本發明屬于植物種子催芽領域，具體涉及一種黃瑞香種子的高效催芽方法。
背景技術：
黃瑞香(daphnegiraldiinitsche.)，屬瑞香科，瑞香屬植物，別名打結花、結香。野生黃瑞香主要分布于陜西、甘肅、四川、青海、寧夏等省區，河南、江西及山西等省區亦有分布，一般生長于海拔1600m左右山地。甘肅省主要分莖皮和根皮入藥，稱祖師麻，味辛、苦，性溫，有小毒，具有祛風通絡、祛瘀止痛之功效，臨床用于跌打損傷、風濕性關節炎及止痛等，為民間治療風濕和止痛的常用中藥。制劑有祖師麻膏藥、祖師麻關節止痛膏、祖師麻片、祖師麻注射液。
種子的休眠現象是植物為適應氣候變化、溫度差異、水分條件等環境因素并保持自身繁殖發展而形成的一種生物學特性，具有重要的意義。因而許多較為寒冷地區生長的植物種子在秋天果實成熟后在適宜的溫度、濕度和光照條件下難以萌發，保持休眠狀態直到來年春季才萌發。祁連山野生的黃瑞香生長在海波2500米左右的半蔭半陽的緩坡地帶，是云杉等喬木的伴生小灌木。為了適應祁連山寒冷的冬季和涼爽的夏季氣候，黃瑞香具有較強的耐寒能力且其種子具有休眠特性。從7月黃瑞香果實成熟，一直到9月中下旬其果肉一直包裹著種子。
植物黃瑞香目前為野生資源，是中藥材祖師麻的原植物，使用部位是根皮和莖皮，過度的不合理連根采挖方式，使植物資源受到嚴重破壞，導致祖師麻原植物極度緊缺。由于野生黃瑞香種子具有顯著的休眠性，發芽率非常低，很難滿足生產需求，這勢必影響野生黃瑞香的人工繁殖和其藥用價值的充分利用。cn102845199a公開了一種野生祖師麻種子繁育技術，其通過種子采集、種子層積、育苗、大田移栽定植、田間管護這些步驟完成種子繁育。采用上述步驟繁育祖師麻，可使祖師麻種子發芽率穩定的達到71.3％以上，層積處理后的種子成苗率達66％以上，經精選后成苗率達85％以上。野生祖師麻種子繁育技術研究的成功，標志著野生祖師麻進祖師麻人工種子繁育技術，其通過種子采集、種子行人工繁育種植已完全可以實現。cn103797931a公開了屬于中藥材種子質量鑒定及栽培領域的一種破除黃瑞香種子休眠的方法。該方法包括以下步驟：(1)種子消毒：將供試種子用高錳酸鉀溶液浸泡消毒，用蒸餾水沖洗干凈；(2)窖內濕藏：將步驟(1)得到的種子與濕砂混合后按堆堆放在菜窖內進行濕藏。本發明的黃瑞香種子高效催芽的方法，簡便易行、原理可靠、可重復性好、效果好、可快速破除黃瑞香種子的休眠、能有效提高黃瑞香種子的發芽率和發芽勢，工作效率高、重復性好，黃瑞香種子的發芽率達到30.47％，發芽勢達到18.12％。提供一種快速解除野生黃瑞香種子休眠的方法是人工快速、大面積育苗的當務之急。
技術實現要素：
針對上述問題，本發明提出了一種黃瑞香種子的高效催芽方法，具體如下：
一種黃瑞香種子的高效催芽方法，至少包括先依次進行的25℃和30℃恒溫靜置步驟，和后進行的ga3溶液浸種步驟。
優選的，所述依次進行的25℃和30℃恒溫處理步驟為：先25℃恒溫箱中靜置5-30天，再30℃恒溫箱中靜置5-30天；
優選的，所述ga3溶液浸種步驟為：用10-500mg·l-1ga3溶液浸種12h-48h，8h換溶液一次；然后用蒸餾水沖洗干凈并室內陰干12h；
進一步優選的，所述依次進行的25℃和30℃恒溫處理步驟為：先25℃恒溫箱中靜置15天，再30℃恒溫箱中靜置15天；
進一步優選的，所述ga3溶液浸種步驟為：用150mg·l-1ga3溶液浸種24h，8h換溶液一次；然后用蒸餾水沖洗干凈并室內12小時陰干；
優選的，還包括依次進行的25℃和30℃恒溫靜置步驟之前的步驟和ga3溶液浸種步驟之后的步驟；所述依次進行的25℃和30℃恒溫靜置步驟之前的步驟為：采摘成熟到果皮呈深紅色時的黃瑞香果實，搓洗去除果皮和果肉后室內陰干，從采摘到室內陰干共用3天；挑選飽滿種子置于牛皮紙袋內備用；所述ga3溶液浸種步驟之后的步驟為：先，取ga3溶液浸種步驟處理過的種子，用5％的高錳酸鉀溶液浸泡消毒10分鐘，然后用蒸餾水沖洗干凈；再，取河沙和高錳酸鉀溶液浸泡消毒和蒸餾水沖洗處理過的種子按5:1的比例混勻于發芽盒內，置于7℃的冰箱中置25天。
本發明的采摘、去除果皮和果肉后、陰干、挑選處理步驟，目的在于挑選準備后續處理的種子；單獨的25℃和30℃恒溫處理步驟，目的在于促進生理后熟；單獨的ga3溶液浸種處理步驟，目的在于縮短休眠時間；高錳酸鉀溶液浸泡處理步驟，目的在于去消毒、抑制種子表面的微生物；河沙和種子混合置冰箱處理步驟，目的促進種皮破殼、出芽。
本發明中所述的ga3為赤霉素，所述的5％的高錳酸鉀溶液為質量體積比，所述的河沙為濕河沙，握能成團、松能散開。
本發明方法通過恒溫靜置處理種子使種子完成生理后熟，從而有利于休眠的打破；進一步的赤霉素浸種和低溫層積的結合可顯著的縮短其休眠的打破時間，從采種到種子休眠解除、種子裂口，前后58天左右就達到了92％的裂口率。
本發明的有益效果是，本發明提出了一種黃瑞香種子的高效催芽方法，處理步驟簡單，容易操作，可重復性高，方便推廣，所述設備和試劑普通，價格低廉，更重要的是破除種子休眠的效率高，需要的時間短。
具體實施方式
為詳細說明本發明之技術內容、構造特征、所達成目的及功效，以下茲例舉實施例詳予說明。
實施例1
一種黃瑞香種子的高效催芽方法，包括以下步驟：
s1，采摘成熟到果皮呈深紅色時的黃瑞香果實，搓洗去除果皮和果肉后室內陰干，從采摘到室內陰干共用3天；挑選飽滿種子置于牛皮紙袋內備用；
s2，取s1步驟處理過的種子，25℃恒溫箱中靜置5天；
s3，取s2步驟處理過的種子，30℃恒溫箱中靜置5天；
s4，取s3步驟處理過的種子，用10mg·l-1ga3溶液浸種12h，8h換溶液一次；然后用蒸餾水沖洗干凈并室內12小時陰干；
s5，取s4步驟處理過的種子，用5％的高錳酸鉀溶液浸泡消毒10分鐘，然后用蒸餾水沖洗干凈；
s6，取河沙和s5步驟處理過的種子按5:1的比例混勻于發芽盒內，置于7℃的冰箱中置25天。
實施例2
一種黃瑞香種子的高效催芽方法，包括以下步驟：
s1，采摘成熟到果皮呈深紅色時的黃瑞香果實，搓洗去除果皮和果肉后室內陰干，從采摘到室內陰干共用3天；挑選飽滿種子置于牛皮紙袋內備用；
s2，取s1步驟處理過的種子，25℃恒溫箱中靜置5天；
s3，取s2步驟處理過的種子，30℃恒溫箱中靜置5天；
s4，取s3步驟處理過的種子，用500mg·l-1ga3溶液浸種48h，8h換溶液一次；然后用蒸餾水沖洗干凈并室內12小時陰干；
s5，取s4步驟處理過的種子，用5％的高錳酸鉀溶液浸泡消毒10分鐘，然后用蒸餾水沖洗干凈；
s6，取河沙和s5步驟處理過的種子按5:1的比例混勻于發芽盒內，置于7℃的冰箱中置25天。
實施例3
一種黃瑞香種子的高效催芽方法，包括以下步驟：
s1，采摘成熟到果皮呈深紅色時的黃瑞香果實，搓洗去除果皮和果肉后室內陰干，從采摘到室內陰干共用3天；挑選飽滿種子置于牛皮紙袋內備用；
s2，取s1步驟處理過的種子，25℃恒溫箱中靜置30天；
s3，取s2步驟處理過的種子，30℃恒溫箱中靜置30天；
s4，取s3步驟處理過的種子，用10mg·l-1ga3溶液浸種12h，8h換溶液一次；然后用蒸餾水沖洗干凈并室內12小時陰干；
s5，取s4步驟處理過的種子，用5％的高錳酸鉀溶液浸泡消毒10分鐘，然后用蒸餾水沖洗干凈；
s6，取河沙和s5步驟處理過的種子按5:1的比例混勻于發芽盒內，置于7℃的冰箱中置25天。
實施例4
一種黃瑞香種子的高效催芽方法，包括以下步驟：
s1，采摘成熟到果皮呈深紅色時的黃瑞香果實，搓洗去除果皮和果肉后室內陰干，從采摘到室內陰干共用3天；挑選飽滿種子置于牛皮紙袋內備用；
s2，取s1步驟處理過的種子，25℃恒溫箱中靜置30天；
s3，取s2步驟處理過的種子，30℃恒溫箱中靜置30天；
s4，取s3步驟處理過的種子，用500mg·l-1ga3溶液浸種48h，8h換溶液一次；然后用蒸餾水沖洗干凈并室內12小時陰干；
s5，取s4步驟處理過的種子，用5％的高錳酸鉀溶液浸泡消毒10分鐘，然后用蒸餾水沖洗干凈；
s6，取河沙和s5步驟處理過的種子按5:1的比例混勻于發芽盒內，置于7℃的冰箱中置25天。
實施例5
一種黃瑞香種子的高效催芽方法，包括以下步驟：
s1，采摘成熟到果皮呈深紅色時的黃瑞香果實，搓洗去除果皮和果肉后室內陰干，從采摘到室內陰干共用3天；挑選飽滿種子置于牛皮紙袋內備用；
s2，取s1步驟處理過的種子，25℃恒溫箱中靜置15天；
s3，取s2步驟處理過的種子，30℃恒溫箱中靜置15天；
s4，取s3步驟處理過的種子，用150mg·l-1ga3溶液浸種24h，8h換溶液一次；然后用蒸餾水沖洗干凈并室內12小時陰干；
s5，取s4步驟處理過的種子，用5％的高錳酸鉀溶液浸泡消毒10分鐘，然后用蒸餾水沖洗干凈；
s6，取河沙和s5步驟處理過的種子按5:1的比例混勻于發芽盒內，置于7℃的冰箱中置25天。
對照例1
一種黃瑞香種子的高效催芽方法，包括以下步驟：
s1，采摘成熟到果皮呈深紅色時的黃瑞香果實，搓洗去除果皮和果肉后室內陰干，從采摘到室內陰干共用3天；挑選飽滿種子置于牛皮紙袋內備用；
s5，取s1步驟處理過的種子，用5％的高錳酸鉀溶液浸泡消毒10分鐘，然后用蒸餾水沖洗干凈；
s6，取河沙和s5步驟處理過的種子按5:1的比例混勻于發芽盒內，置于7℃的冰箱中置25天。
對照例2
一種黃瑞香種子的高效催芽方法，包括以下步驟：
s1，采摘成熟到果皮呈深紅色時的黃瑞香果實，搓洗去除果皮和果肉后室內陰干，從采摘到室內陰干共用3天；挑選飽滿種子置于牛皮紙袋內備用；
s4，取s1步驟處理過的種子，用150mg·l-1ga3溶液浸種24h，8h換溶液一次；然后用蒸餾水沖洗干凈并室內12小時陰干；
s5，取s4步驟處理過的種子，用5％的高錳酸鉀溶液浸泡消毒10分鐘，然后用蒸餾水沖洗干凈；
s6，取河沙和s5步驟處理過的種子按5:1的比例混勻于發芽盒內，置于7℃的冰箱中置25天。
對照例3
一種黃瑞香種子的高效催芽方法，包括以下步驟：
s1，采摘成熟到果皮呈深紅色時的黃瑞香果實，搓洗去除果皮和果肉后室內陰干，從采摘到室內陰干共用3天；挑選飽滿種子置于牛皮紙袋內備用；
s2，取s1步驟處理過的種子，25℃恒溫箱中靜置15天；
s3，取s2步驟處理過的種子，30℃恒溫箱中靜置15天；
s5，取s3步驟處理過的種子，用5％的高錳酸鉀溶液浸泡消毒10分鐘，然后用蒸餾水沖洗干凈；
s6，取河沙和s5步驟處理過的種子按5:1的比例混勻于發芽盒內，置于7℃的冰箱中置25天。
對照例4
一種黃瑞香種子的高效催芽方法，包括以下步驟：
s1，采摘成熟到果皮呈深紅色時的黃瑞香果實，搓洗去除果皮和果肉后室內陰干，從采摘到室內陰干共用3天；挑選飽滿種子置于牛皮紙袋內備用；
s3，取s2步驟處理過的種子，30℃恒溫箱中靜置15天；
s4，取s1步驟處理過的種子，用150mg·l-1ga3溶液浸種24h，8h換溶液一次；然后用蒸餾水沖洗干凈并室內12小時陰干；
s5，取s3步驟處理過的種子，用5％的高錳酸鉀溶液浸泡消毒10分鐘，然后用蒸餾水沖洗干凈；
s6，取河沙和s5步驟處理過的種子按5:1的比例混勻于發芽盒內，置于7℃的冰箱中置25天。
對照例5
一種黃瑞香種子的高效催芽方法，包括以下步驟：
s1，采摘成熟到果皮呈深紅色時的黃瑞香果實，搓洗去除果皮和果肉后室內陰干，從采摘到室內陰干共用3天；挑選飽滿種子置于牛皮紙袋內備用；
s3，取s2步驟處理過的種子，30℃恒溫箱中靜置15天；
s4，取s1步驟處理過的種子，用150mg·l-1ga3溶液浸種24h，8h換溶液一次；然后用蒸餾水沖洗干凈并室內12小時陰干；
s5，取s3步驟處理過的種子，用5％的高錳酸鉀溶液浸泡消毒10分鐘，然后用蒸餾水沖洗干凈；
s6，取河沙和s5步驟處理過的種子按5:1的比例混勻于發芽盒內，置于7℃的冰箱中置25天。
實驗例1處理方法對野生黃瑞香種子裂口率的影響
本實驗采用裂口率來評價處理方法對野生黃瑞香種子催芽的效果，裂口率的計算公式為：裂口率＝(裂口種子數/總種子數)×100％。一種黃瑞香種子的高效催芽方法
供試的黃瑞香(daphnegiraldiinitsche.)種子采于自海拔2500m～2600m的甘肅省武威市天祝縣祁連鄉布爾草原(103°33′26"e，38°43′31"n)，坡向東西，坡度約為25°。果實成熟到果皮呈深紅色時采摘。
取同一棵樹上相同成熟度的果皮呈深紅色的果子，經過實施例1-5處理后，在置于7℃的冰箱中的第25天觀察結果。從河沙中取出種子，觀察種皮有無裂口，計算裂口率。處理總天數以天為單位，12小時記為0.5天，不足1小時記為0天。對照例1-5處理后，在置于7℃的冰箱中的第25天觀察結果，然后繼續直至總天數第59.5天再次觀察結果。
表1不同處理方法的野生黃瑞香種子的裂口率
*符號數目相同表示沒有顯著性差異，數目不同表示有顯著性差異(p＝0.05)
從表1中可以看出，對照例1-3的第一次和第二次觀察結果，野生黃瑞香種子的裂口率為0，說明單獨的恒溫靜置和ga3溶液浸種均不能有效破除休眠，對照例4-5的第一次和第二次觀察結果裂口率也為0，說明25°和30°兩個單一溫度的恒溫靜置分別和ga3溶液浸種聯合處理也不能有效破除野生黃瑞香種子休眠。
實施例1-5的野生黃瑞香種子的裂口率均能達到40％以上，遠遠高于對照例1-5的兩個觀察結果，說明先后25°和30°兩個單一溫度的恒溫靜置和ga3溶液浸種聯合處理可以有效破除野生黃瑞香種子的休眠，25°恒溫靜置、30°恒溫靜置和ga3溶液浸種三個處理步驟之間具有協同性，而25°恒溫靜置與ga3溶液浸種、和30°恒溫靜置與ga3溶液浸種兩個處理步驟之間均不具有協同性。實施例2與實施例1、實施例4與實施例3相比，增加ga3溶液浸種的濃度和時間(從10mg·l-1浸種12h到500mg·l-1浸種48h)，裂口率有差異但不具顯著性，ga3溶液浸種的濃度和時間與裂口率之間不呈線性關系。實施例3與實施例1、實施例4與實施例2相比，增加25°和30°恒溫靜置的時間(從均為5天到均為30)，裂口率有差異但不具顯著性，恒溫靜置的時間與裂口率之間也不呈線性關系。
實施例1-5中黃瑞香種子裂口率以實施例5處理為最優，顯著高于實施例1-4，竟然達到了92％，說明25℃恒溫箱中靜置15天、30℃恒溫箱中靜置15天和用150mg·l-1ga3溶液浸種24h能夠快速有效的破除種子休眠。同時處理總天數為58天左右，處理總天數比較短，可以用于人工快速、大面積育苗的實際生產中。
本發明方法通過恒溫靜置處理種子使種子完成生理后熟，從而有利于休眠的打破；進一步的赤霉素浸種可顯著的縮短其休眠的打破時間，兩個恒溫靜置處理步驟和赤霉素浸種之間具有關聯協同作用。
綜上所述，僅為本發明之較佳實施例，不以此限定本發明的保護范圍，凡依本發明專利范圍及說明書內容所作的等效變化與修飾，皆為本發明專利涵蓋的范圍之內。