專利名稱：一種支原體培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及檢驗(yàn)口腔微生物培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種支原體培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
非淋球菌性尿道炎(nongonococcalurethritis, NGU)在性傳播疾病(sexually transmitted disease, STD)中所占的比例逐年升高,無(wú)論是國(guó)外還是國(guó)內(nèi)都居于首位,而解尿支原體(ureaplasma urealyticum,Uu)和人型支原體(Mycoplasma hominis,Mh)是NGU 的主要病原體。因此，準(zhǔn)確有效地檢測(cè)支原體的存在，成為診斷NGU的關(guān)鍵因素之一。Uu和 Mh的檢測(cè)目前國(guó)內(nèi)大多采用液體培養(yǎng)法，培養(yǎng)基由黃變紅且液體澄清為陽(yáng)性，不變色或者變色但液體渾濁為陰性。其原理是根據(jù)Uu和Mh分解培養(yǎng)基中的尿素產(chǎn)堿使pH上升，而培養(yǎng)基中的酚紅指示劑在由酸變堿過(guò)程中顏色由黃變紅，觀察顏色的變化來(lái)判斷陽(yáng)性。但是能分解尿素的微生物很多，一些細(xì)菌能使顏色變紅造成假陽(yáng)性，還有一些細(xì)菌和真菌(尤其是白色念珠菌)能使培養(yǎng)基變紅和渾濁，檢驗(yàn)科一般會(huì)判斷陰性，但如果其中同時(shí)有支原體生長(zhǎng)，由于渾濁就會(huì)造成假陰性的判斷。前國(guó)內(nèi)商品化的支原體培養(yǎng)基(包括液體和固體) 一般添加青霉素類和多粘菌素，青霉素對(duì)大多數(shù)革蘭陽(yáng)性球菌的作用較強(qiáng)，對(duì)腸球菌作用較差，多粘菌素為多肽類抗生素，對(duì)綠膿桿菌等革蘭氏陰性桿菌作用強(qiáng)大，但對(duì)G-球菌和 G+細(xì)菌均無(wú)作用，這兩種對(duì)真菌都無(wú)抑制作用。所以，如果標(biāo)本中有混合真菌感染，污染少量則僅變紅而不造成沉淀，可能形成假陽(yáng)性的判斷；污染量多有沉淀和渾濁，可能形成假陰性的判斷。在固體培養(yǎng)基上，真菌菌落的生長(zhǎng)，會(huì)掩蓋支原體生長(zhǎng)的瓊脂表面，使不能觀察到支原體的典型菌落。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)任務(wù)是針對(duì)以上現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種適合于支原體生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，降低檢驗(yàn)結(jié)果的假陽(yáng)性和假陰性發(fā)生率。本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題的技術(shù)方案是一種支原體培養(yǎng)基，其特征在，配制 IOOOrnl培養(yǎng)基的配方中含有蛋白胨15g ;牛心浸粉8g ;酵母浸粉5g ;苯酚紅20mg ;氯化鈉5. 2g ；L-精氨酸0. 5g ;氟康唑30mg ;紫番蒸枝素2mg ;無(wú)菌綿羊血200ml ;蒸懼水加至 IOOOrnl。優(yōu)化方案中，每1000ml培養(yǎng)基還含有京尼平酸2mg。優(yōu)化方案中，每1000ml培養(yǎng)基還含有濃度200g/L的功勞木水煮液200ml。以上各方案的固體培養(yǎng)基配方中，每1000ml培養(yǎng)基還含有瓊脂15g。其中所述的蛋白胨提供碳氮源和能量；牛心浸粉含有各種多肽、脂肪、生長(zhǎng)因子、 激素等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)支原體的繁殖和生長(zhǎng)都是很重要的因素；酵母浸粉提供支原體生長(zhǎng)所需的維生素B族；氯化鈉維持均衡的滲透壓，且由于支原體較其他的細(xì)菌更為耐受高滲環(huán)境，所以氯化鈉水平適當(dāng)?shù)奶岣哌€有利于抑制其他細(xì)菌生長(zhǎng)；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑； 無(wú)菌綿羊血提供能量環(huán)境；L-精氨酸屬氨基酸類，為營(yíng)養(yǎng)劑；苯酚紅為指示劑；氟康唑可以有效的抑制白色念珠菌在其中的生長(zhǎng)；紫番荔枝素有抑制白假絲酵母的真菌作用，且還有一定的細(xì)胞毒作用，2mg/L的濃度可以有效的抑制雜菌成長(zhǎng)，較普通支原體培養(yǎng)集中使用的高毒醋酸鉈安全。京尼平酸能廣泛抑制革蘭氏陰、陽(yáng)性菌的生長(zhǎng)。功勞木為小檗科植物闊葉十大功勞、細(xì)葉十大功勞的莖或莖皮，現(xiàn)代研究表明，功勞木水煎劑在體外對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌和白色念珠菌均有抑制作用。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比較，具有支原體檢出可靠的特點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)際情況，對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式
作詳細(xì)說(shuō)明。實(shí)施例I液體培養(yǎng)基，配制IOOOml培養(yǎng)基的配方中含有蛋白胨15g ;牛心浸粉 8g ;酵母浸粉5g ;苯酹紅20mg ;氯化鈉5. 2g ;L_精氨酸O. 5g ;氟康唑30mg ;紫番蒸枝素2mg ； 無(wú)菌綿羊血200ml ;蒸懼水加至總量為1000ml。同配方中加入瓊脂15g既可以用來(lái)制備實(shí)施例2固體培養(yǎng)基。實(shí)施例3液體培養(yǎng)基，配制IOOOml培養(yǎng)基的配方中含有蛋白胨15g ;牛心浸粉 8g ;酵母浸粉5g ;苯酹紅20mg ;氯化鈉5. 2g ;L_精氨酸O. 5g ;氟康唑30mg ;紫番蒸枝素2mg ； 京尼平酸2mg ;無(wú)菌綿羊血200ml ;蒸懼水加至總量為1000ml。同配方中加入瓊脂15g既可以用來(lái)制備實(shí)施例4固體培養(yǎng)基。實(shí)施例5液體培養(yǎng)基，配制IOOOml培養(yǎng)基的配方中含有蛋白胨15g ;牛心浸粉 8g ;酵母浸粉5g ;苯酹紅20mg ;氯化鈉5. 2g ;L_精氨酸O. 5g ;氟康唑30mg ;紫番蒸枝素2mg ； 濃度200g/L的功勞木水煮液200ml ;無(wú)菌綿羊血200ml ;蒸餾水加至總量為1000ml。同配方中加入瓊脂15g既可以用來(lái)制備實(shí)施例6固體培養(yǎng)基。實(shí)施例6固體培養(yǎng)基制備方法為 取功勞木加水煮沸I小時(shí)，過(guò)濾，取濾液，調(diào)整體積到濃度為200g/L，得功勞木水煮液；將蛋白胨、牛心浸粉、酵母浸粉、苯酚紅、氯化鈉、瓊脂、功勞木水煮液和蒸餾水混勻，在渦旋器上震蕩15min，過(guò)濾，濾液210°C滅菌15 min,冷卻到45°C，加入無(wú)菌綿羊血、滅菌氟康唑、滅菌紫番荔枝素，混勻后滅菌蒸餾水定容到IOOOml后分裝。所述的功勞木水煮液濃度為200g/L，指的是每升功勞木水煮液中含有生藥200g。本發(fā)明所得支原體培養(yǎng)基具有檢出可靠、支原體分離率高的特點(diǎn)，為臨床資料充分證明，有關(guān)資料如下。I對(duì)象與方法
I. I培養(yǎng)基制備共設(shè)8組，分別為實(shí)施例f 6方案組和對(duì)照I組、對(duì)照2組。對(duì)照I 組為支原體肉湯液體培養(yǎng)基，對(duì)照2組為支原體肉湯固體培養(yǎng)基。I. 2標(biāo)本采集培養(yǎng)方法婦科和皮膚科門(mén)診患者的泌尿生殖道標(biāo)本拭子108例。 采集方法男性患者用無(wú)菌棉球擦干尿道口后，用無(wú)菌棉拭子插入尿道口疒3 cm,輕輕旋轉(zhuǎn)后取出；女性患者清除陰道口分泌物后，用無(wú)菌棉拭子插入宮頸口廣2 cm，輕輕旋轉(zhuǎn)后取出。用拭子先接種固體培養(yǎng)基，然后用于液體培養(yǎng)基接種，36 °C培養(yǎng)。I. 3結(jié)果判定方法
I.3. I陽(yáng)性確定金標(biāo)準(zhǔn)顯微鏡下見(jiàn)到典型支原體生長(zhǎng)結(jié)合生化反應(yīng)確認(rèn)Uu、Mh。I. 3. 2液體培養(yǎng)基陽(yáng)性確定標(biāo)準(zhǔn)分別于2Γ48 h觀察顏色由黃色變紅色，嚴(yán)格按照結(jié)果判讀表讀取結(jié)果。
I. 3. 3固體培養(yǎng)基陽(yáng)性確定標(biāo)準(zhǔn)為24 h后逐日觀察顏色的變化(黃色變?yōu)榧t色)。同時(shí)在顯微鏡下觀察典型支原體菌落:Mh煎蛋樣菌落(10(Γ300μπι)，υιι棕褐色顆粒、 棕褐色菌線或棕褐色團(tuán)塊樣菌落。2結(jié)果108份標(biāo)本最后確定陽(yáng)性為41例，各組陽(yáng)性例數(shù)見(jiàn)下表。
金標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施例I實(shí)施例2實(shí)施例3實(shí)施例4實(shí)施例5實(shí)施例6對(duì)照I組對(duì)照2組例數(shù)(例)413937403940424529 3結(jié)論實(shí)施例1飛培養(yǎng)基可以有效的提高泌尿生殖道標(biāo)本支原體檢驗(yàn)的準(zhǔn)確率，減少假陰性和假陽(yáng)性的發(fā)生，使婦科患者的臨床診斷正確率進(jìn)一步加強(qiáng)。
權(quán)利要求
1.一種支原體培養(yǎng)基，其特征在，配制IOOOml培養(yǎng)基的配方中含有蛋白胨15g ；牛心浸粉Sg ；酵母浸粉5g ；苯酌■紅20mg ；氯化鈉5. 2g ；L-精氨酸O. 5g ；氟康唑30mg ；紫番荔枝素2mg ；無(wú)菌綿羊血200ml ；蒸餾水加至總量為1000ml。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種支原體培養(yǎng)基，其特征在于每IOOOml培養(yǎng)基還含有京尼平酸2mg。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種支原體培養(yǎng)基，其特征在于每IOOOml培養(yǎng)基還含有濃度 200g/L的功勞木水煮液200ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求I至3任意一種所述的一種支原體培養(yǎng)基,其特征在于每IOOOml培養(yǎng)基中還含有瓊脂15g。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種支原體培養(yǎng)基及其制備方法。其特征在于，配制1000ml培養(yǎng)基的配方中含有蛋白胨15g；牛心浸粉8g；酵母浸粉5g；苯酚紅20mg；氯化鈉5.2g；L-精氨酸0.5g；氟康唑30mg；紫番荔枝素2mg；無(wú)菌綿羊血200ml；蒸餾水加至1000ml。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比較，具有檢出可靠、支原體分離率高的特點(diǎn)。
文檔編號(hào)C12Q1/04GK102605038SQ20121007019
公開(kāi)日2012年7月25日 申請(qǐng)日期2012年3月16日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月16日
發(fā)明者李建新 申請(qǐng)人:李建新