專利名稱：一種蛹草擬青霉發酵物飼料添加劑及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及生物技術領域，具體涉及蛹草擬青霉發酵物飼料添加劑及其制備方法和應用。
背景技術：
我國畜禽養殖生產中疫病較多，為了控制細菌感染，飼料添加劑中一般都加有大量抗菌藥物；為了促進畜禽產品的生長育肥，飼養戶在生產過程中經常添加激素類藥物，違規濫用藥物的現象極為普遍。畜禽產品中農藥、獸藥普遍嚴重超標，由此引發的一系列事件不勝枚舉。另外獸藥生產不規范現象也很嚴重，獸藥制劑中不注明有效成分、隨意擴大實用范圍的現象極為普遍，容易導致錯誤用藥、重復用藥，增加藥殘量。當畜禽食入食物中某些有毒物質，就會抑制某些畜禽的生產性能，嚴重的還會導致畜禽的發病或者是死亡。長期使用抗菌藥易引起耐藥性及二重感染，并加重動物體內的藥物殘留量，不利于疾病的治療，同時還會影響某些疫苗的接種效果，使畜禽的生產性能下降，經濟效益減少。由于我國的畜禽產品的獸藥添加劑殘留比較嚴重，已經給我國的養殖業發展帶來巨大的經濟損失。同時為適應國際、國內市場對綠色食品的需求，充分利用我國豐富的植物與微生物資源，開發“綠色”飼料添加劑產業，促進安全動物生產系統的構建十分重要…。近年來，抗生素的應用已引起巨大的爭議。鑒于抗生素的負面效應以及人們對食品安全的日益關注，一些有效克服抗生素弊端，具有促生長作用的替代品被開發出來，并在豬、禽、反芻動物飼料中得到了一定的應用。在飼料中添加酸化劑、益生素、寡糖、酶制劑、中草藥等可提高動物日增重、降低料肉比，減少豬禽腹瀉及應激的發生、增強機體免疫力等。綠色飼料添加劑應具備以下特征①能提高飼料利用率，促進動物的生長；能增強機體免疫功能，預防動物疾病；能提高動物生產性能和產品質量。②長期使用不產生毒副作用，動物產品中無藥物和有害物質殘留，對人類健康無危害，動物的排泄物對環境不構成潛在污染危害。③理化性質和生物活性穩定，能有效地進入胃腸道發揮作用，不影響飼料適口性。④與其他飼料添加劑合用，不發生或很少發生配伍禁忌，細菌對其不易產生抗藥性。研究和開發綠色飼料添加劑，是振興我國飼料工業、發展綠色養殖的需要，也是突破“綠色壁壘”、占領國際市場的需要。蛹草擬青霉是一種名貴的蟲生真菌，具有很高的藥用價值。科研人員發現從天然蛹蟲草分離獲得的真菌發酵得到的蛹草擬青霉在有效成分、藥理活性與臨床作用等方面與冬蟲夏草有很大的相似性。蛹草擬青霉中除了含有蟲草多糖之外，還有氨基酸、微量元素、蟲草酸和麥角留醇、核苷類、維生素類等物質，具有廣泛的藥理活性，其活性涉及到了免疫系統、心腦血管系統、神經系統、呼吸系統、肝臟和腎臟功能等各方面。在國內外市場上，尚未見到利用蛹草擬青霉做飼料添加劑的相關產品
發明內容
為解決上述問題，本發明提供了一種蛹草擬青霉發酵物飼料添加劑及其制備方法和應用。首先，本發明公開了一種蛹草擬青霉發酵物飼料添加劑，為蛹草擬青霉(Paecilomycesmilitaris Liang sp. nov.)的發酵產物。所述蛹草擬青霉的發酵產物為將蛹草擬青霉菌株先斜面培養，再種子液培養，而后接種固體培養基發酵培養后采收獲得的培養物。所述固體培養基包括下列重量份的原料小麥30 45;玉米粉5 10;
蠶蛹粉0.5 5;H2O45-60。所述蛹草擬青霉為廣布種。本發明還進一步公開了所述蛹草擬青霉發酵物飼料添加劑的制備方法，包括下列步驟a.斜面菌種制備將蛹草擬青霉菌株接種到斜面培養基上，20 25°C下，培養10 15天；所述斜面培養基為PSA培養基或PDA培養基。b.搖瓶種子液的制備從斜面上刮取菌絲接種到PDB培養基或PSB培養基為基礎的三角瓶液體培養基中，20 25°C下，140 160rpm，培養3 5天即可制得蛹草擬青霉搖瓶種子液；c.發酵罐種子液的制備將搖瓶種子液按5% -10%體積比例接種到以PDB培養基或PSB發酵罐培養基中，20 25°C下，攪拌速率140 160rpm，通氣25vvm，培養3 5天即得蛹草擬青霉種子液；d.采收培養物。e.脫水干燥。采收后的鮮培養物采用冷凍干燥法或烘烤法(40 45°C )脫水干燥。f.粉碎。將冷凍干燥、烘干的培養物，粉碎，后即得成品。本發明的蛹草擬青霉發酵物飼料添加劑可用于制備動物飼料或其他多組分的動物飼料添加劑。所述動物可以是豬、兔、肉雞、蛋雞、肉鴨、鵝、山羊、奶牛、肉牛以及水產動物。一般該添加劑在動物飼料中的添加量為動物飼料總重量的2% -6%。本發明的飼料添加劑的作用包括但不限于下述方面增強食欲，加快飼料養分消化、吸收，消除畜禽挑食、厭食，明顯提高日增重和飼料轉化率。本發明的蛹草擬青霉發酵物飼料添加劑生產方法適合工業化生產，不受時間地點的限制，可根據市場的需求增加或縮減生產規模。本發明工藝簡單、工藝穩定、易調控、成功率高；采用本發明方法生產投資少，占地少、無三廢問題，適合大中型企業采用。其產品是一種功能性飼料添加劑，可廣泛應用于豬、兔、肉雞、蛋雞、肉鴨、鵝、山羊、奶牛、肉牛以及水產動物。作用有但不限于下述方面增強食欲，加快飼料養分消化、吸收，消除畜禽挑食、厭食，明顯提高日增重和飼料轉化率。本發明方法生產的蛹草擬青霉發酵物飼料添加劑具有獨特的先進性一、所用菌種為傳統名貴中藥蛹蟲草，屬衛生部公布的新資源食品名單，符合綠色飼料添加劑安全、有效的特征。應用于飼料添加劑目前尚無產品面市。ニ、飼料添加劑成品所用培養物包括固體培養的菌絲體和少量孢子、培養基基質，資源利用率最大，生產過程無污染，達到生產效益和社會效益最佳。
具體實施例方式以下結合具體實施例對本發明作進ー步描述，應理解實例并非用于限制本發明的保護范圍。實施例I :蛹草擬青霉發酵物飼料添加劑的生產(I)斜面菌種制備將士豆煮熟，過濾去渣后，加入蔗糖、定容，加入瓊脂融化，分裝進試管，在O. IMpa壓カ下，121°C,滅菌O. 5h,放氣完畢,趁熱擺放成斜面自然冷卻。無菌條件下將蛹草擬青霉接到斜面試管，放入20°C培養箱，培養15天。 (2)搖瓶種子液的制備先將士豆煮熟，過濾去渣后，加入蔗糖、定容、封ロ滅菌的過程。滅菌條件在O. IMpa壓カ下，121°C，滅菌O. 5h。滅菌完畢，將培養基冷卻，無菌條件下將斜面種孢子接進搖瓶培養基中，將接種的搖瓶置入搖床振蕩培養。培養條件140r/min，20°C°C，培養 5 天。(3)發酵罐種子液的制備將搖瓶種子液按5%體積比例接種到PSB發酵罐培養基中，20°C下,攪拌速率140rpm,通氣25vvm,培養5天即得蝶擬青霉種子液；(4)固體培養a.固相培養基的制備(按重量份)將洗凈、浸泡吸水充足的小麥與玉米粉、蠶蛹粉和水充分混合。小麥30玉米粉10蠶蛹粉5水55b.固相培養基分裝。將充分混合的固相培養基按一定的質量裝入培養容器，蓋好蓋子。c.固相培養基滅菌。將裝好固相培養基的培養容器放置滅菌鍋內高壓滅菌。滅菌條件在110°C，滅菌I. 5h。d.栽培種的制作。裝好固相培養基的培養容器滅菌后移置緩沖室內，冷卻，將種子罐內種子液按5%接種量接到固體發酵培養基中。e.發菌管理。將接了菌種的栽培容器移至培養室培養。發菌室溫度控制為18°C 23 0C，空氣相對濕度60 % 70 %，菌絲體向固相培養基生長直至長滿料面。f.采收。靜置封閉式培養15天，將培養物挖出。g.脫水干燥。采收后的鮮培養物烘烤法(45°C )脫水干燥。h.粉碎。將烘干的培養物，粉碎后即得成品。實施例2 :蛹草擬青霉發酵物飼料添加劑的生產(I)斜面菌種制備同實施例I。(2)種子液的制備同實施例I。(3)固體培養
a.固相培養基的制備將洗凈、浸泡吸水充足的小麥與玉米粉、蠶蛹粉和水充分混合。小麥38玉米粉7.5蠶蛹粉3水51.5 b.固相培養基分裝、滅菌、栽培種的制作、發菌管理、采收、脫水干燥及粉碎均同實施例I。實施例3 :蛹草擬青霉發酵物飼料添加劑的生產(I)斜面菌種制備同實施例I。(2)種子液的制備同實施例I。(3)固體培養a.固相培養基的制備將洗凈、浸泡吸水充足的小麥與玉米粉、蠶蛹粉和水充分混合。小麥45玉米粉5蠶蛹粉I水49b.固相培養基分裝、滅菌、栽培種的制作、發菌管理、采收、脫水干燥及粉碎均同實施例I。實施例4蛹蟲草飼料添加劑對肉雞喂養試驗I材料與方法I. I試驗雞選擇及分組選擇2日肉雞90只隨機分成2組，每組30只，I組飼喂蛹蟲草飼料添加剤，II組飼喂基礎食料做對照組I. 2試試驗動物日糧組成與營養將實施例2制備的飼料添加劑按照2%的比例添加到基礎日糧(粉碎的顆粒料)中并攪拌混勻，經測定變異系數小于8%，空白試驗組僅喂養顆粒料粉碎的粉料。I. 3試驗時間試驗期為35天。I. 4樣品的采集體重3日齡在飼喂前稱初生重。以后每周末稱重一次，晨空腹時逐群稱量每ー組雞的體重。采食量每天回收剩料，計算每周各組飼料消耗。養殖期每組隨機取肉雞9只，每個重復3只，末羽下靜脈采血，參照試劑盒方法分析血液生化指標。屠宰后，取肉樣進行分析。I. 5測試指標及測試方法日增重=(期末重-期初重)/飼養周期料肉比=期末耗料總量/期末增重總量
2試驗結果2. I各組全期增重效果及料肉比表I飼料添加劑對肉雞生產性能的影響
權利要求
1.一種蛹草擬青霉發酵物飼料添加劑，為蛹草擬青霉Paecilomyces militarisLiangsp. nov.的發酵產物。
2.如權利要求I所述蛹草擬青霉發酵物飼料添加劑，其特征在于，所述蛹草擬青霉的發酵產物為將蛹草擬青霉菌株先斜面培養，再種子液培養，而后接種固體培養基發酵培養后采收獲得的培養物。
3.如權利要求2所述蛹草擬青霉發酵物飼料添加劑，其特征在于，所述固體培養基包括下列重量份的原料 小麥 30 45 ; 玉米粉 5 10 ; 蠶蛹粉 O. 5 5 ; H2O45-60。
4.如權利要求2所述蛹草擬青霉發酵物飼料添加劑，其特征在于，所述蛹草擬青霉為廣布種。
5.如權利要求I所述蛹草擬青霉發酵物飼料添加劑的制備方法，包括下列步驟 a.斜面菌種制備將蛹草擬青霉菌株接種到斜面培養基上，20 25°C下，培養10 15天; b.種子液的制備從斜面上刮取菌絲接種到PDB培養基或PSB培養基中，20 25°C下，140 160rpm,培養3 5天即得蛹草擬青霉種子液； c.發酵罐種子液的制備將搖瓶種子液按5%-10%體積比例接種到以PDB培養基或PSB發酵罐培養基中，20 25°C下，攪拌速率140 160rpm，通氣培養3 5天即得蛹草擬青霉種子液； d.將步驟c中制得的蛹草擬青霉種子液按重量百分比為5% 10%接入滅菌后的固相培養基中，在溫度為18 23°C，濕度為50 90%的條件下，靜置封閉式培養10 15天； e.采收培養物； f.脫水干燥； g.粉碎后即得成品。
6.如權利要求5所述蛹草擬青霉發酵物飼料添加劑的制備方法，其特征在于，所述固體培養基包括下列重量份的原料 小麥 30 45 ; 玉米粉 5 10 ; 蠶蛹粉 O. 5 5 ; H2O 45 60。
7.如權利要求5所述蛹草擬青霉發酵物飼料添加劑的制備方法，其特征在于，所述蛹草擬青霉為廣布種。
8.如權利要求1-4任一權利要求所述蛹草擬青霉發酵物飼料添加劑用于制備動物飼料或動物飼料添加劑的用途。
9.如權利要求8所述蛹草擬青霉發酵物飼料添加劑的用途，其特征在于，所述動物飼料為豬、兔、肉雞、蛋雞、肉鴨、鵝、山羊、奶牛、肉牛或水產動物的飼料。
10.如權利要求8所述蛹草擬青霉發酵物飼料添加劑的用途，其特征在于，所述蛹草擬青霉發酵物飼料在動物飼料中的添加量為動物飼料總重量的2% -6%。·
全文摘要
本發明涉及蛹草擬青霉發酵物飼料添加劑及其制備與應用。本發明的蛹草擬青霉發酵物飼料添加劑為蛹草擬青霉PaecilomycesmilitarisLiangsp.nov.的發酵產物。本發明還進一步公開了蛹草擬青霉發酵物飼料添加劑為的制備與應用。本發明的飼料添加劑制備工藝流程簡單，原料廉價易得，含有豐富的腺苷、蟲草酸和多糖，雖然在配合飼料中添加量極微，但效果十分顯著它可以提高飼料的利用率；改善飼料的適口性；促進畜禽生長發育；改善飼料畜禽產品的品質；合理利用飼料資源，該飼料添加劑還能通過增強動物的免疫調節提高成活率，降低飼養成本。
文檔編號C12N1/14GK102669427SQ20121006650
公開日2012年9月19日 申請日期2012年3月14日 優先權日2011年3月14日
發明者孫長勝, 朱福康, 譚悠久, 陳祝安 申請人:上海泛亞生命科技有限公司