基的ph值為5.0-6.0。
其中,所述的培養基的ph值為5.4。
其中,所述的維生素是維生素c。
一種噻苯隆甘草增殖培養基的配制方法,其包括以下步驟:
步驟s10,使用電子秤按照ms培養基標準配方配制1000倍ms培養基母液;
步驟s20,取ms培養基母液配制ms培養基,并按配方添加活性炭、硝酸鈰、瓊脂粉和白砂糖,使用鹽酸或者氫氧化鈉調節培養基ph值;
步驟s30,使用高溫高壓蒸汽滅菌鍋用121℃對培養基滅菌20分鐘,取出培養基并在超凈工作臺中靜置冷卻;
步驟s40,按照配方配制tdz(噻苯隆)、naa(萘乙酸)和維生素溶液,并進行過濾滅菌;
步驟s50,待培養基冷卻到60℃時向培養基中加入步驟s40配制好的試劑,搖晃均勻,靜置,冷卻凝固。
具體實施方式
下面結合具體實施例對本發明作進一步的描述。
實施例一:
按以下步驟配制實驗組ms培養基:
步驟s10,使用電子秤按照ms培養基標準配方配制1000倍ms培養基母液。
步驟s10,使用電子秤按照ms培養基標準配方配制1000倍ms培養基母液;
步驟s20,取ms培養基母液配制ms培養基,并按配方添加活性炭、硝酸鈰、瓊脂粉和白砂糖,使用鹽酸或者氫氧化鈉調節培養基ph值為5.0;
步驟s30,使用高溫高壓蒸汽滅菌鍋用121℃對培養基滅菌20分鐘,取出培養基并在超凈工作臺中靜置冷卻;
步驟s40,按照配方配制tdz(噻苯隆)、naa(萘乙酸)和維生素c溶液,并進行過濾滅菌;
步驟s50,待培養基冷卻到60℃時向培養基中加入步驟s40配制好的試劑,搖晃均勻,靜置,冷卻凝固。
其中培養基的配方如下:以ms培養基為基礎培養基,添加tdz(噻苯隆)的濃度為0.04mg/l、naa(萘乙酸)的濃度為1mg/l、活性炭的濃度為0.05mg/l、硝酸鈰的濃度為1g/l,維生素c的濃度為0.1mg/l,瓊脂粉的濃度為8g/l、白砂糖的濃度為5g/l。
將健康的甘草愈傷組織接種到實驗組ms培養基中出行常規組織培養,20天后計算甘草增值系數,達到3.48。
實施例二:
實施例二與實施例一的不同之處在于,調整了培養基配方濃度和ph值。
按以下步驟配制實驗組ms培養基:
步驟s10,使用電子秤按照ms培養基標準配方配制1000倍ms培養基母液。
步驟s10,使用電子秤按照ms培養基標準配方配制1000倍ms培養基母液;
步驟s20,取ms培養基母液配制ms培養基,并按配方添加活性炭、硝酸鈰、瓊脂粉和白砂糖,使用鹽酸或者氫氧化鈉調節培養基ph值為6.0;
步驟s30,使用高溫高壓蒸汽滅菌鍋用121℃對培養基滅菌20分鐘,取出培養基并在超凈工作臺中靜置冷卻;
步驟s40,按照配方配制tdz(噻苯隆)、naa(萘乙酸)和維生素c溶液,并進行過濾滅菌;
步驟s50,待培養基冷卻到60℃時向培養基中加入步驟s40配制好的試劑,搖晃均勻,靜置,冷卻凝固。
其中培養基的配方如下:以ms培養基為基礎培養基,添加tdz(噻苯隆)的濃度為0.08mg/l、naa(萘乙酸)的濃度為4mg/l、活性炭的濃度為0.2mg/l、硝酸鈰的濃度為5g/l,維生素c的濃度為0.5mg/l,瓊脂粉的濃度為12g/l、白砂糖的濃度為10g/l。
將健康的甘草愈傷組織接種到實驗組ms培養基中出行常規組織培養,20天后計算甘草增值系數,達到3.89。
實施例三:
實施例三與實施例一和二的不同之處在于,調整了培養基配方濃度ph值。
按以下步驟配制實驗組ms培養基:
步驟s10,使用電子秤按照ms培養基標準配方配制1000倍ms培養基母液。
步驟s10,使用電子秤按照ms培養基標準配方配制1000倍ms培養基母液;
步驟s20,取ms培養基母液配制ms培養基,并按配方添加活性炭、硝酸鈰、瓊脂粉和白砂糖,使用鹽酸或者氫氧化鈉調節培養基ph值為5.4;
步驟s30,使用高溫高壓蒸汽滅菌鍋用121℃對培養基滅菌20分鐘,取出培養基并在超凈工作臺中靜置冷卻;
步驟s40,按照配方配制tdz(噻苯隆)、naa(萘乙酸)和維生素c溶液,并進行過濾滅菌;
步驟s50,待培養基冷卻到60℃時向培養基中加入步驟s40配制好的試劑,搖晃均勻,靜置,冷卻凝固。
其中培養基的配方如下:以ms培養基為基礎培養基,添加tdz(噻苯隆)的濃度為0.06mg/l、naa(萘乙酸)的濃度為2.5mg/l、活性炭的濃度為0.15mg/l、硝酸鈰的濃度為3g/l,維生素c的濃度為0.3mg/l,瓊脂粉的濃度為10g/l、白砂糖的濃度為7g/l。
將健康的甘草愈傷組織接種到實驗組ms培養基中出行常規組織培養,20天后計算甘草增值系數,達到4.32。