專利名稱：中國被毛孢菌粉生產方法
技術領域：
本發明涉及一種微生物的生產方法，特別涉及一種冬蟲夏草中國被毛孢菌 粉的生產方法。
背景技術：
冬蟲夏草是麟翅目蝙蝠蛾屬的蟲草蝙蝠蛾(Hepialus armoricamus Oberthur)
幼蟲感染中國被毛孢真菌后，在體內大量繁殖后形成的蟲菌復合體。中國專利 CN97110448.4公開的中國冬蟲夏草真菌的發酵生產方法，CN200410101728.X
公開的冬蟲夏草大規模發酵生產及菌粉加工工藝。上述兩件專利均利用中國被 毛孢菌種利用大型工業發酵罐逐級擴大繁殖的四級深層發酵方法生產出菌粉， 其缺點是沿用了抗生素發酵模式，菌粉中培養基的化學物質易殘留，環節復雜， 污染機率大，設備投資大，風險大，生產周期長，得率低。 一直以來，本領域 技術人員從未考慮過不采用四級液體深層發酵生產冬蟲夏草菌粉的方法，比如 固體培養、液體靜止培養或固液聯合靜止培養以縮短生產周期、降低投資風險、 提高生產得率，而且技術人員對此種思路認為完全否定。

發明內容
本發明的目的是克服現有技術的不足和上述技術偏見，提供一種完全不同 于以往生產冬蟲夏草中國被毛孢生產菌粉的新方法。
本發明所需的菌種為中國被毛孢(Hirsutella sinensis Liu，Guo,Yu et Zeng)。 現保存在中國微生物保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏編號 CGMCCNo.2126，包藏日期2007年8月6日。
本發明的技術解決方案是通過以下方法來實現的 一種中國被毛孢菌粉的 生產方法包括如下歩驟首先，將谷類10 50%、豆類0 10%、水50 70%按重量百分比配比后置 入培養容器，培養基占培養容器體積的1/5 4/5，在120 13(TC、 0.15Mpa條件 下滅菌20 40分鐘，接入占培養基重量1% 4%的中國被毛孢菌種在0 14°C 條件下培養2 5天培養基表面長滿菌絲；
其次，在培養容器中補加占上述培養基重量20 40%的液體培養基，該培 養基按重量百分比計蛋91 100%、奶0 0.9%、馬鈴薯0 0.9%、胡蘿卜汁0 1.9%在0 14"C條件下培養3 8天；
最后，將培養物取出、千燥、粉碎即得中國被毛孢菌粉。
優選步驟是步驟一將谷類20 40%、豆類0 6%、水55 65%按重量 百分比配比后置入培養容器，培養基占培養容器體積的2/5 4/5，在122 128"C、 0.15Mpa條件下滅菌25 35分鐘，接入占培養基重量2% 4%的中國被毛孢菌 種在3 1(TC條件下培養3 4天培養基表面長滿菌絲；
歩驟二在培養容器中補加占上述培養基重量25 35%的液體培養基，該 培養基按重量百分比計蛋93 98°/。、奶0.3 0.6%、馬鈴薯0.3 0.6%、胡蘿卜 汁0.5 1.5%在5 10。C條件下培養4 7天；
步驟三將培養物取出、干燥、粉碎即得中國被毛孢菌粉。 '最好采用的步驤是步驟一將谷類30%、豆類5%、水65%按重量百分比 配比后置入培養容器，培養基占培養容器體積的3/5，在125°C、 0.15Mpa條件 下滅菌27分鐘，接入占培養基重量3%的中國被毛孢菌種在6"C條件下培養3 天培養基表面長滿菌絲；
步驟二在培養容器中補加占上述培養基重量30%的液體培養基，該培養 基按重量百分比計蛋98%、奶0.5%、馬鈴薯0.5%、胡蘿卜汁1%在8"條件下 培養5天；
歩驟三將培養物取出、干燥、粉碎即得中國被毛孢菌粉。
還可直接將谷類20 50%、豆類0 20%、水50 70°/。按重量百分比配比后 置入培養容器，培養基占培養容器體積的1/5 4/5，在120 130°C、 0.15Mpa 條件下滅菌20 40分鐘，接入占培養基重量1% 4%的中國被毛孢菌種在0 14。C條件下培養10 20天后取出培養物干燥、粉碎可得中國被毛孢菌粉也可將培養基按重量百分比計蛋91 100%、奶0 0.9"/。、馬鈴薯0 0.9%、 胡蘿卜汁0 1.9%、蛋白胨0 9%在120 130°C、 0.15Mpa條件下滅菌20 40 分鐘，接入占培養基重量1% 4%的0 1fC條件下培養7 10天；
上述步驟一培養基中的水可用液體奶或含糖、蛋白質的液體代替，其中糖 占液體總重量的1 10%，蛋白質占1 20%。
上述中國被毛孢菌粉的專用培養容器，最好采用食用級耐高溫材質的容器 (包括瓶塞)，瓶底直徑最好大于等于瓶口直徑。
上述方法及培養容器還可用于冬蟲夏草擬青霉、頭孢菌及其他伴生菌粉的 生產。
本發明的效果是發酵周期短，工藝簡單、無化學殘留、污染機率小、設
備投資小、成本低、無風險、得率高達40 50%。
具體實施例方式
實施例1
將10g小麥、10g大豆分別破碎過10目篩并與80g水按重量百分比配比 混合后置入培養容器，培養基占培養容器體積的1/5，在120°C、 0.15Mpa條件 下滅菌40分鐘，接入4g中國被毛孢菌種在O'C條件下培養3天即可在培養基表 面長滿白色菌絲；然后在該長滿白色菌絲的培養容器中補加40g的液體培養基， 該培養基按重量百分比計雞蛋(全蛋)40g在14。C條件下培養3天；取出培養 物干燥、粉碎即得70g中國被毛孢菌粉。
實施例2
將50g稻谷破碎過20目篩并與50g牛奶按重量百分比配比后置入培養容 器，培養基占培養容器體積的2/5，在122'C、 0.15Mpa條件下滅菌25分鐘，接 入lg中國被毛孢菌種在3。C條件下培養2天即可在培養基表面長滿白色菌絲； 然后在該長滿白色菌絲的培養容器中補加占20g的液體培養基，該培養基按重 量百分比計鴨蛋(全蛋)18.2g、蛋白胨1.8g混合配制，在0。C條件下培養4天； 取出培養物干燥、粉碎即得48g中國被毛孢菌粉。
實施例3將20g玉米、6g蠶豆分別破碎過10目篩并與74g的蛋白質+糖的水溶液 (1%的糖和10%的蛋白質水溶液)按重量百分比配比混合后置入培養容器，培 養基占培養容器體積的3/5，在128°C、 0.15Mpa條件下滅菌27分鐘，接入3g 中國被毛孢菌種在6"C條件下培養3天即可在培養基表面長滿白色菌絲；然后在 該長滿白色菌絲的培養容器中補加30g的液體培養基，該培養基按重量百分比 將雞蛋(全蛋)27.3g、奶0.27g，馬鈴薯0.27g，胡蘿卜汁0.57g，蛋白胨1.59g 混合配制，在5"C條件下培養4天；取出培養物干燥、粉碎即得55g中國被毛孢 菌粉。
實施例4
將40g小米、5g綠豆分別破碎過10目篩并與55§蛋白質+糖的水溶液(20% 的糖和1%的蛋白質水溶液)按重量百分比配比混合后置入培養容器，培養基占 培養容器體積的4/5，在125匸、0.15Mpa條件下滅菌35分鐘，接入2g中國被 毛孢菌種在l(TC條件下培養2天即可在培養基表面長滿白色菌絲；然后在該長 滿白色菌絲的培養容器中補加35g的液體培養基，該培養基按重量百分比將雞 蛋(全蛋)33g、奶0.105g，馬鈴薯0.105g,胡蘿卜汁0.14g，蛋白胨2.1g混合 配制，在1(TC條件下培養3天；取出培養物干燥、粉碎即得60g中國被毛孢菌 粉。
實施例5
將30g高粱、5g豌豆分別破碎過10目篩并與65g蛋白質+糖的水溶液(10。/。 的糖和5%的蛋白質水溶液)按重量百分比配比混合后置入培養容器，培養基占 培養容器體積的1/5，在130。C、 0.15Mpa條件下滅菌20分鐘，接入4g中國被 毛孢菌種在14'C條件下培養2天即可在培養基表面長滿白色菌絲；然后在該長 滿白色菌絲的培養容器中補加25g的液體培養基，該培養基按重量百分比將雞 蛋(全蛋)24g、奶0.15g，馬鈴薯0.15g，胡蘿卜汁0.375g，蛋白胨0.325g混合 配制，在8X:條件下培養4天；取出培養物干燥、粉碎即得51g中國被毛孢菌粉。
實施例6
將32g小麥、8g赤豆分別破碎過10目篩并與6(^蛋白質+糖的水溶液(5% 的糖和3%的蛋白質水溶液)按重量百分比配比混合后置入培養容器，培養基占培養容器體積的3/5，在125'C、 0.15Mpa條件下滅菌27分鐘，接入3g中國被 毛孢菌種在6"C條件下培養3天即可在培養基表面長滿白色菌絲；然后在該長滿 白色菌絲的培養容器中補加38g的液體培養基，該培養基按重量百分比將雞蛋 (全蛋)36.86g、奶0.152g，馬鈴薯0.152g，胡蘿卜汁0.456g，蛋白胨0.38g混 合配制，在8"C條件下培養4天；取出培養物干燥、粉碎即得66g中國被毛孢菌 粉。
實施例7
將27g稻谷、3g蠶豆分別破碎過10目篩并與70g蛋白質+糖的水溶液(15n/。 的糖和7%的蛋白質水溶液)按重量百分比配比混合后置入培養容器，培養基占 培養容器體積的2/5，在127'C、 0.15Mpa條件下滅菌26分鐘，接入2.5g中國被 毛孢菌種在13"C條件下培養2天即可在培養基表面長滿白色菌絲；然后在該長 滿白色菌絲的培養容器中補加28g的液體培養基，該培養基按重量百分比將雞 蛋(全蛋)27.44g、奶0.084g，馬鈴薯0.084g，胡蘿卜汁0.112g，蛋白胨0.28g 混合配制，在13。C條件下培養3天；取出培養物干燥、粉碎即得62g中國被毛 孢菌粉。
實施例8
將谷類10g、豆類20g、水70g按重量百分比配比后置入培養容器，培養基 占培養容器體積的1/5，在12(TC、 0.15Mpa條件下滅菌40分鐘，接入lg中國 被毛孢菌種在O'C條件下培養20天后取出培養物干燥、粉碎可得41g中國被毛 孢菌粉。
實施例9
將谷類30g、豆類10g、 15%的糖和7%的蛋白質水溶液60g按重量百分比配 比后置入培養容器，培養基占培養容器體積的3/5，在125'C、 0.15Mpa條件下 滅菌30分鐘，接入3g中國被毛孢菌種在8"C條件下培養15天后取出培養物干 燥、粉碎可得45g中國被毛孢菌粉。
實施例10
將谷類50g、 5%的糖和3%的蛋白質水溶液50g按重量百分比配比后置入培 養容器，培養基占培養容器體積的4/5，在130°C、 0.15Mpa條件下滅菌20分鐘，接入4g中國被毛孢菌種在14。C條件下培養10天后取出培養物干燥、粉碎可得
50g中國被毛孢菌粉。
將按重量百分比計100g全蛋攪拌均勻后裝入玻璃容器中用濾紙封口，在 130°C、 0.15Mpa條件下滅菌20分鐘，接入4g中國被毛孢菌種0。C條件下培養7 天后取出培養物干燥、粉碎可得50g中國被毛孢菌粉。 .
實施例12
將按重量百分比計91g全蛋攪拌均勻后裝入玻璃容器中，再加入9g蛋白胨 用濾紙封口，在12(TC、 0.15Mpa條件下滅菌40分鐘，接入lg中國被毛孢菌種 14"C條件下培養9天后取出培養物干燥、粉碎可得45g中國被毛孢菌粉。
實施例13
將按重量百分比計97.7g全蛋攪拌均勻后裝入玻璃容器中，再加入0.9g牛 奶、0.9g馬鈴薯、1.9g蛋白胨用濾紙封口，在130°C、 0.15Mpa條件下滅菌30
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得40g中國被毛孢菌粉。
權利要求
1、一種中國被毛孢菌粉的生產方法，其特征在于包括如下步驟步驟一將谷類10～50％、豆類0～10％、水50～80％按重量百分比配比后置入培養容器，培養基占培養容器體積的1/5～4/5，在120～130℃、0.15Mpa條件下滅菌20～40分鐘，接入占培養基重量1～4％的中國被毛孢菌種在0～14℃條件下培養2～3天培養基表面長滿菌絲；步驟二在培養容器中補加占上述培養基重量20～40％的液體培養基，該培養基按重量百分比計蛋91～100％、奶0～0.9％、馬鈴薯0～0.9％、胡蘿卜汁0～1.9％、蛋白胨0～9％在0～14℃條件下培養3～4天；步驟三將培養物取出、干燥、粉碎即得中國被毛孢菌粉。
2、 根據權利要求l所述中國被毛孢菌粉的生產方法，其特征在于包括如下步驟步驟一將谷類20 40%、豆類0 6%、水55 74%按重量百分比配比后 置入培養容器，培養基占培養容器體積的2/5 4/5，在122 128°C、 0.15Mpa 條件下滅菌25 35分鐘，接入占培養基重量2% 4%的中國被毛孢菌種在3 l(TC條件下培養2 3天培養基表面長滿菌絲；步驟二在培養容器中補加占上述培養基重量25 35%的液體培養基，該 培養基按重量百分比計蛋93 98%、奶0.3 0.6%、馬鈴薯0.3 0.6%、胡蘿卜 汁0.4 1.5%、蛋白胨1 6%在5 1(TC條件下培養3 4天；步驟三將培養物取出、干燥、粉碎即得中國被毛孢菌粉。
3、 根據權利要求l所述中國被毛孢菌粉的生產方法，其特征在于包括如下步驟步驟一將谷類30%、豆類5%、水65%按重量百分比配比后置入培養容器， 培養基占培養容器體積的3/5，在125"C、 0.15Mpa條件下滅菌27分鐘，接入占 培養基重量3%的中國被毛孢菌種在6"C條件下培養3天培養基表面長滿菌絲；步驟二在培養容器中補加占上述培養基重量30%的液體培養基，該培養 基按重量百分比計蛋97°/。、奶0.4%、馬鈴薯0.4%、胡蘿卜汁1.2%、蛋白胨1% 在8。C條件下培養3天；步驟三將，物取出、干燥、粉碎即得中國被毛孢菌粉。
4、 根據權利要求l所述中國被毛孢菌粉的生產方法，其特征在于所述中國 被毛菌種經步驟一培養后取出、千燥、粉碎即可得中國被毛孢菌粉，也可直接 用步驟二培養后取出、干燥、粉碎即可得中國被毛孢菌粉。
5、 根據權利要求l所述中國被毛孢菌粉的生產方法，其特征在于所述步驟一中的水可用液體奶或含糖、蛋白質的液體代替。
6、 根據權利要求3所述中國被毛孢菌粉的生產方法，其特征在于所述培養 基中含糖、蛋白質的液體，其中糖占液體總重量的1 10%，蛋白質占1 20%。
7、 根據權利要求1所述一種中國被毛孢菌粉的專用培養容器，其特征在于， 容器為食用級耐高溫材質制備，瓶底直徑大于等于瓶口直徑，瓶塞為具有透氣 性的食用級耐高溫材質制備。
8、 上述方法及培養容器還可用于冬蟲夏草擬青霉、頭孢菌及其他伴生菌粉 的生產。
全文摘要
本發明涉及一種微生物的生產方法，特別涉及一種冬蟲夏草中國被毛孢菌粉的生產方法。本發明包括如下步驟將谷類10～50％、豆類0～10％、水50～70％按重量百分比配比后置入培養容器，培養基占培養容器體積的1/5～4/5，接入占培養基重量1％～4％的中國被毛孢菌種在0～14℃條件下培養2～5天培養基表面長滿菌絲；在培養容器中補加占上述培養基重量20～40％的液體培養基，該培養基按重量百分比計蛋91～100％、奶0～0.9％、馬鈴薯0～0.9％、胡蘿卜汁0～1.9％在0～14℃條件下培養3～8天；最后，將培養物取出、干燥、粉碎即得中國被毛孢菌粉。本發明的效果是發酵周期短，工藝簡單、無化學殘留、污染幾率小、設備投資小、成本低、無風險、得率高達40～50％。
文檔編號C12M1/24GK101423799SQ20081014778
公開日2009年5月6日 申請日期2008年11月29日 優先權日2008年11月29日
發明者張玉業, 李樹志, 李桂全, 峰 涂, 陳永鳳 申請人:峰 涂