專利名稱：中國被毛孢濃縮型口服液的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種口服液，具體的說是由冬蟲夏草的無性型—中國被毛孢生產的濃縮型口服液。
背景技術：
現代社會，隨著人們生活方式及所承受社會壓力的不斷增加，睡眠質量成為衡量人們身體健康與否的重要標志。由于睡眠質量下降而導致的失眠、健忘、多夢易醒、心悸心慌、頭暈耳鳴等已嚴重影響人們的學習、生活。據流行病學調查表明，至2002年美國人群中失眠發病率為32％-35％，英國為10％-14％，日本為20％，在中國尚無確切資料，但據部分資料統計，失眠患者求診率達10％以上，并逐年增加。隨著社會競爭的日益激烈，人們生活節奏不斷加快，由于睡眠質量下降引起的發病人群也由老年人進一步擴展到中年人，甚至是青少年人群。因此，解決睡眠質量問題勢在必行。
現代醫學領域，治療失眠的手段已由從前的單靠安眠藥物治療轉為現在的心理治療、飲食治療、藥物治療相結合，并取得很大的成效。而且，由于長期服用安眠藥容易產生依賴性、耐藥性、毒性，以致胃腸功能紊亂，甚至發生危險；同時，安眠藥不能從根本上改善、提高睡眠質量。所以，現在越來越多的人都傾向于使用無毒害、無副作用的天然藥物治療失眠，從而達到“標本兼治”的目的。
目前市場上安神鎮靜的藥品和保健品主要有以下腦白金(無錫鍵特生物藥業有限公司生產)、安神補腦液(吉林敖東延邊藥業生產)、腦心舒口服液(石家莊神威藥業股份有限公司生產)、活力舒口服液(四川地奧集團生產)、甜夢口服液(煙臺榮昌制藥有限公司生產)、太太口服液(深圳太太藥業有限公司生產)、青春寶抗衰老片(正大集團生產)。
近年來，一批蟲草保健食品不斷上市。主要的口服液產品有以下幾種
博奧蟲草口服液，具有強腎、補肺、養血、明目、補虛功效(江蘇神華藥業有限公司生產)、理科蟲草王口服液，對呼吸道疾病、腎病、心血管疾病以及神經衰弱引起的失眠、厭食等有一定的防治作用(中山市理科蟲草制品有限公司生產)、復方蟲草口服液，能促進和提高免疫力，延長細胞壽命，具有抗疲勞、抗寒等作用，改善腎虛癥狀，對平咳平喘等均有明顯作用(江西仁和藥業國家新藥)、蟲草精口服液、蟲草精皇漿口服液(浙江省中藥研究所制藥廠生產)、補王蟲草晶(蘭州科技生物制品廠生產)。
上述產品雖都冠名冬蟲夏草，但均不是由真正的冬蟲夏草無性型——中國被毛孢發酵生產，且基本為復配劑型。

發明內容
本發明的目的是提供一種利用冬蟲夏草的無性型——中國被毛孢開發研制出一種具有鎮靜、催眠、擴張氣管、降血壓等多種功能，同時它還能調節免疫功能，增強人體的抗病能力的保健用中國被毛孢濃縮型口服液。
具體技術方案如下中國被毛孢濃縮型口服液用分離純化的冬蟲夏草的無性型—中國被毛孢菌種，通過一級固體三角瓶菌種培養、二級液體搖瓶種子培養、三級液體發酵，其中三級液體發酵包括三個步驟，一級種子罐生產、二級種子罐生產和發酵罐生產，制得中國被毛孢發酵液，發酵液中的有效成分包括甘露醇(mg/mL) 0.0670～0.0754多糖(mg/mL)0.1442～0.1470必需氨基酸總含量(mg/mL)0.4358～0.4903腺苷(mg/mL)0.0617～0.0635尿苷(mg/mL)0.0726～0.0761鳥苷(mg/mL)0.1014～0.1025此時，發酵液中出現大量小菌球及經顯微鏡鏡檢發現大量菌絲，殘糖在1％以下，發酵液較粘稠，顏色明顯加深；得口服液原料。
上述發酵液出罐后，經離心除去大量菌絲體后的發酵醪經孔徑為0.2μm的陶瓷膜過濾，再經截留分子量300左右的反滲透膜過濾且除菌，濃縮為體積為原體積約四分之一的發酵液，即得到濃縮型口服液原液；該口服液為淺棕黃色至棕黃色的粘稠液體，色澤均勻一致，久置可有微量渾濁，氣微腥，味微甜；其有效成分為甘露醇(mg/mL) 0.2680～0.3016多糖(mg/mL) 0.5768～0.5880必需氨基酸總含量(mg/mL) 1.7432～1.9612腺苷(mg/mL) 0.2468～0.2540尿苷(mg/mL) 0.2904～0.3044鳥苷(mg/mL) 0.4056～0.4100。
將濃縮型口服液原液灌裝入瓶、滅菌、燈檢、包裝得產品；滅菌條件溫度為121℃，時間25-35分鐘；包裝條件溫度20-25℃左右，相對濕度40～45％。
冬蟲夏草作為藥用菌的一種，在中華醫藥百味中，正是以“治諸虛百損”、“陰陽平衡”、“保肺益腎、補精益氣、專補命門”的神奇功效被認為是一種不可多得的中藥之寶而蜚聲華夏，飲譽海外。
近年來，國內外人工培養蟲草并將其開發成保健食品等已是一大熱點，但無論是研究還是培養，都主要依賴于冬蟲夏草的無性型作為菌種，所以冬蟲夏草無性型的確證問題就有著極其重要的意義。隨著現代分子生物學發展并結合其它多種確認手段，研究學者已經得出結論冬蟲夏草的無性型為中國被毛孢(Hirsutella sinensis)，這一點目前已經為全世界所公認。我們對中國被毛孢大量的研究表明其發酵液中含有人體必須的多種氨基酸和微量元素外，還含有蟲草酸、蟲草素、蟲草多糖以及多種生理活性物質，具有鎮靜、催眠、擴張氣管、降血壓等多種功能，同時它還能調節免疫功能，增強人體的抗病能力。
濃縮型濃縮型口服液以冬蟲夏草無性型——中國被毛孢發酵液為原料，而目前國內外關于中國被毛孢發酵液應用于藥物生產、開發等方面的報道幾乎沒有，造成了蟲草發酵中發酵液的大量流失。我們以發酵方式大量生產冬蟲夏草無性型菌株中國被毛孢的發酵液，并將其開發成鎮靜、催眠濃縮型口服液必將填補目前的保健品市場空白。而且，工業化生產中國被毛孢，可以提高企業和產品的附加值，降低成本，是生物資源可持續利用之路，將會取得更大的經濟效益和社會效益。
以中國被毛孢發酵液為原料的濃縮型口服液是一種純天然的發酵產品，未加任何添加劑和輔料，有別于其它藥品以及以中藥材為原料的保健品。經過大量的實驗研究發現，即使人體高劑量吸入，也無毒副作用，經功能實驗表明，本濃縮型口服液有顯著的鎮靜、催眠作用，能從根本上改善和提高人體的睡眠質量，可長期服用，適宜各類人群，且無依賴性。
通過生物工程技術進行中國被毛孢濃縮型口服液生產，其菌絲體是生物制藥和保健品生產的重要原料(如百令膠囊)，而發酵液可以生產為濃縮型口服液，是一種綠色環保型產業，既無廢水廢料，且可綜合利用，一舉多得。
具體實施例方式
下面結合實施例，對本發明作進一步地描述實施例菌種自青海采集的冬蟲夏草〔Cordyceps sinensis(Berk)Sacc.〕子座分離出的中國被毛孢RCEF0273菌株(Hirsutella sinensis Liu，Guo，Yu & Zeng)，且已用分子生物學方法確證為冬蟲夏草的無性型。本發明菌種由中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心作為用于專利程序的微生物保存，保藏日期2003年6月5日，保藏號CGMCC 0940，分類命名中國被毛孢。
中國被毛孢濃縮型口服液的生產工藝過程如下(1)液體發酵工藝①、一級固體三角瓶菌種培養將分離純化的菌種接種于50ml三角瓶培養基中(培養基為馬鈴薯200g煮汁、葡萄糖20g、麥芽糖10g、蛋白胨10g、酵母粉10g、MgSO41.5g、KH2PO43g、瓊脂20g、加水至1L，pH6.5)，放入19℃培養箱，培養時間為20天，待菌絲長滿三角瓶并產孢即可；②、二級液體搖瓶種子培養在500ml三角瓶中裝入200ml培養基(在1000ml培養基中含葡萄糖20g、蠶蛹粉30g、酵母粉20g、MgSO40.5g、KH2PO41g，各組分混合后加水補至1000ml，并用飽和NaOH調pH值為6.5)，用1.2Kg/cm2高壓滅菌30分鐘，待冷卻至室溫時，將打散的2瓶固體三角瓶的菌種接種到500ml三角瓶培養基上，并置于恒溫振蕩培養箱，溫度19±1℃，180轉/分條件下培養，培養時間為10天～12天；③、三級液體發酵A、一級種子罐生產在50L氣升式發酵罐中裝入21L液體培養基(在1000ml培養基中含白砂糖20g、蠶蛹粉30g、酵母粉30g、MgSO40.5g、KH2PO41g，各組分混合后加水補至1000ml，并用飽和NaOH調pH至6.5)，培養基溫度大于95℃、pH值為6.0～7.0，并加入食用消泡劑—聚氧丙烯氧化乙烯甘油醚，加入量為0.03％，在14.7×104Pa壓力下，通入蒸汽加熱到121℃，并保壓30～45分鐘；滅菌后，冷卻至20℃時將4瓶上述培養好的500ml搖瓶種子接入培養，培養溫度為19-20℃，通氣量為1∶0.5V/V·min，保壓4.903～7.0845×104Pa，經7天通氣培養，達到對數生長期后即可，最終培養體積為30L；B、二級種子罐生產在500L種子罐中裝入300L液體培養基(同上)，pH值為6.0～7.0，并加入食用消泡劑(同上)，加入量為0.03％，原位加熱到121℃，在14.7×104Pa壓力下，保壓30～45分鐘；滅菌后，冷卻至20℃時，將一級種子罐的30L液體種子全部接入二級種子罐培養，培養溫度19-20℃，通氣量為1∶0.5V/V·min，保壓4.903～7.0845×104Pa，經過7天通氣培養，達到對數生長期后即可，最終培養體積為300L；C、發酵罐生產在5T發酵罐3中裝入3T液體培養基(同上)，pH值為6.0～7.0，并加入食用消泡劑(同上)，加入量為0.03％，原位加熱到121℃，保壓40分鐘，冷卻至20℃，將二級種子罐培養好的液體種子300L全部接入發酵罐培養，培養溫度為19-20℃，通氣量為1∶0.4～0.5V/V·min，罐壓4.903～7.0845×104Pa，培養時間5天；
當發酵液中出現大量小菌球及經顯微鏡鏡檢發現大量菌絲，殘糖在1％以下，發酵液較粘稠，顏色明顯加深，可出罐。
發酵液中的有效成分包括甘露醇(mg/mL) 0.0670～0.0754多糖(mg/mL)0.1442～0.1470必需氨基酸總含量(mg/mL)0.4358～0.4903腺苷(mg/mL)0.0617～0.0635尿苷(mg/mL)0.0726～0.0761鳥苷(mg/mL)0.1014～0.1025發酵醪出罐后，用蠕動泵將發酵醪泵入高速管式離心機，發酵醪經15000轉/分條件高速離心后，除去大量菌絲體，收集得口服液原料。
(2)濃縮型口服液的生產①過濾除菌除雜所述發酵液出罐后，用蠕動泵將發酵液泵入高速管式離心機，發酵液經15000轉/分高速離心后，除去大量菌絲體，經孔徑為為0.2μm的陶瓷膜過濾，進一步去除發酵液中殘留的菌絲體和懸浮顆粒；然后再經截留分子量300左右的反滲透膜過濾且除菌，濃縮為體積為原體積四分之一的發酵液。經過上述處理，即得到濃縮型口服液原液。
②容器的清洗、滅菌將10ml玻璃瓶放入全自動洗瓶機中，當瓶子由輸送帶送至入口處時，首先進入浸泡槽，浸泡槽中有30～40℃的熱堿水，經過一段時間的浸泡，瓶子在堿水的作用下，初步得到清洗和消毒。接著瓶子經過浸泡槽中溫度為70～75℃水的浸泡及噴頭大面積的噴射清洗，然后進入洗液噴洗部分。在這部分，瓶子受到高壓洗液的強力噴洗，可以把所有的污物除去。此后，進入清洗降溫過程，在此過程中，瓶子經過熱水噴洗，溫水噴洗和冷水噴洗三個階段，完成整個洗瓶過程。
經過以上“三水三氣”洗凈的玻璃瓶自動進入160℃的干燥滅菌隧道，滅菌約30min后即可使用。
③灌裝將配料罐中制備好的原料，用泵打入高位罐，調整灌裝頭的量，進行灌裝封蓋。每支玻璃瓶中灌裝10ml。
④終端滅菌口服液瓶灌裝好后，經滅菌柜溫度為121℃，時間30分鐘左右滅菌。
⑤燈檢將經過灌裝封口的瓶子排成一排經過口服液燈檢機的檢驗口，瓶子后面有白色光透照，瓶子前面有放大鏡放大。通過燈檢機對灌裝產品的液位高低、液體內是否有雜質、澄明度，封口質量等進行檢查，從而保證灌裝產品的質量。
⑥包裝將檢驗合格的產品進行包裝，包裝時一般保持溫度20℃左右，相對濕度40～45％的環境中。
中國被毛孢濃縮型口服液為淺棕黃色至棕黃色的粘稠液體，色澤均勻一致，久置可有微量渾濁。氣微腥，味微甜。
其主要有效成分為甘露醇(mg/mL) 0.2680～0.3016多糖(mg/mL)0.5768～0.5880必需氨基酸總含量(mg/mL)1.7432～1.9612腺苷(mg/mL)0.2468～0.2540尿苷(mg/mL)0.2904～0.3044鳥苷(mg/mL)0.4056～0.4100。
權利要求
1.中國被毛孢濃縮型口服液，用分離純化的冬蟲夏草的無性型-中國被毛孢菌種，通過一級固體三角瓶菌種培養、二級液體搖瓶種子培養、三級液體發酵，其中三級液體發酵包括三個步驟，一級種子罐生產、二級種子罐生產和發酵罐生產，制得中國被毛孢發酵液，其特征在于所述發酵液中的有效成分包括甘露醇(mg/mL)0.0670～0.0754多糖(mg/mL) 0.1442～0.1470必需氨基酸總含量(mg/mL) 0.4358～0.4903腺苷(mg/mL) 0.0617～0.0635尿苷(mg/mL) 0.0726～0.0761鳥苷(mg/mL) 0.1014～0.1025此時，發酵液中出現大量小菌球及經顯微鏡鏡檢發現大量菌絲，殘糖在1％以下，發酵液較粘稠，顏色明顯加深；得口服液原料。
2.根據權利要求1所述的中國被毛孢濃縮型口服液，其特征在于所述發酵液出罐后，經離心除去大量菌絲體后的發酵醪經孔徑為0.2μm的陶瓷膜過濾，再經截留分子量300左右的反滲透膜過濾且除菌，濃縮為體積為原體積約四分之一的發酵液，即得到濃縮型口服液原液；該口服液為淺棕黃色至棕黃色的粘稠液體，色澤均勻一致，久置可有微量渾濁，氣微腥，味微甜；其有效成分為甘露醇(mg/mL)0.2680～0.3016多糖(mg/mL) 0.5768～0.5880必需氨基酸總含量(mg/mL) 1.7432～1.9612腺苷(mg/mL) 0.2468～0.2540尿苷(mg/mL) 0.2904～0.3044鳥苷(mg/mL) 0.4056～0.4100。
3.根據權利要求1所述的中國被毛孢濃縮型口服液，其特征在于將濃縮型口服液原液灌裝入瓶、滅菌、燈檢、包裝得產品；滅菌條件溫度為121℃，時間25-35分鐘；包裝條件溫度20-25℃左右，相對濕度40～45％。
全文摘要
本發明涉及由冬蟲夏草的無性型—中國被毛孢濃縮型口服液。所要解決的問題是，提供一種以中國被毛孢發酵液為原料的濃縮型口服液，通過將發酵液離心、過濾除菌除雜、灌裝、滅菌、包裝得產品。本發明口服液中除含有人體必須的多種氨基酸和微量元素外，還含有蟲草酸、蟲草素、蟲草多糖、生物肽類以及多種生理活性物質，據測定口服液中含有甘露醇0.3176mg/ml，蟲草多糖0.5880mg/ml，腺苷0.2504+0.0036mg/ml，尿苷0.2974+0.0069mg/ml，鳥苷0.4079+0.0022mg/ml，氨基酸總量1.7432mg/ml；具有鎮靜、催眠、擴張氣管、降血壓等多種功能，同時它還能調節免疫功能，增強人體的抗病能力；是一種純天然的發酵產品，未加任何添加劑和輔料。
文檔編號A61P25/20GK1895294SQ200610040668
公開日2007年1月17日 申請日期2006年5月22日 優先權日2006年5月22日
發明者樊美珍, 李春如, 李增智, 胡豐林, 丁婷, 葛飛 申請人:安徽農業大學