專利名稱：一種促進酒香酵母菌產酶的培養方法
技術領域：
本發明涉及一種促進酒香酵母菌產酶的培養方法。
背景技術：
酯酶亦稱羧基酯酶，是指可以水解羧酯鍵的酶，但該酶也能催化合成低級脂肪酸酯。由于該酶既能催化酯的合成，又能催化酯的分解。因此，白酒業習慣稱之為酯化酶或酯分解酶。己酸乙酯是濃香型白酒的主體香味物質，也是曲酒優質品率低的主要限制因素。 己酸和乙醇在酯化酶作用下合成己酸乙酯。是己酸乙酯合成的主要途徑。而酯化酶則是大曲微生物的代謝產物，酯化酶在大曲中含量多少決定了大曲的質量，酯化酶在白酒生產中能卓有成效地提高了出酒率；突出了濃香型白酒己酸乙酯的主體香；酒體協調，促進了酯化反應；較好地解決了酒質和出酒率的矛盾；產酒醇甜，賦予成品酒良好的風味。因此，對大曲中酯化酶產生菌進行研究，篩選出酯化能力強的菌株，對其生長繁殖、產酶特性以及營養需求進行研究，既可以指導大曲生產以提高大曲品質，而提高白酒的優質品率。同時也可以此為出發菌株進行育種，以獲得酯化能力更強的菌株用于強化曲的生產，因此具有重要意義。

發明內容
本發明提供一種促進酒香酵母菌產酶的培養方法，有利于改善大曲品質、提高白酒優質品率。本發明促進酒香酵母菌產酶的培養方法，按以下步驟進行一、將酒香酵母接種到斜面培養基上，于25 30°C培養35 40h，得活化的菌種；二、挑取活化的菌種接入種子培養基中，于、150r/min搖床培養Mh，得種子液；三、將種子液按10%的接種量接入發酵培養基中，通氣量為20 30mL，于、150r/min搖床培養35 37h，得培養物，即完成促進酒香酵母菌產酶的培養方法；其中步驟一中每升斜面培養基由Ig葡萄糖、5g蛋白胨、5g 酵母浸膏、15 20g瓊脂和余量的蒸餾水組成，pH為6.0;步驟二中每升種子培養基由Ig 葡萄糖、5g蛋白胨、5g酵母浸膏和余量的蒸餾水組成，pH為6. 0 ；步驟三中每升發酵培養基由6g橄欖油、5g蛋白胨、3g酵母浸膏、0. 5g K2HP04、0. 5gMgS04. 7H20和余量的蒸餾水組成， 發酵培養基的初始PH值為6 8。本發明的優點使用本發明的方法培養釀酒酵母菌，產酶量高，酶活達到105 163U/L。本發明方法與早前已有的方法相比，使酯化酶的活力有較大的提高，從而增加經濟效益、降低生產成本，具有良好的應用前景。有利于改善大曲品質、提高白酒優質品率，對中國白酒質量的提高，發展生態食品具有重要意義。同時也可以此為出發菌株進行育種，以獲得酯化能力更強的菌株用于強化曲的生產，且本方法對酯化酶酶學特性的進一步研究及提高工藝控制的科學性至關重要。
具體實施例方式本發明技術方案不局限于以下所列舉具體實施方式
，還包括各具體實施方式
間的任意組合。
具體實施方式
一本實施方式促進酒香酵母菌產酶的培養方法，按以下步驟進行 一、將酒香酵母接種到斜面培養基上，于25 30°C培養35 40h，得活化的菌種；二、挑取活化的菌種接入種子培養基中，于、150r/min搖床培養Mh，得種子液；三、將種子液按 10%的接種量接入發酵培養基中，通氣量為20 3011^，于^°C、150r/min搖床培養35 37h，得培養物，即完成促進酒香酵母菌產酶的培養方法；其中步驟一中每升斜面培養基由 Ig葡萄糖、5g蛋白胨、5g酵母浸膏、15 20g瓊脂和余量的蒸餾水組成，pH為6. 0 ；步驟二中每升種子培養基由Ig葡萄糖、5g蛋白胨、5g酵母浸膏和余量的蒸餾水組成，pH為6. 0 ；步驟三中每升發酵培養基由6g橄欖油、5g蛋白胨、3g酵母浸膏、0. 5g K2HP04、0. 5g MgSO4. 7H20 和余量的蒸餾水組成，發酵培養基的初始PH值為6 8。步驟一中所述酒香酵母為Brettanomyces custersianus，在《富含β -葡萄糖苷酶的酒香酵母在釀酒領域中的應用》(葛有輝、王德良、曹健，釀酒科技，2011年第2期)中公開。
具體實施方式
二 本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟一中于培養 36h。其它與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
三本實施方式與具體實施方式
一或二不同的是步驟三中通氣量為22 ^mL。其它與具體實施方式
一或二相同。
具體實施方式
四本實施方式與具體實施方式
一或二不同的是步驟三中通氣量為25mL。其它與具體實施方式
一或二相同。
具體實施方式
五本實施方式與具體實施方式
一至四之一不同的是步驟三中于 280C、150r/min搖床培養36h。其它與具體實施方式
一至四之一相同。
具體實施方式
六本實施方式與具體實施方式
一至五之一不同的是步驟三中所述發酵培養基的初始pH值為7。其它與具體實施方式
一至五之一相同。
具體實施方式
七本實施方式促進酒香酵母菌產酶的培養方法，按以下步驟進行一、將酒香酵母接種到斜面培養基上，于培養36h，得活化的菌種；二、挑取活化的菌種接入種子培養基中，于^°C、150r/min搖床培養Mh，得種子液；三、將種子液按 10 %的接種量接入發酵培養基中，通氣量為25mL，于、150r/min搖床培養36h，得培養物，即完成促進酒香酵母菌產酶的培養方法；其中步驟一中每升斜面培養基由Ig葡萄糖、 5g蛋白胨、5g酵母浸膏、15g瓊脂和余量的蒸餾水組成，pH為6. 0 ；步驟二中每升種子培養基由Ig葡萄糖、5g蛋白胨、5g酵母浸膏和余量的蒸餾水組成，pH為6.0;步驟三中每升發酵培養基由6g橄欖油、5g蛋白胨、3g酵母浸膏、0. 5g K2HP04、0. 5gMgS04. 7H20和余量的蒸餾水組成，發酵培養基的初始PH值為7。將經本實施方式方法培養獲得的培養物取出，經4000r/min離心20min，取上清液即為粗酶液。取IOmL環己烷、3. 65mL乙醇、6. 25mL己酸(所有試劑每500mL加入30g無水硫酸鈉)和0. 2mL粗酶液，酯化反應在密閉IOOmL錐形瓶中進行，反應溫度為36°C，24h后取上清液0. 5mL于50mL錐形瓶中，加入5mL水，2滴酚酞，用0. 05mol/L NaOH滴定至終點， 測定己酸的消耗量。得到酶活為163U/L。
權利要求
1.一種促進酒香酵母菌產酶的培養方法，其特征在于促進酒香酵母菌產酶的培養方法，按以下步驟進行一、將酒香酵母接種到斜面培養基上，于25 30°C培養35 40h，得活化的菌種；二、挑取活化的菌種接入種子培養基中，于^°C、150r/min搖床培養Mh，得種子液；三、將種子液按10%的接種量接入發酵培養基中，通氣量為20 30!^，于^°C、150r/min搖床培養35 37h，得培養物，即完成促進酒香酵母菌產酶的培養方法；其中步驟一中每升斜面培養基由Ig葡萄糖、5g蛋白胨、5g酵母浸膏、15 20g瓊脂和余量的蒸餾水組成，PH為6.0 ；步驟二中每升種子培養基由Ig葡萄糖、5g蛋白胨、5g酵母浸膏和余量的蒸餾水組成，pH為6. 0 ；步驟三中每升發酵培養基由6g橄欖油、5g蛋白胨、3g酵母浸膏、0. 5gK2HP04、0. 5g MgSO4. 7H20和余量的蒸餾水組成，發酵培養基的初始pH值為6 8。
2.根據權利要求1所述的一種促進酒香酵母菌產酶的培養方法，其特征在于步驟一中于培養36h。
3.根據權利要求1或2所述的一種促進酒香酵母菌產酶的培養方法，其特征在于步驟三中通氣量為22 ^mL。
4.根據權利要求1或2所述的一種促進酒香酵母菌產酶的培養方法，其特征在于步驟三中通氣量為25mL。
5.根據權利要求4所述的一種促進酒香酵母菌產酶的培養方法，其特征在于步驟三中于 、150r/min 搖床培養 36h。
6.根據權利要求5所述的一種促進酒香酵母菌產酶的培養方法，其特征在于步驟三中所述發酵培養基的初始PH值為7。
全文摘要
一種促進酒香酵母菌產酶的培養方法，涉及一種促進酒香酵母菌產酶的培養方法。本發明提供一種促進酒香酵母菌產酶的培養方法，有利于改善大曲品質、提高白酒優質品率。方法一、將酒香酵母接種到斜面培養基上培養，得活化的菌種；二、挑取活化的菌種接入種子培養基中，搖床培養，得種子液；三、將種子液按10％的接種量接入發酵培養基中，搖床培養，得培養物，即完成促進酒香酵母菌產酶的培養方法。使用本發明的方法培養釀酒酵母菌，產酶量高，酶活達到105～163U/L。
文檔編號C12N9/18GK102559634SQ201210060878
公開日2012年7月11日 申請日期2012年3月9日 優先權日2012年3月9日
發明者盧嫚, 宋北, 廣慧, 彭麗杰, 楊雪辰, 王繼華 申請人:哈爾濱師范大學