專利名稱：一種中華絨螯蟹多元高通量遺傳標記系統及遺傳分析方法
技術領域：
本發明涉及水產遺傳育種領域，具體說是一種中華絨螯蟹多元高通量 遺傳標記系統及遺傳分析方法。
技術背景隨著生物技術的發展，分子標記也在不斷更新，目前廣泛應用在海洋動物遺傳學分析中的標記是線粒體序列和微衛星標記。線粒體序列(mtDNA) 作為核外遺傳物質，具有進化速度快、非重組變異和母系遺傳等特點，完 全相同的序列信息表明樣品來源于同一母本。常用作種內遺傳分析的mtDNA 片段有Cytb， C0I和CR。微衛星(SSRs)是在真核和原核生物基因組中存在 的由2-6個堿基構成的串聯重復序列，具有高度多態性和共顯性特點。微 衛星標記能夠提供雙親的遺傳信息，尤其應用在揭示個體間和群體間的基 因交流、推測親權關系和雜交現象的分析中，能更全面的反映群體間的遺 傳關系。基因組微衛星標記常被用于瀕危珍貴保護動物以及海洋經濟物種 的遺傳多樣性評估及系譜認證。雖然已積累了大量的中華絨螯蟹序列信息 (國際共享數據庫GenBank中公布7000余個)，但是，這些信息還沒有被系統的開發并真正應用于到遺傳育種所需的系譜認定和遺傳關系分析中。 發明內容本發明的目的在于提供一種快速、有效的中華絨螯蟹多元高通量遺傳 標記及遺傳分析方法。為實現上述目的，本發明釆用的技術方案為一種中華絨螯蟹多元高通量遺傳標記系統所述多元高通量遺傳標記 系統為線粒體序列信息系統和微衛星分子標記系統，其中微衛星分子標記 系統為由7個EST-SSR標記的系統1和6個EST-SSR標記的系統2組成；系統1由7個EST-SSR標記組成，擴增7個EST-SSR標記的7對引物 分別是NE5 (F: CGTGAATGCTGTAGTGTAAT; R: CACCAGAAATAATGAGGTTT);NE12(F: ATGACATTGATGCCTGACG; R: TGCCTTTATTGACCGAGAC); NE16 (F: TTTCACATCCTCCACAGACA; R: GCCACAAGTACACCCAATCA); NE27 (F: ACGGGAAATGGAACAGAT; R: TCCTTCCATCCTGAGTCC); NE46(F: ACTGCTGTTGTTGGTGGTC; R: CCTTAATCCGTTGCGTCA); NE48 (F: AAAGGTCAGTTAATTTCTTGAT; R: TCTAGTGAAATGACATATTGGT); NE49 (F: AGACCGCTGTTATGCTCCT; R: ATGGGAATGAAGGTTATGTATG); 系統2由6個EST-SSR標記組成，擴增6個EST-SSR標記的6對引物 分別是NE1 (F: CATTCCAAGTCTTGACCCC; R: CAGAGCCACAACACTAACG); NE18(F: TATTCAACATTTCAACAACGAT; R: GACGAGCGAAGAACTGGA);NE23(F: AGAGGCAAATGCGATAAAGA;R: CACGACAGACTTACCAGCAC);NE25(F: AGGAGGTGCGTAAGAGTGA; R: TTTCCTTCCATCCTGAGTC);NE26(F: ACGGGAAATGGAACAGAT; R: TCCTTCCATCCTGAGTCC);NE36 (F: ATGTGGACTGCGGGAGA;R: GTGGTGGTAGGTTCGTCTGT)。中華絨螯蟹多元高通量遺傳標記系統的遺傳分析方法首先，運用線 粒體的三對引物擴增COI, Cytb和CR的序列的信息作為分子標記，將混養 家系中同一母本和不同母本所產的后代根據遺傳結構和遺傳多樣性分開， 然后再運用EST-SSR微衛星分子標記，將已區分母本的后代根據遺傳距離 和遺傳多樣性進行父本的區分，從而完成中華絨螯蟹遺傳育種過程中的系 譜認證并確認近交系數。所述擴增COI, Cytb和CR序列的三對引物分別是 LC01490 (GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG) 和 HC02198 (TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA)、Fl (CATGCCTGAATAGTAGGAGT)和 Rl (GTGCTCCAATTCAGGTCAAT) 、所述EST-SSR微衛星分子標記由系統1和系統2組成； 擴增7個EST-SSR標記的7對引物分別是 NE5 (F:CGTGAATGCTGTAGTGTAAT;R: CACCAGAAATAATGAGGTTT);NE12 (F: ATGACATTGATGCCTGACG; R: TGCCTTTATTGACCGAGAC);NE16 (F: TTTCACATCCTCCACAGACA; R: GCCACAAGTACACCCAATCA);NE27 (F: ACGGGAAATGGAACAGAT; R: TCCTTCCATCCTGAGTCC);NE46 (F: ACTGCTGTTGTTGGTGGTC; R: CCTTAATCCGTTGCGTCA);NE48 (F: AAAGGTCAGTTAATTTCTTGAT; R: TCTAGTGAAATGACATATTGGT);NE49 (F: AGACCGCTGTTATGCTCCT; R: ATGGGAATGAAGGTTATGTATG); 系統2由6個EST-SSR標記組成，擴增6個EST-SSR標記的6對引物 分別是NE1(F: CATTCCAAGTCTTGACCCC; R: CAGAGCCACAACACTAACG); NE18 (F: TATTCAACATTTCAACAACGAT; R: GACGAGCGAAGAACTGGA); NE23(F: AGAGGCAAATGCGATAAAGA;R: CACGACAGACTTACCAGCAC); NE25(F: AGGAGGTGCGTAAGAGTGA;R: TTTCCTTCCATCCTGAGTC); NE26(F: ACGGGAAATGGAACAGAT; R: TCCTTCCATCCTGAGTCC); NE36(F: ATGTGGACTGCGGGAGA; R: GTGGTGGTAGGTTCGTCTGT)。 所有引物方向為5'—3'方向。所述中華絨螯蟹多元高通量遺傳標記系統 遺傳分析的方法可同時檢測成百上千個樣品。 本發明所具有的優點1. 育種的遺傳背景清晰，避免了傳統育種的盲目性。本發明利用線粒 體序列和微衛星作為分子標記，解析了我國累代養殖的中華絨螯蟹群體的 遺傳多樣性，明確了育種基礎群、育種選擇群個體間的遺傳關系，使育種 材料的選擇具有更強的目的性。2. 本發明線粒體序列和微衛星分子標記的結合，既避免了僅用線粒體序列無法明確父系信息的缺點，也減少了僅用微衛星標記的繁瑣，有利于 快速確認所研究個體的系譜發生。3.本發明應用多元高通量遺傳標記系統對育種群體遺傳多樣性的實時監測，可以有效避免遺傳育種過程中的近交衰退，保障育種的科學性和可持續性。


圖1為本發明遺傳分析中華絨螯蟹多元高通量遺傳標記系統(其中數 字代表每個標記的等位基因數，橫軸所示標記名稱，縱軸所示等位基因的 大小。)。圖2a和圖2b為運用本發明方法模擬檢測圖(其中在雙親信息未知的 情況下，運用軟件Cervus Version2. Q的Simulation功能，區分400個家 系的準確率為100%;由線粒體信息確定母本后、在一個親本信息已知的情 況下，區分1000個家系的準確率為100%。)。圖3為運用本發明家系鑒定圖(其四個家系，每個家系10個個體，分 別為l-10, 11-20, 21-30， 31-40。運用本專利技術檢測，運用軟件 populationsl. 2. 30,采用DAS法計算遺傳距離，UPGMA圖顯示，正確率為 畫。)。
具體實施方式
實施例1)中華絨螯蟹多元高通量遺傳標記系統為線粒體序列信息系統和微衛 星分子標記系統，其中微衛星分子標記為由7個EST-SSR標記的系統1和6 個EST-SSR標記的系統2組成(參見圖l);系統1由7個EST-SSR標記組成，擴增7個EST-SSR標記的7對引物 分別是NE5 (F: CGTGAATGCTGTAGTGTAAT; R: CACCAGAAATAATGAGGTTT);NE12 (F: ATGACATTGATGCCTGACG; R: TGCCTTTATTGACCGAGAC); NE16 (F: TTTCACATCCTCCACAGACA; R: GCCACAAGTACACCCAATCA); NE27 (F: ACGGGAAATGGAACAGAT; R: TCCTTCCATCCTGAGTCC); NE46 (F: ACTGCTGTTGTTGGTGGTC; R: CCTTAATCCGTTGCGTCA); NE48(F: AAAGGTCAGTTAATTTCTTGAT; R: TCTAGTGAAATGACATATTGGT); NE49 (F: AGACCGCTGTTATGCTCCT; R: ATGGGAATGAAGGTTATGTATG); 系統2由6個EST-SSR標記組成，擴增6個EST-SSR標記的6對引物 分別是NE1 (F: CATTCCAAGTCTTGACCCC; R: CAGAGCCACAACACTAACG); NE18(F: TATTCAACATTTCAACAACGAT; R: GACGAGCGAAGAACTGGA); NE23(F: AGAGGCAAATGCGATAAAGA; R: CACGACAGACTTACCAGCAC); NE25(F: AGGAGGTGCGTAAGAGTGA; R: TTTCCTTCCATCCTGAGTC); NE26(F: ACGGGAAATGGAACAGAT; R: TCCTTCCATCCTGAGTCC); NE36(F: ATGTGGACTGCGGGAGA; R: GTGGTGGTAGGTTCGTCTGT)。 以上引物參見序列表。2)中華絨螯蟹多元高通量遺傳標記系統遺傳分析的方法首先，運用 線粒體的三對引物擴增COI, Cytb和CR的序列的信息作為分子標記，將混養家系中同一母本和不同母本所產的后代根據遺傳結構和遺傳多樣性分 開，然后再運用EST-SSR微衛星分子標記，將已區分母本的后代根據遺傳 距離和遺傳多樣性進行父本的區分，從而完成中華絨螯蟹遺傳育種過程中 的系譜認證并確認近交系數。(1) 運用線粒體的三對引物擴增COI， Cytb和CR的序列的信息a. 提取中華絨螯蟹樣品的DNA;b. 以步驟 a 的 DNA 為模板，用引物 LCO14 9 Q (GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG) 和 HC02198(TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA)擴增 COI 片段，用引物 Fl ( CATGCCTGAATAGTAGGAGT)和Rl (GTGCTCCAATTCAGGTCAAT)擴增Cytb片段， 用 引 物 F2 (GACCGTTGAGACTACTACTATAATA) 和 R2 (TCCGTTGCATGTAAGTATATAGTAG)擴增CR片段。上述PCR擴增產物回收、 純化并測序。PCR擴增條件為95C變性2分鐘，32-35個循環包括95。C變 性30秒、54-56。C退火45秒、72。C延伸60秒，最后72。C延伸5分鐘.(2) 運用EST-SSR微衛星分子標記c. 以步驟 a 的 DNA 為模板，分另'J用引物 NE5(F: CGTGAATGCTGTAGTGTAAT; R: CACCAGAAATAATGAGGTTT); NE12 (F ATGACATTGATGCCTGACG; R: TGCCTTTATTGACCGAGAC); NE16 (F TTTCACATCCTCCACAGACA; R: GCCACAAGTACACCCAATCA); NE27 (F ACGGGAAATGGAACAGAT;R: TCCTTCCATCCTGAGTCC); NE46(F ACTGCTGTTGTTGGTGGTC; R: CCTTAATCCGTTGCGTCA); NE48 (F AAAGGTCAGTTAATTTCTTGAT; R: TCTAGTGAAATGACATATTGGT);NE49 (F: AGACCGCTGTTATGCTCCT; R: ATGGGAATGAAGGTTATGTATG)擴增系統1的 全部微衛星標記共計7個。分別用引物NE1(F: CATTCCAAGTCTTGACCCC; RCAGAGCCACAACACTAACG); GACGAGCGAAGAACTGGA); CACGACAGACTTACCAGCAC) TTTCCTTCCATCCTGAGTC); TCCTTCCATCCTGAGTCC);NE18(F: TATTCAACATTTCAACAACGAT;RNE23(F: AGAGGCAAATGCGATAAAGA; RNE25 (F: AGGAGGTGCGTAAGAGTGA; RNE26 (F: ACGGGAAATGGAACAGAT; RNE36 (F: ATGTGGACTGCGGGAGA; RGTGGTGGTAGGTTCGTCTGT)擴增系統2的全部微衛星標記共計6個。PCR擴增 條件為95。C變性2分鐘，28-32個循環包括95。C變性30秒、54-58。C退 火45秒、72'C延伸60秒，最后72。C延伸5分鐘。將上述PCR擴增產物經8%聚丙烯酰胺凝膠電泳分析，并應用Cervus Version2. 0軟件進行數據處理。 應用例1運行Cervus的模擬分析功能得到使用本發明專利技術，區分混養家系的數目與家系鑒別成功率之間的關系，見圖2。從圖2a中紅線所示，完全使用本發明專利，由線粒體信息確定母本后、在一個親本信息已知的情況下， 再運用EST-SSR標記系統1和系統2可成功區分1000個家系(準確率100%); 從圖2a中黑線所示，若不先使用線粒體信息確定母本、在雙親信息未知情 況下，應用EST-SSR標記系統1和系統2僅能區分400個家系(準確率100%); 從圖2b中紅線所示，由線粒體信息確定母本后、在一個親本信息已知的情 況下，單獨應用EST-SSR標記系統1或系統2可成功區分100個家系(準確率 100%);從圖中黑線所示，若不先使用線粒體信息確定母本、在雙親信息未 知情況下，單獨應用EST-SSR標記系統1或系統2可成功區分10個家系(準確 率簡)。應用例2四個家系的樣品于2008年10月10日取自江蘇省射陽縣昌盛水產有限責 任公司，每個家系都為一雌、 一雄所產的全同胞家系。從每個家系中隨機 取10只幼蟹個體，分別編號明確其親緣關系組成樣本I 。從另一個養殖群體 中隨機選4只雌蟹和4只雄蟹分別編號后與真正的4對親本一起共同作為候 選親本組成樣本II。進行混養家系的分析時假定樣本I 、 II之間的親緣關 系未知，將樣本I與樣本II 一起應用本專利技術進行遺傳分析，具體為先測 定所有樣本的線粒體信息，明確母本信息并將不同母親的個體分開；再應 用EST-SSR系統1和系統2檢測所有樣本的基因型，明確父本信息，并根據樣 本I中40個個體基因型的數據，用Populations軟件計算出個體之間的遺 傳距離，用UPGMA的方法根據個體間遺傳距離將四個家系的40個個體分別 聚成四類，同一家系的個體均被單獨聚成一類，分析的結果與記錄編號比對, 正確率100°/。(圖3)。序列表.txtSEQUENCE LISTING <110>中國科學院海洋研究所.〈120〉 一種中華絨螯蟹多元高通量遺傳標記系統及遺傳分析方法〈130〉 <160> 32<170〉 Patentln version 3.1<210> 1<211> 20<212> 腿<213> 人工設計<220〉<221> satellite <222〉 (l).. (20) <223>〈400〉 1cgtgaatgct gtagtgtaat 20<210> 2〈211> 20<212> DNA〈213> 人工設計<220><221> satellite <222〉 (1). . (20) <223><400> 2caccagaaat aatgaggttt 20<210> 3<211> 19<212〉 DNA<213> 人工設計〈220〉〈221〉 satellite〈222〉 (1). . (19) 〈223><400> 3atgacattga tgcctgacg 19<210> 4〈211〉 19〈212> 腿 〈213>人工設計<220><221〉 satellite<222> (1)..(19) <223><400〉 4tgcctttatt gaccgagac 19〈210〉 5〈211〉 20〈212〉 DNA 〈213〉人工設計〈220〉<221〉 satellite<222〉 (1). . (20)序列表.txt<223>〈400〉5tttcacatcc tccacagaca〈210>6<211〉20<212>DNA<213〉人工設計<220〉<221>satellite<222〉(l).. (20)<223><400>6gccacaagta cacccaatca<210〉 7<211〉 18<212> DNA<213〉 人工設計<220〉<221〉 satellite<222> (1).. (18) <223〉<400> 7acgggaaatg gaacagat 18<210〉 8<211> 18<212〉 腿<213〉 人工設計〈220〉<221〉 satellite<222> (1)..(18) 〈223〉<400〉 8acgggaaatg gaacagat 18〈210> 9<211> 18<212> DNA<213〉 人工設計<220〉<221> satellite<222> (1)..(18) <223>〈400〉 9tccttccatc ctgagtcc 18<210〉 10<211> 19<212> 腿<213〉 人工設計<220>《221〉 satellite <222〉 (1). . (19) 〈223>〈400〉 10actgct,gttg tt.ggt.ggtc 19<210>11<211>22<212〉廳<213>人工設計<220〉<221>satellite<222〉(l).. (22)<223><400>11aaaggtcagt taatttcttg<210〉12<211〉22<212〉腿<213>人工設計〈220〉<221〉satellite<222>(l).. (22)<223><400〉12tcta.gtgaaa tga.catatt.g<210>13<211〉19<212〉醒<213〉人工設計<220〉<221〉satellite<222> 〈223〉(l).. (19)<400>13agaccgctgt tatgctcct<210〉 14<211> '22<212> DNA<213〉 人工設計<220〉<221〉 satellite 〈222〉 (l)..咖 〈223〉〈400> 14atgggaatga aggttatgta tg<210〉15<211>19〈212〉DNA<213>人工設計<220〉<221>satellite<222〉(l).. (19)〈223〉<柳>15cattccaagt cttgacccc<210>16<211〉19<212>DNA〈213>人工設計序列表.txt22221922序列表.txt<220〉<221> satellite 〈222〉 (1)..(19) <223>〈400〉 16cagagccaca acactaacg 19<210〉17〈211〉22<212>腿<213〉人工設計<220〉〈221〉satellite<222>(l)..咖<223><400>17tattcaacat ttcaacaacg〈210〉18〈211〉18<212〉DNA〈213〉人工設計〈220〉<221>satellite〈222>(l).. (18)〈223〉<400〉18gacgagcgaa g咖tgga<210〉19<211>20<212〉醒〈213〉人工設計<220〉<221〉satellite<222>(l)..咖〈223〉<400〉19<210> 20<211> 20<212> DNA <213>人工設計<220>〈221> satellite<222〉 (1).. (20) <223><柳〉20cacgacagac ttaccagcac 20<210〉 21<211〉 19<212〉 腿〈213〉 人工設計<220〉<221> satellite〈222〉 (1). . (19) 〈223〉序列表.txt〈400〉 21agg鄉tgcg ta卿gtga 19<210〉22〈211〉19<212〉DNA<213〉人工設計<220〉<221〉satellite<222>(l).. (19)〈223><400〉22tttccttcca tcctgagtc〈210〉23<211〉18〈212〉DNA〈213〉人工設計<220〉<221〉satellite<222>(l).. (18)<223〉<400〉23acgggaaatg gaacsga.t<210〉24〈211>18<212〉腿〈213〉人工設計<220〉〈221〉satellite<222〉(18)<223〉<400>24tccttccatc ctgagtcc〈210>25〈211>17<212>腿<213〉人工設計<220〉〈221>satellite<222〉(l).. (17)<223><400>25atgtggactg cgggaga<210〉 26〈211〉 20〈212〉 陽 〈213〉人工設計<220><221〉 satellite<222〉 (l)..咖 <223〉〈400〉 26gtggt,ggtag gUcgtctgt, 20<210〉27〈211〉25<212〉DNA<213〉'avertebrate<220〉〈221〉<222〉(l).. (25)〈223〉<咖>27ggtcaac3幼tcatasagat<210>28<211>26<212〉DNA〈213〉avertebrate〈220〉〈221>gOT6〈222〉(l).. (26)〈223〉<400>28taaacttcag ggtgaccaaa aaatca 26<210> 29〈211> 20<212> 腿〈213〉 人工設計〈220〉<221> gene<222〉 (1).. (20) <223><400〉 29catgcctgaa tagtaggagt 20〈210〉 30<211〉 20<212> 廳<213〉 人工設計〈220〉<221>gene〈222〉(l).. (20)〈223〉<400>30gtgctccaat t,caggt,caat<210〉31<211>25<212〉DNA<213>人工設計<220〉<221>D—loop〈222〉(l).. (25)<223><400>31gaccgtt.gag actactacta<210〉 32<211〉 25〈212〉 DNA<213> 人工設計14序列表.txt〈220><221〉 D-loop <222〉 (1). (25) 〈223〉〈400〉 32tccgttgcat gtaagtatat agtag 2權利要求
1.一種中華絨螯蟹多元高通量遺傳標記系統，其特征在于所述多元高通量遺傳標記系統為線粒體序列信息系統和微衛星分子標記系統，其中微衛星分子標記系統為由7個EST-SSR標記的系統1和6個EST-SSR標記的系統2組成；系統1由7個EST-SSR標記組成，擴增7個EST-SSR標記的7對引物分別是NE5(FCGTGAATGCTGTAGTGTAAT；RCACCAGAAATAATGAGGTTT)；NE12(FATGACATTGATGCCTGACG；RTGCCTTTATTGACCGAGAC)；NE16(FTTTCACATCCTCCACAGACA；RGCCACAAGTACACCCAATCA)；NE27(FACGGGAAATGGAACAGAT；RTCCTTCCATCCTGAGTCC)；NE46(FACTGCTGTTGTTGGTGGTC；RCCTTAATCCGTTGCGTCA)；NE48(FAAAGGTCAGTTAATTTCTTGAT；RTCTAGTGAAATGACATATTGGT)；NE49(FAGACCGCTGTTATGCTCCT；RATGGGAATGAAGGTTATGTATG)；系統2由6個EST-SSR標記組成，擴增6個EST-SSR標記的6對引物分別是NE1(FCATTCCAAGTCTTGACCCC；RCAGAGCCACAACACTAACG)；NE18(FTATTCAACATTTCAACAACGAT；RGACGAGCGAAGAACTGGA)；NE23(FAGAGGCAAATGCGATAAAGA；RCACGACAGACTTACCAGCAC)；NE25(FAGGAGGTGCGTAAGAGTGA；RTTTCCTTCCATCCTGAGTC)；NE26(FACGGGAAATGGAACAGAT；RTCCTTCCATCCTGAGTCC)；NE36(FATGTGGACTGCGGGAGA；RGTGGTGGTAGGTTCGTCTGT)。
2. —種按權利要求1所述的中華絨螯蟹多元高通量遺傳標記系統的遺 傳分析方法，其特征在于首先，運用線粒體的三對引物擴增COI, Cytb 和CR的序列的信息作為分子標記，將混養家系中同一母本和不同母本所產 的后代根據遺傳結構和遺傳多樣性分開，然后再運用EST-SSR微衛星分子 標記，將已區分母本的后代根據遺傳距離和遺傳多樣性進行父本的區分， 從而完成中華絨螯蟹遺傳育種過程中的系譜認證并確認近交系數。
3. 按權利要求2所述的中華絨螯蟹多元高通量遺傳標記系統的遺傳分 析方法，其特征在于所述擴增COI, Cytb和CR序列的三對引物分別是 LC014 9 0 (GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG) 和 HC02198 (TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA)、Fl (CATGCCTGAATAGTAGGAGT)和 Rl (GTGCTCCAATTCAGGTCAAT) 、
4. 按權利要求2所述的中華絨螯蟹多元高通量遺傳標記系統的遺。傳分 析方法，其特征在于所述EST-SSR微衛星分子標記由系統1和系統2組擴增 7 個 EST-SSR 標記的 7 對引物分別是 NE5 (F:CGTGAATGCTGTAGTGTAAT; R: CACCAGAAATAATGAGGTTT);NE12 (F: ATGACATTGATGCCTGACG; R: TGCCTTTATTGACCGAGAC);NE16 (F: TTTCACATCCTCCACAGACA; R: GCCACAAGTACACCCAATCA);NE27 (F: ACGGGAAATGGAACAGAT; R: TCCTTCCATCCTGAGTCC);NE46 (F: ACTGCTGTTGTTGGTGGTC; R: CCTTAATCCGTTGCGTCA);NE48 (F: AAAGGTCAGTTAATTTCTTGAT; R: TCTAGTGAAATGACATATTGGT);NE49 (F: AGACCGCTGTTATGCTCCT; R: ATGGGAATGAAGGTTATGTATG); 系統2由6個EST-SSR標記組成，擴增6個EST-SSR標記的6對引物 分別是NE1 (F: CATTCCAAGTCTTGACCCC; R: CAGAGCCACAACACTAACG); NE18(F: TATTCAACATTTCAACAACGAT; R: GACGAGCGAAGAACTGGA); NE23(F: AGAGGCAAATGCGATAAAGA; R: CACGACAGACTTACCAGCAC); NE25(F: AGGAGGTGCGTAAGAGTGA; R: TTTCCTTCCATCCTGAGTC); NE26(F: ACGGGAAATGGAACAGAT; R: TCCTTCCATCCTGAGTCC); NE36 (F: ATGTGGACTGCGGGAGA; R: GTGGTGGTAGGTTCGTCTGT)。
5. 按權利要求2所述的中華絨螯蟹多元高通量遺傳標記系統的遺傳分 析方法，其特征在于所有引物方向為5'—3'方向。
6. 按權利要求2所述的中華絨螯蟹多元高通量遺傳標記系統的遺傳分 析方法，其特征在于所述中華絨螯蟹多元高通量遺傳標記系統遺傳分析 的方法可同時檢測成百上千個樣品。
全文摘要
本發明涉及水產遺傳育種領域，具體說是一種中華絨螯蟹多元高通量遺傳標記系統及遺傳分析方法。多元高通量遺傳標記系統為線粒體序列信息系統和微衛星分子標記系統，其中微衛星分子標記系統為由7個EST-SSR標記的系統1和6個EST-SSR標記的系統2組成；方法運用線粒體的三對引物擴增COI，Cytb和CR的序列的信息作為分子標記，將混養家系中同一母本和不同母本所產的后代根據遺傳結構和遺傳多樣性分開，再運用EST-SSR微衛星分子標記，將已區分母本的后代根據遺傳距離和遺傳多樣性進行父本的區分，從而完成中華絨螯蟹遺傳育種過程中的系譜認證并確認近交系數。本發明在有效利用物種遺傳信息的基礎上，使用多元高通量遺傳標記系統區分子代之間的親緣關系，同時有效避免近交衰退。
文檔編號C12Q1/68GK101613742SQ20091002075
公開日2009年12月30日 申請日期2009年4月24日 優先權日2009年4月24日
發明者媛 劉, 吳丹華, 崔朝霞, 李倩倩, 王鴻霞 申請人:中國科學院海洋研究所