本發明屬于無性繁殖領域，具體涉及一種穩定、高效的朝鮮薊植株再生無性繁殖方法。
背景技術：
：朝鮮薊是菊科中以花蕾(花托和嫩苞葉)供食的栽培種，屬于菜薊屬，多年生草本植物。別名法國百合、荷花百合、洋薊、菊薊等。原產地中海沿岸，歐美各國均有栽培，法國栽培最多。19世紀從法國傳入上海、云南栽培。葉柄經軟化栽培后可煮食，味清淡，富含維生素A、B、C，鐵及淀粉等。朝鮮薊中還含有菜薊素、黃酮類化合物及天門冬酰胺等對人體有益的成分。經加工可以制成花蕾罐頭、葉酒及系列飲料等。朝鮮薊不僅可出口創匯，而且隨著人民生活水平的提高，國內對朝鮮薊的食用也會逐漸普及。朝鮮薊目前的繁殖方式主要是種子繁殖和分株繁殖。用種子繁殖不能保證品種的優良特性；分株繁殖成本高，且不易管理。由于氣候差異，朝鮮薊在湖南、云南等主栽區只開花不結果，以致種子年年都需進口。這不僅成本高，而且經常因茬口接不上而延誤農時。朝鮮薊是異花授粉作物，繁殖率低，易變異，病害傳播快。利用組織培養技術繁殖朝鮮薊，不僅可以大量生產無病毒苗，而且在特定區域能快速釋放選定的基因型。無性繁殖是指不經生殖細胞結合的受精過程，由母體的一部分直接產生子代的繁殖方法。在林業上常用樹木營養器官的一部分和花芽、花藥、雌配子體等材料進行無性繁殖。花藥、花芽、雌配子體常用組織培養法離體繁殖。生根后的植物與母株法的基因是完全相同的。用此法繁育的苗木稱無性繁殖苗。無性繁殖生長速度快，開花結果早，且能保持母體的優良特性、繁殖速度快。發明人試圖直接通過莖尖產生不定芽建立高效、穩定的朝鮮薊離體培養無性繁殖方法。技術實現要素：本發明的目的在于提供一種穩定、高效的朝鮮薊植株再生無性繁殖方法。本發明目的是通過如下技術方案實現：一種朝鮮薊植株再生無性繁殖方法，包括外植體的選取、外植體的消毒、叢生芽的誘導、叢生芽的增殖、生根培養、試管小苗的馴化和移栽，移栽所用的生長基質由如下重量份的物質混合而成：園土，70-90份；沙，40-60份；珍珠巖粉，20-30份；雞糞，10-20份；水黃皮素，0.05-0.15份。優選地，外植體選取大田中農藝性狀好、無病毒的朝鮮薊分蘗芽。優選地，外植體的消毒方法為：留取分蘗芽3-4cm的莖尖段洗凈后轉至無菌室，先用75％酒精處理10s，清洗2-3次后，再用0.1％升汞處理8-10min，用無菌水沖洗4-5次后，置于消毒濾紙上吸干水分。優選地，叢生芽的誘導方法為：將消毒后的莖尖段切成0.5cm大接入芽誘導培養基MS+1mg/L6-BA+0.5mg/LNAA；3-5天后，切口處膨大，莖尖開始變綠、伸長；10-15天后，腋芽開始萌發、伸長；30天后，形成至少8個葉片的叢生芽。優選地，叢生芽的增殖方法為：將誘導出的叢生芽切成帶2-3片葉的芽塊，剔除褐化的組織，并轉入增殖培養基MS+0.5mg/L6-BA+0.05mg/LNAA中；7天后，腋芽開始分化；15天后，即可形成叢生芽。優選地，生根培養方法為：將長勢好、葉色濃綠、苗高2-3cm的叢生芽切成帶3-4片葉的試管小苗，移至生根培養基1/2MS+1.0mg/LNAA+1.0mg/Lβ-CD+100mg/L肌醇上，7天后，莖段基部根原基突起；15天后，從根原基長出新的不定根。優選地，試管小苗的馴化和移栽方法為：當幼苗的根長達0.5-1.0厘米時進行移栽，移栽前在溫室內開瓶煉苗2-3天，午后和傍晚噴水；小苗轉移到苗床前，用自來水把根系上的培養基沖洗干凈，同時用1000倍甲基托布津或多菌靈浸泡小苗根部30分鐘，隨后放置于通風陰涼處晾干水分至根系發白變軟，再栽入已準備好的生長基質中；栽后必須通風、保濕，溫度高時揭開膜兩端降溫；待10-l5天后有效葉達3片以上時移栽到大田。上述培養基中均加入40g/L白糖和5g/L瓊脂粉，pH值5.5；培養溫度25±2℃，光照時間16h/天，光照強度50μmol/(m2·s)。技術效果：本發明提供的再生無性繁殖方法培育的小苗移栽到大田后，成活率能保證98％以上。具體實施方式下面結合實施例進一步說明本發明實質內容。下述實施例各培養基中均加入40g/L白糖和5g/L瓊脂粉，pH值5.5；培養溫度25±2℃，光照時間16h/天，光照強度50μmol/(m2·s)。實施例1：朝鮮薊植株再生無性繁殖方法包括外植體的選取、外植體的消毒、叢生芽的誘導、叢生芽的增殖、生根培養、試管小苗的馴化和移栽，移栽所用的生長基質由如下重量份的物質混合而成：園土，80份；沙，50份；珍珠巖粉，25份；雞糞，15份；水黃皮素，0.10份。1、外植體選取大田中農藝性狀好、無病毒的朝鮮薊分蘗芽。2、外植體的消毒方法為：留取分蘗芽3-4cm的莖尖段洗凈后轉至無菌室，先用75％酒精處理10s，清洗2-3次后，再用0.1％升汞處理8-10min，用無菌水沖洗4-5次后，置于消毒濾紙上吸干水分。3、叢生芽的誘導方法為：將消毒后的莖尖段切成0.5cm大接入芽誘導培養基MS+1mg/L6-BA+0.5mg/LNAA；3-5天后，切口處膨大，莖尖開始變綠、伸長；10-15天后，腋芽開始萌發、伸長；30天后，形成至少8個葉片的叢生芽。4、叢生芽的增殖方法為：將誘導出的叢生芽切成帶2-3片葉的芽塊，剔除褐化的組織，并轉入增殖培養基MS+0.5mg/L6-BA+0.05mg/LNAA中；7天后，腋芽開始分化；15天后，即可形成叢生芽。5、生根培養方法為：將長勢好、葉色濃綠、苗高2-3cm的叢生芽切成帶3-4片葉的試管小苗，移至生根培養基1/2MS+1.0mg/LNAA+1.0mg/Lβ-CD+100mg/L肌醇上，7天后，莖段基部根原基突起；15天后，從根原基長出新的不定根。6、試管小苗的馴化和移栽方法為：當幼苗的根長達0.5-1.0厘米時進行移栽，移栽前在溫室內開瓶煉苗2-3天，午后和傍晚噴水；小苗轉移到苗床前，用自來水把根系上的培養基沖洗干凈，同時用1000倍甲基托布津或多菌靈浸泡小苗根部30分鐘，隨后放置于通風陰涼處晾干水分至根系發白變軟，再栽入已準備好的生長基質中；栽后必須通風、保濕，溫度高時揭開膜兩端降溫；待10-l5天后有效葉達3片以上時移栽到大田。實施例2：朝鮮薊植株再生無性繁殖方法包括外植體的選取、外植體的消毒、叢生芽的誘導、叢生芽的增殖、生根培養、試管小苗的馴化和移栽，移栽所用的生長基質由如下重量份的物質混合而成：園土，70份；沙，40份；珍珠巖粉，20份；雞糞，10份；水黃皮素，0.05份。1、外植體選取大田中農藝性狀好、無病毒的朝鮮薊分蘗芽。2、外植體的消毒方法為：留取分蘗芽3-4cm的莖尖段洗凈后轉至無菌室，先用75％酒精處理10s，清洗2-3次后，再用0.1％升汞處理8-10min，用無菌水沖洗4-5次后，置于消毒濾紙上吸干水分。3、叢生芽的誘導方法為：將消毒后的莖尖段切成0.5cm大接入芽誘導培養基MS+1mg/L6-BA+0.5mg/LNAA；3-5天后，切口處膨大，莖尖開始變綠、伸長；10-15天后，腋芽開始萌發、伸長；30天后，形成至少8個葉片的叢生芽。4、叢生芽的增殖方法為：將誘導出的叢生芽切成帶2-3片葉的芽塊，剔除褐化的組織，并轉入增殖培養基MS+0.5mg/L6-BA+0.05mg/LNAA中；7天后，腋芽開始分化；15天后，即可形成叢生芽。5、生根培養方法為：將長勢好、葉色濃綠、苗高2-3cm的叢生芽切成帶3-4片葉的試管小苗，移至生根培養基1/2MS+1.0mg/LNAA+1.0mg/Lβ-CD+100mg/L肌醇上，7天后，莖段基部根原基突起；15天后，從根原基長出新的不定根。6、試管小苗的馴化和移栽方法為：當幼苗的根長達0.5-1.0厘米時進行移栽，移栽前在溫室內開瓶煉苗2-3天，午后和傍晚噴水；小苗轉移到苗床前，用自來水把根系上的培養基沖洗干凈，同時用1000倍甲基托布津或多菌靈浸泡小苗根部30分鐘，隨后放置于通風陰涼處晾干水分至根系發白變軟，再栽入已準備好的生長基質中；栽后必須通風、保濕，溫度高時揭開膜兩端降溫；待10-l5天后有效葉達3片以上時移栽到大田。實施例3：朝鮮薊植株再生無性繁殖方法包括外植體的選取、外植體的消毒、叢生芽的誘導、叢生芽的增殖、生根培養、試管小苗的馴化和移栽，移栽所用的生長基質由如下重量份的物質混合而成：園土，90份；沙，60份；珍珠巖粉，30份；雞糞，20份；水黃皮素，0.15份。1、外植體選取大田中農藝性狀好、無病毒的朝鮮薊分蘗芽。2、外植體的消毒方法為：留取分蘗芽3-4cm的莖尖段洗凈后轉至無菌室，先用75％酒精處理10s，清洗2-3次后，再用0.1％升汞處理8-10min，用無菌水沖洗4-5次后，置于消毒濾紙上吸干水分。3、叢生芽的誘導方法為：將消毒后的莖尖段切成0.5cm大接入芽誘導培養基MS+1mg/L6-BA+0.5mg/LNAA；3-5天后，切口處膨大，莖尖開始變綠、伸長；10-15天后，腋芽開始萌發、伸長；30天后，形成至少8個葉片的叢生芽。4、叢生芽的增殖方法為：將誘導出的叢生芽切成帶2-3片葉的芽塊，剔除褐化的組織，并轉入增殖培養基MS+0.5mg/L6-BA+0.05mg/LNAA中；7天后，腋芽開始分化；15天后，即可形成叢生芽。5、生根培養方法為：將長勢好、葉色濃綠、苗高2-3cm的叢生芽切成帶3-4片葉的試管小苗，移至生根培養基1/2MS+1.0mg/LNAA+1.0mg/Lβ-CD+100mg/L肌醇上，7天后，莖段基部根原基突起；15天后，從根原基長出新的不定根。6、試管小苗的馴化和移栽方法為：當幼苗的根長達0.5-1.0厘米時進行移栽，移栽前在溫室內開瓶煉苗2-3天，午后和傍晚噴水；小苗轉移到苗床前，用自來水把根系上的培養基沖洗干凈，同時用1000倍甲基托布津或多菌靈浸泡小苗根部30分鐘，隨后放置于通風陰涼處晾干水分至根系發白變軟，再栽入已準備好的生長基質中；栽后必須通風、保濕，溫度高時揭開膜兩端降溫；待10-l5天后有效葉達3片以上時移栽到大田。對比實施例包括外植體的選取、外植體的消毒、叢生芽的誘導、叢生芽的增殖、生根培養、試管小苗的馴化和移栽，移栽所用的生長基質由如下重量份的物質混合而成：園土，80份；沙，50份；珍珠巖粉，25份；雞糞，15份。1、外植體選取大田中農藝性狀好、無病毒的朝鮮薊分蘗芽。2、外植體的消毒方法為：留取分蘗芽3-4cm的莖尖段洗凈后轉至無菌室，先用75％酒精處理10s，清洗2-3次后，再用0.1％升汞處理8-10min，用無菌水沖洗4-5次后，置于消毒濾紙上吸干水分。3、叢生芽的誘導方法為：將消毒后的莖尖段切成0.5cm大接入芽誘導培養基MS+1mg/L6-BA+0.5mg/LNAA；3-5天后，切口處膨大，莖尖開始變綠、伸長；10-15天后，腋芽開始萌發、伸長；30天后，形成至少8個葉片的叢生芽。4、叢生芽的增殖方法為：將誘導出的叢生芽切成帶2-3片葉的芽塊，剔除褐化的組織，并轉入增殖培養基MS+0.5mg/L6-BA+0.05mg/LNAA中；7天后，腋芽開始分化；15天后，即可形成叢生芽。5、生根培養方法為：將長勢好、葉色濃綠、苗高2-3cm的叢生芽切成帶3-4片葉的試管小苗，移至生根培養基1/2MS+1.0mg/LNAA+1.0mg/Lβ-CD+100mg/L肌醇上，7天后，莖段基部根原基突起；15天后，從根原基長出新的不定根。6、試管小苗的馴化和移栽方法為：當幼苗的根長達0.5-1.0厘米時進行移栽，移栽前在溫室內開瓶煉苗2-3天，午后和傍晚噴水；小苗轉移到苗床前，用自來水把根系上的培養基沖洗干凈，同時用1000倍甲基托布津或多菌靈浸泡小苗根部30分鐘，隨后放置于通風陰涼處晾干水分至根系發白變軟，再栽入已準備好的生長基質中；栽后必須通風、保濕，溫度高時揭開膜兩端降溫；待10-l5天后有效葉達3片以上時移栽到大田。實施例1-3及對比實施例移栽到大田后的成活率如下：實施例1實施例2實施例3對比實施例成活率100％99％100％90％本發明提供的再生無性繁殖方法培育的小苗移栽到大田后，成活率能保證98％以上。當前第1頁1 2 3