專利名稱：用于氯霉素殘留檢測(cè)的單克隆抗體及酶聯(lián)免疫方法與試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種能識(shí)別氯霉素的單克隆抗體以及用于檢測(cè)氯霉素的酶聯(lián)免疫分析方法與試劑盒。
背景技術(shù)：
氯霉素作為一種廣譜抗生素，具有良好的抗菌效果和低廉的價(jià)格，廣泛用于治療各種敏感菌感染。然而，氯霉素對(duì)造血系統(tǒng)有嚴(yán)重不良反應(yīng)，可導(dǎo)致不可逆的再生障礙性貧血。許多國(guó)家和地區(qū)都制定了相關(guān)法律來(lái)控制氯霉素的使用，我國(guó)農(nóng)業(yè)部也已將氯霉素列為禁用藥，在所有動(dòng)物源性食品中不得檢出(農(nóng)業(yè)部235號(hào)公告，2002)。目前國(guó)內(nèi)外氯霉素的殘留檢測(cè)方法主要有儀器分析方法和免疫學(xué)分析方法。儀器方法主要是采用液相-質(zhì)譜聯(lián)用和氣相-質(zhì)譜聯(lián)用，具有測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，分離度好，能進(jìn)行多殘留分析等優(yōu)點(diǎn)，但是需要昂貴的設(shè)備、復(fù)雜的前處理和專業(yè)的操作人員，在很大程度上限制了它的使用。酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法(ELISA)是一種經(jīng)典的免疫分析方法，具有特異性好、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)費(fèi)用低等優(yōu)點(diǎn)，適合獸藥殘留監(jiān)控系統(tǒng)中批量檢測(cè)。近年來(lái)，有關(guān)氯霉素殘留ELISA檢測(cè)方法的報(bào)道較多，如表I所示。表I近年有關(guān)氯霉素殘留ELISA檢測(cè)方法的研究
權(quán)利要求
1.一種能識(shí)別氯霉素的單克隆抗體，其特征在于，它是由保藏號(hào)為CCTCC N0C201152 的雜交瘤細(xì)胞HSBSA/4B7所分泌的。
2.權(quán)利要求I所述的雜交瘤細(xì)胞HSBSA/4B7，保藏在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號(hào)為 CCTCC NO C201152o
3.包含權(quán)利要求I所述的單克隆抗體的試劑盒。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，該試劑盒是用于檢測(cè)氯霉素的酶聯(lián)免疫試劑盒。
5.一種檢測(cè)氯霉素的酶聯(lián)免疫方法，包括免疫原、包被原、抗體的制備以及樣品的處理和檢測(cè)，其步驟如下(1)將氯霉素半琥珀酸酯與牛血清白蛋白偶聯(lián)得到免疫原；(2)將氯霉素半琥珀酸酯與卵清蛋白偶聯(lián)得到包被原；(3)利用步驟(I)的免疫原免疫小鼠，通過(guò)細(xì)胞融合與篩選得到保藏號(hào)為CCTCCNO C201152的雜交瘤細(xì)胞HSBSA/4B7 ；(4)用保藏號(hào)為CCTCCNO C201152的雜交瘤細(xì)胞HSBSA/4B7制備單克隆抗體；(5)用步驟(2)的包被原包被固相載體；(6)將待測(cè)樣品用乙酸乙酯提取，經(jīng)氮?dú)獯蹈珊驼和閮艋螅瑲堅(jiān)脴悠废♂屢喝芙獾玫酱郎y(cè)物；(7)對(duì)步驟￠)的待測(cè)物進(jìn)行酶聯(lián)免疫檢測(cè)，其中樣品稀釋液的組分及配比為=NaCl 8. 0g, KH2PO4O. 2g，Na2HPO4 · 12Η202· 9g，KCl O. 2g， 加雙蒸水至1000mL。
6.權(quán)利要求I所述的單克隆抗體在制備檢測(cè)氯霉素的酶聯(lián)免疫試劑盒中的應(yīng)用。
7.權(quán)利要求3或4所述的試劑盒在動(dòng)物組織氯霉素殘留檢測(cè)中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種能識(shí)別氯霉素的特異性單克隆抗體和一種用于檢測(cè)氯霉素的酶聯(lián)免疫方法及試劑盒。本發(fā)明的單克隆抗體是由雜交瘤細(xì)胞HSBSA/4B7所分泌，該雜交瘤細(xì)胞保藏在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，其保藏號(hào)為CCTCC NOC201152。本發(fā)明的酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法包括免疫原、包被原、抗體的制備以及樣品的處理和檢測(cè)等步驟。本發(fā)明的單克隆抗體對(duì)氯霉素的識(shí)別專屬性強(qiáng)，靈敏度高，酶聯(lián)免疫方法及試劑盒的精密度好、準(zhǔn)確性高。
文檔編號(hào)C12R1/91GK102585009SQ20121004522
公開(kāi)日2012年7月18日 申請(qǐng)日期2012年2月27日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月27日
發(fā)明者劉振利, 彭大鵬, 戴夢(mèng)紅, 易紅波, 王玉蓮, 袁宗輝, 謝長(zhǎng)清, 陳冬梅, 陶燕飛, 黃玲利 申請(qǐng)人:華中農(nóng)業(yè)大學(xué)