專利名稱：一種適用于致病水霉菌保藏的簡易方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物保藏方法，具體涉及一種適用于致病水霉菌保藏的簡易方法。
背景技術(shù)：
水霉菌是危害極大的淡水致病菌，幾乎能夠感染包括斑點叉尾鮰、虹鱒、花鱸等在內(nèi)的所有淡水魚類。因此，開展致病水霉菌簡易高效保藏方法的研究對從事水產(chǎn)動物水霉病病原學(xué)與防治學(xué)的科學(xué)研究具有重要的意義。然而，從現(xiàn)有的文獻資料來看，水霉菌的保藏大多是采用傳代培養(yǎng)保藏法、冷凍干燥保藏法等一些常規(guī)的微生物保藏方法，而專門針對水霉菌保藏的簡易高效方法極其匱乏。鑒此，本發(fā)明專門針對致病水霉菌保藏建立了一種簡易高效的方法，旨在提高水霉菌保藏方法的簡易性及其在保藏期間的存活率，延長保藏時間。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種適用于致病水霉菌保藏的簡易方法。本發(fā)明提供的一種適用于致病水霉菌保藏的簡易方法，包括如下步驟1)水霉菌菌絲的誘生將水霉菌接種于放有無菌油菜籽粒的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上，于25°C恒溫培養(yǎng)直至油菜籽粒上長滿菌絲；2)水霉菌的保藏將長滿菌絲的油菜籽粒分別放入若干個IOmL無菌具塞塑料離心管中，每個塑料離心管中放置3-5粒，然后再用ImL玻璃移液管吸取8. SmL的無菌蒸餾水和lmLpH5. 6的液體沙氏培養(yǎng)基于每個IOmL無菌具塞塑料離心管中，置于4°C恒溫冰箱保藏即可。所述的水霉菌是寄生水霉，其保藏號為ATCC200013 。經(jīng)測定表明，4 °C恒溫冰箱保藏的IOmL無菌具塞塑料離心管中的寄生水霉 ATCC200013 保藏12個月仍生長正常，而且形態(tài)特征未發(fā)生明顯改變。說明本實驗的保藏方法可以有效保藏期至少12個月。本發(fā)明與傳代培養(yǎng)保藏法相比保藏期更長，與冷凍干燥保藏法相比，操作更簡易， 成本更低，是一種簡易高效的致病性水霉保藏方法。
具體實施例方式實施例11材料與方法1.1實驗材料寄生水霉ATCC200013 ，購于美國標(biāo)準(zhǔn)生物品收藏中心；沙氏液體培養(yǎng)基、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板、無菌蒸餾水、IOmL無菌具塞塑料離心管、ImL玻璃移液管，購于國藥集團(上海)化學(xué)試劑有限公司；油菜籽粒，購于上海市古棕路菜市場；4°C恒溫冰箱，購于青島海爾公司；生化培養(yǎng)箱，購于日本三洋公司；pH5. 6的沙氏液體培養(yǎng)基、鑷子、油菜籽粒、ImL玻璃移液管在1 X IO5Pa高壓濕熱滅菌20min后備用。1.2水霉菌的保藏1. 2. 1水霉菌菌絲的誘生將寄生水霉ATCC200013 接種于放有無菌油菜籽粒的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上，于25°C恒溫培養(yǎng)直至油菜籽粒上長滿菌絲。1.2. 2水霉菌的保藏實驗設(shè)10個平行組，分別命名為A、B、C、D、E、F、G、H、I、J，每個平行組中包括12 個IOmL無菌具塞塑料離心管。具體操作如下將360個長滿菌絲的油菜籽粒分別放入120 個IOmL無菌具塞塑料離心管中，即每個IOmL無菌具塞塑料離心管中含3個長滿菌絲的油菜籽粒，然后再用ImL玻璃移液管吸取8. SmL的無菌蒸餾水和ImL pH5. 6的液體沙氏培養(yǎng)基于每個IOmL無菌具塞塑料離心管中，置于4°C恒溫冰箱保藏。1. 2. 3水霉菌保藏期的測定每個月從平行組中分別隨機取出一個4°C恒溫冰箱保藏的IOmL無菌具塞塑料離心管，無菌操作用鑷子從4°C恒溫冰箱保藏的IOmL無菌具塞塑料離心管中取出長滿菌絲的油菜籽粒，接種于馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上，于25°C恒溫培養(yǎng)，連續(xù)2天觀察菌絲的生長情況及其形態(tài)。2實驗結(jié)果實驗結(jié)果見表1。實驗結(jié)果表明，4°C恒溫冰箱保藏的IOmL無菌具塞塑料離心管中的寄生水霉ATCC200013 保藏12個月仍生長正常，而且形態(tài)特征未發(fā)生明顯改變。說明本實驗的保藏方法可以有效保藏期至少12個月。表1寄生水霉ATCC200013 在不同保藏時間下的存活情況
權(quán)利要求
1.一種適用于致病水霉菌保藏的簡易方法，其特征在于，包括如下步驟1)水霉菌菌絲的誘生將水霉菌接種于放有無菌油菜籽粒的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上，于25°C恒溫培養(yǎng)直至油菜籽粒上長滿菌絲；2)水霉菌的保藏將上述3-5粒長滿菌絲的油菜籽粒放入IOmL無菌具塞塑料離心管中，再用玻璃移液管吸取8. SmL的無菌蒸餾水和ImL pH5. 6的液體沙氏培養(yǎng)基于無菌具塞塑料離心管中，置于4°C恒溫冰箱保藏即可。
2.如權(quán)利要求1一種適用于致病水霉菌保藏的簡易方法，其特征在于，所述的水霉菌是寄生水霉，其保藏號為ATCC200013 。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種適用于致病水霉菌保藏的簡易方法，步驟包括將水霉菌接種于放有無菌油菜籽粒的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上，于25℃恒溫培養(yǎng)直至油菜籽粒上長滿菌絲；將長滿菌絲的油菜籽粒放入無菌具塞塑料離心管中，然后再用玻璃移液管吸取無菌蒸餾水和液體沙氏培養(yǎng)基于無菌具塞塑料離心管中，置于4℃恒溫冰箱保藏即可。本發(fā)明與傳代培養(yǎng)保藏法相比保藏期更長，可以有效保藏至少12個月，與冷凍干燥保藏法相比，操作更簡易，成本更低，是一種簡易高效的致病性水霉保藏方法。
文檔編號C12R1/645GK102382774SQ201110347570
公開日2012年3月21日 申請日期2011年11月7日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月7日
發(fā)明者何珊, 衛(wèi)若鵬, 曹海鵬, 歐仁建 申請人:上海海洋大學(xué), 山西衛(wèi)氏魚康實業(yè)有限公司