專利名稱：一個番茄果實成熟基因SlNAC3及其應用的制作方法
技術領域：
本發明屬于分子生物學以及基因工程領域，具體是從番茄{SolmutnIycopersicum )中獲得一個新的果實成熟基因57傾61 及其應用。
背景技術：
植物轉錄因子的研究是功能基因組學研究中的一個重要內容。在植物特異蛋白中，轉錄因子占到 13% (Bapat VA, Trivedi PK, Ghosh A, Sane VA, Ganapathi TR,Nath P. Ripening of fleshy fruit: Molecular insight and the role of ethylene.Biotechnol Adv, 2010, 28: 94 - 107)。植物轉錄因子主要分為 MYB、bZIP (basic-domain
leucine-zipper)、WRKY、DREB (dehydration responsive element binding protein)、NAC等。其中，NAC轉錄因子是近年來新發現的具有多種生物學功能的特異轉錄因子(冶曉芳，唐益苗，高世慶，楊穎，劉美英，王永波，趙昌平.植物NAC轉錄因子的研究進展.生物技術通報，2009，10:20-25)。其命名是基于最初發現的該家族的幾個基因NAM (NO APICALMERISTEM)、ATAF1-2、CUC2 (CUP-SHAPED COTYLEDON) (Gutierrez RA, Green PJ, KeegstraK, Ohlrogge JB. Phylogenetic profiling of the Arabidopsis thaliana proteome:what proteins distinguish plants from other organismsGenome Bio, 2004, 5:53)首字母的縮寫。目前，在擬南芥基因組中已發現了 109個NAC轉錄因子(Yamasaki K，Kigawa T, Inoue M, Watanabe S， Tateno M, Seki M, Shinozaki K， Yokoyama S.Structures and evolutionary origins of plant-specific transcription factorDNA-binding domains. Plant Physiology and Biochemistry, 2008, 46:394-401),水稻中發現了 75個NAC轉錄因子，在其他植物如小麥、大豆、玉米、油菜、棉花、甘蔗等中都相繼發現了 NAC轉錄因子。NAC轉錄因子在調控植物生長發育、逆境脅迫應答、生長素傳導葉片凋亡等中都起著重要的作用(冶曉芳，唐益苗，高世慶，楊穎，劉美英，王永波，趙昌平.植物NAC轉錄因子的研究進展.生物技術通報，2009，10:20-25)。除此之外，NAC基因在次生壁加厚和維管組織的形成中也發揮重要作用。NSTl (NAC Secondary WallThickening Promoting Factors)和NST2在花藥開裂中有功能冗余性,這兩者的突變體都會導致花藥內壁的次生壁無法正常加厚(Pirrello J, Regad F，Latche A, Pech JC,Bouzayen M. Regulation of tomato fruit ripening. CAB Reviews, 2009, 4:051)。NAC家族成員一NON RIPENING (NOR)突變后，番茄果實不能正常成熟(Matas AJ，GapperNE, Chung MY, Giovannoni JJ, Rose JK. Biology and genetic engineering of fruitmaturation for enhanced quality and shelf-life. Curr Opin Biotechnol, 2009,20:197-203)，顯示轉錄因子NAC在調控漿果類果實的成熟過程中也有重要功能。番茄等漿果類蔬菜在儲藏、運輸和銷售的過程中，很容易軟化腐爛，給商業生產帶來極大的經濟損失。因此通過育種的方式控制其成熟度和硬度是目前蔬菜生產中亟待解決的問題。與常規育種技術相比，轉基因育種在技術上較為復雜，要求也高，但是具有常規育種所不具備的優勢。主要體現在轉基因育種技術體系的建立使可利用的基因資源大大拓寬；轉基因育種技術為培育高產、優質、高抗，適應各種不良環境條件的優良品種提供了嶄新的育種途徑；另外，利用轉基因育種技術可以對植物的目標性狀進行定向變異和定向選擇，同時隨著對基因認識的不斷深入和轉基因手段的完善，對多個基因進行定向操作也將成為可能，這在常規育種中是難以想象的；除此之外，轉基因技術可以大大提高選擇育種效率，加快育種進程，顯示了常規育種無可比擬的優勢。番茄是研究漿果類果實的一種模式植物。本發明就是利用轉基因育種技術，從番茄野生型Ailsa Craig中克隆得到一個新的NAC成員一幻干涉S1NAC3的轉基因番茄顯示果實成熟進程變慢，通過合理利用這種轉基因材料可以調節番茄的上市時間，為生產服務。

發明內容
本發明的目的是提供一種番茄果實成熟基因S1NAC3,其具有如SEQ ID NO. I所示核昔酸序列或編碼如SEQ ID NO. 2所不氣基酸序列的蛋白質；其具有典型的NAC家族保守結構域，編碼NAC蛋白。本發明另一目的是將番茄果實成熟基因幻傾0應用在控制番茄以及其他呼吸躍變型果實(呼吸躍變型果實是指某些肉質果實從生長停止到開始進入衰老之間的時期，其呼吸速率的突然升高，例如蘋果、香蕉、番茄、鱷梨、芒果等)成熟進程中；具體是將基因S1NAC3構建到植物表達載體上并導入番茄中表達，對分別獲得的S1NAC3超量和干涉轉基因番茄進行果實成熟相關生理生化和分子生物學檢測，確認幻傾0可以改變番茄果實的成熟進程，為后期利用該基因改良番茄以及其他呼吸躍變型果實成熟進程的能力奠定基礎。本發明分別分離克隆番茄Ailsa Craig中攜帶的一個番茄果實成熟基因的完整cDNA片段和C-端特異性末端序列片段，利用農桿菌介導法使目的基因轉入受體植物中并分別超量表達和干涉表達，進而通過實驗驗證該基因在番茄果實成熟過程中所起的作用，為后期利用該基因改良番茄以及其他呼吸躍變型果實成熟進程的能力奠定基礎。對S1NAC3基因進行序列分析，結果表明S1NAC3全長cDNA為1318bp，具有990bp的開放閱讀框(ORF)，201bp的5’非翻譯區和390bp的3’非翻譯區，編碼含有329個氨基酸的蛋白質。蛋白質預測大小為37KD，其N端序列包括160個氨基酸，位于16-176位氨基酸。57傾61 編碼蛋白具有NAC家族的保守結構域,與來自蘋果(Malus domestica)、紙iPrunuspersica)和香瓜{Cucumis meIo)以及其他物種的NAC蛋白高度相似,分析顯示該序列N端有5個保守的NAC結構域。干涉表達幻傾C-端特異性末端可以顯著延遲番茄果實成熟的進程。上述基因可以用于控制番茄和其他呼吸躍變型果實的成熟進程，具體操作如下
(I)基因的獲得以番茄野生型Ailsa Craig為材料，提取果皮的總RNA，利用RT-PCR
分別擴增得到幻似0 3’端特異性末端和全長基因序列，然后分別將其連接到PMD-18T載體上，經測序獲得具有目的基因的克隆。(2)植物表達載體構建與遺傳轉化
對序列進行酶切位點分析后，用I和通o I對帶有目的基因全長片段的克隆載體和表達載體PBI121雙酶切后進行連接，構建超量表達載體；利用SlNAC3-a和SlNAC3_b —對弓I物擴增S1NAC3基因的3’端特異性末端，PCR產物回收后通過BP反應，連接pHeIlsgate2載體，構建干涉表達載體。提取重組表達載體菌液的質粒，利用電轉化法導入根癌農桿菌C58，利用農桿菌介導的遺傳轉化法轉化番茄植株，對轉基因植株進行抗生素(卡那霉素)篩選和RT-PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction)篩選陽性轉基因植株進行后續分析，以野生型和轉化空載體的植株作為對照。(3)轉基因番茄果實成熟特性分析將生長健壯的轉基因植株和野生型植株(非轉基因對照)，分別種植于花盆中。記錄其果實達到成熟的時間，檢測果實成熟相關指標(包括果實呼吸速率、果實乙烯釋放速率和果實硬度等)，從而驗證幻傾0干涉轉基因番茄的果實成熟顯著延遲。本發明為控制番茄果實成熟進程提供了一種新的方法，通過基因工程手段培育轉基因植物能克服傳統育種的不足，不僅育種周期短，而且操作簡單。將幻傾^基因在番茄中干涉表達，能夠顯著延緩果實成熟的進程，從而可以人為控制果實上市時間，并且不改變果實的口感特征，相比用人工激素處理果實更加綠色環保，效果也更加穩定，因而具有明顯的優勢和不可取代的重要性。它可以為呼吸躍變型果實大規模生產提供方便，可以合理調控果實上市時間，大量減少因果實過熟腐爛造成的損失，可為農業生產節約成本且提高管理水平，因此本發明具有廣闊的市場應用前景。


圖I是本發明幻傾0全長片段(A)和3’端特異性片段(B)擴增結果示意圖，其中M 是 marker ；
圖2是本發明采用NPTII引物檢測部分陽性轉基因單株的電泳結果；其中M是Marker ;CK’是以非轉基因的Ailsa Craig為模板的PCR產物；CK是以陽性質粒PMD-18T-S1NAC3為模板的PCR產物；1_8是轉基因植株。圖3是本發明超量表達(S1NAC3°e)和干涉表達(SlNAC3KMi)轉基因番茄果實達到不同成熟時期(綠熟期MG，破色期Br，黃熟期Or，紅熟期R)所需要的時間(開花后天數)比較結果示意圖；其中WT為對照Ailsa Craig。圖4是本發明超量表達(S1NAC3°e)和干涉表達(SlNAC3KMi)轉基因番茄果實不同成熟時期(綠熟期MG，破色期Br，黃熟期Or，紅熟期R)果實呼吸速率比較結果示意圖；其中WT 為對照 Ailsa Craig0圖5是本發明超量表達(S1NAC3°e)和干涉表達(SlNAC3KMi)轉基因番茄果實不同成熟時期(綠熟期MG，破色期Br，黃熟期0r，紅熟期R)果實乙烯釋放速率比較結果示意圖；其中WT為對照Ailsa Craig。圖6是本發明超量表達(S1NAC3°e)和干涉表達(SlNAC3KMi)轉基因番茄果實不同成熟時期(綠熟期MG，破色期Br，黃熟期0r，紅熟期R)果實硬度比較結果示意圖；其中WT為對照 Ailsa Craig0
具體實施例方式下面結合附圖，用本發明的實施例進一步說明本發明的實質性內容，但本發明保護范圍不局限于所述內容；本發明中所用方法如無特別說明均為常規方法。實施例I 'S1NAC3全長基因和3’端特異性片段的克隆
用液氮將番茄Ailsa Craig紅熟期果實的果皮研磨成粉末以后，轉入離心管中，采用異硫氰酸胍法提取總RNA。采用逆轉錄酶M-MLV (天根)以總RNA為模板合成cDNA第一鏈，反應體系和操作過程為取5 u g總RNA，依次加入50 ng oligo(dT) 15，2 u L dNTP(2. 5mM each)，最后添加ddH20 (無RNA酶)至反應體積為13. 5 U L ;混勻后，70°C加熱變性5min后迅速在冰上冷卻5min,然后依次加入4 u L 5 XFirst-stand buffer、0. 5 u L RNA酶抑制劑(200U)、1 UL反轉錄酶(200U)、1 UL二巰基蘇糖醇(0. 1M)，混勻并短時離心，42°C溫浴I. 5h，取出后95°C加熱5min，終止反應。cDNA第一鏈合成后置于_20°C保存備用。以合成的第一鏈cDNA為模板，擴增S1NAC3全長基因(引物序列為5’ -CTCACAGCACACACACCAITTCTCT-3’ 和 5’ -CCAAATCCAGCAATCCCACTAATCT-3’)。采用大連
寶生物的高保真DNA聚合酶ex taq擴增出目的基因，PCR反應條件94°C 3min ；94°C 45s，60°C 45s, 72°C I. 5min, 28cycles ；72°C 5 min。反應體系(20 y L)為 I u L cDNA、2 u L10XBuffer、0. 4 u L dNTP (IOmM each) ,0. I u L 正向引物(2O y M)、0. I u L 反向引物(20 u M) >0. 2 u L ex Taq DNA polymerase (5U/ U L) > 16. 2 U L ddH20。PCR 結束后，取 5U L用于瓊脂糖凝膠電泳，檢測擴增到目的大小的片段(如圖I所示)。將PCR得到的全長幻制0片段進行TA克隆，使用的試劑盒為pMD-18T vector kit(大連寶生物)，反應體系和操作過程為取I. 5 UL PCR產物，依次加入I y L pMD18-Tvector (50ng/ u L)和 2. 5 u L 2XLigation solution I，混勻置于 16°C過夜反應。采用熱激轉化法將連接產物轉入大腸桿菌DH5 a中。在涂于含有￠-半乳糖苷酶(X-Gal)、異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)、氨芐青霉素(ampicillin，Amp)的LB固體培養基篩選陽性克隆。挑選若干個白色菌落，搖菌后用擴增幻傾^的特異引物鑒定插入方向正確的克隆載體。對于PCR得到的3’端特異性片段，設計S1NAC3 3’UTR片段引物，直接在引物的前面加上 attB 位點(引物序列為 5’ -AAAAAGCAGGCT-(CGCTCTAGAACTAGTGGATC)-3’ 和 5’ -AGAAAGCTGGGT-(GTAAAACGACGGCCAGT) -3’)。反應條件如下94°C 2min ；94°C 15S; 70°C 30s,68°C 2min, 30 cycles ；68°C 5min。然后以此 PCR 產物為模板,利用 attB-adapter 上下游引物(引物序列為 5，-GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCT-3 和 5，-GGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGT-3’)進行第二次 PCR 反應。反應條件如下94°C 2min ；94°C 15S; 66°C 30s,68°C2min，30 cycles ；68°C 7min。在PCR體系中添加IU的Taq聚合酶，72°C孵育8min，得到具有3’poly (A)的產物。用瓊脂糖凝膠電泳檢測反應產物，純化回收。實施例2 :植物表達載體構建
超量表達載體構建采用堿裂解法分別提取實施例I得到的克隆載體以及植物表達載體PBI121的質粒，取I y L用于瓊脂糖凝膠電泳以檢測所提取質粒的完整性和濃度高低。用BamHl (Fermentas)和I (Fermentas)分別對質粒 pMD_18T_SlNAC3 和 pBI 121 進行雙酶切(100 u L體系)，反應體系和操作過程為取10 uL pMD-18T- S1NAC3或pBI121質粒、依次加入 10 u L IOXTango buffer,2 u L XbaI,2 u L Sail,76 u L ddH20，混勻后短時離心，置于37°C過夜反應。將所有酶切產物點于瓊脂糖凝膠中進行電泳，然后對幻傾^片段和pBI121大片段分別進行膠回收，整個過程使用UNIQ-10柱式DNA膠回收試劑盒(上海生工)。具體操作流程為切下含有目的DNA條帶的瓊脂糖凝膠塊置于I. 5 mL離心管中，按400 u L/100 mg瓊脂糖凝膠的比例加入Binding Buffer II,置于60°C水浴IOmin,使膠徹底融化；將融化的凝膠溶液轉移至2 mL收集管內的UNIQ-IO柱中，室溫放置2min后離心Imin (6，OOOg/min);取下UNIQ-IO柱，倒掉收集管中的廢液，再將UNIQ-IO柱放入收集管中，加入500 V- L Wash Solution,室溫離心Imin (8，000g/min),再重復此步驟一次；取下UNIQ-10柱，倒掉收集管中的廢液，再將UNIQ-10柱放入收集管中，室溫離心2min(12，000g/min);取下UNIQ-10柱放入新的1.5 mL離心管中，在膜中央加入預熱的20 u LElution Buffer,室溫放置2min,室溫離心Imin (12, 000g/min),離心管中收集液體即為回收的DNA片段。取I y L回收產物通過瓊脂糖凝膠電泳檢測回收片段的大小以及濃度，置于-20°C保存備用。利用T4 DNA Ligase (大連寶生物)，將回收的幻片段和pBI121載體片段連接起來，反應體系(20 ii L)和操作過程為取10 uL S1NAC3 DNA片段依次加入2 y LPBI121 載體DNA、2 u L 10XT4 DNA Ligase BufferU u L T4 DNA Ligase,5 u L ddH20,混勻后短時離心，置于16°C金屬浴過夜反應。接著采用熱激轉化法將連接產物轉入大腸桿
菌DH5a中，用含有50mg/L卡那霉素(kanamycin, Km)的固體培養基篩選陽性克隆。挑選單菌落搖菌，以菌液為模板用擴增的特異引物進行PCR，挑選出S1NAC3與pBI121成功連接的克隆，所檢測的菌株若為陽性，加入適量甘油并置于_80°C保存備用。用堿裂解法提取并純化上述大腸桿菌中的pBI121- S1NAC3質粒。并制備農桿菌C58菌株的感受態細胞，操作過程為將實驗室保存的C58菌株在LB固體培養基(含利福平20mg/L)上劃線，28°C培養至長出單菌落后，挑取一個單克隆于含20mg/L利福平的2 mL LB液體培養基，28°C振蕩培養至混濁；取5 mL菌液轉接于含20mg/L利福平的100 mL LB液體培養基中，28°C振蕩培養至0D600為0. 5 ;4°C離心5min (5, 000g/min)收集菌體，棄上清，力口A 10 mL預冷的0. IM CaCl2，輕輕充分懸浮菌體，冰浴20min ;接著4°C離心5min (5，OOOg/min)收集菌體，棄上清，加入4 mL預冷的含15%甘油的0. IM CaCl2溶液，充分懸浮后分裝于I. 5 mL離心管中，每管200 U L，液氮速凍后置于-80°C保存備用。干涉表達載體構建'S1NAC3 3’ UTR片段的PCR產物回收后，溶于TE緩沖液，進行BP反應。反應體系中包括PCR產物50-100 ng, pHellsgate 2載體2 yL，5*BP克隆酶反應緩沖液4 U L，BP克隆酶混合物4 111，補充1￡緩沖液(卩118.0)至20 UL0反應體系置25°C溫育16 h后加入2 UL蛋白酶K溶液，37°C溫育10 min以終止BP反應。從而獲得攜帶有反向重復目的基因的片段。篩選陽性克隆。采用液氮凍融法將上述構建的植物表達載體(超量表達和干涉表達載體)轉入所制備的農桿菌C58感受態細胞中。操作步驟為取2 U g表達載體質粒加入含有200 UL感受態細胞的離心管中，輕輕混勻后冰浴5min，接著轉入液氮中冷凍lmin，然后迅速置于37°C水浴5min，之后立即冰浴2min，加入800 u L LB液體培養基，28°C振蕩培養4h。將活化后的農桿菌涂于含有50mg/L卡那霉素的LB固體培養基上，28°C靜止培養。挑選單菌落搖菌，用擴增幻傾0的特異引物進行PCR，檢測表達載體是否轉入農桿菌中。對于陽性克隆，加入甘油后置于_80°C保存備用。實施例3 :番茄的遺傳轉化
采用的遺傳轉化體系為農桿菌介導的遺傳轉化方法，農桿菌菌株是C58，轉化受體材料是番茄野生種Ailsa Craigo將番茄飽滿的種子經過次氯酸鈉溶液(有效氯含量2%)浸泡15 min，然后將種子用蒸餾水洗凈播于1/2 MS的培養基上，置25°C，光周期為16 h光/8 h暗的條件下進行培養，至無菌苗長至7-9 d時切取子葉，在1/2 MS的培養基上暗培養一天。取重懸濃度為0D600 0. 5的農桿菌浸染葉片5 min，用滅菌濾紙將多余菌液吸干后重新放置在鋪有濾紙的預培養基上，暗培養2 d后轉移至篩選培養基(基礎培養基MS+玉米素2.0 mg/L+卡那霉素100 mg/L +頭孢100 mg/L)對葉片進行分化培養，兩周繼代一次，等形成愈傷組織后轉移至篩選培養基(基礎培養基MS+玉米素0. 2 mg/L+卡那霉素100 mg/L +頭孢霉素100 mg/L)，至抗性芽長到一定大小后將其切下放入生根培養基中使其生根，把生根后的抗性苗轉移至滅菌的基質中馴化培養一周，最后將番茄苗轉移至溫室或大棚中栽培。實施例4 :轉基因番茄植株的PCR陽性檢測
再生幼苗移栽成活后，提取轉基因單株以及對照Ailsa Craig的幼嫩葉片總RNA，逆轉
錄生成第一鏈cDNA，Ailsa Craig的cDNA作為陰性對照，用表達載體所含NPTII引物(引物序列為 5’ -AGACAATCGGCTGCTCTGAT-3’ 以及 5’ -TCAITTCGAACCCCAGAGTC-3’)對得到的轉基因材料進行陽性檢測。PCR反應總體系為25 W，包含I X PCR buffer (含Mg2+)、dNTPs0.38 mmol/1、正反向引物各0.62 Mmol/L、7i^酶I. 2 U、模板約60 ng。反應程序為95 V預變性 5 min,94 °C 45 s、58 °C 45min、72 °C I. 5 min，33 個循環，72 °C 延伸 10 min。最終的PCR產物用濃度為0. 8 %的瓊脂糖凝膠電泳進行分析，凝膠成像系統對電泳圖譜進行觀察并記錄(圖2所示)，選擇陽性轉基因植株。實施例5 :果實開花后成熟時間統計
在番茄材料開花后進行人工輔助授粉并掛牌標注日期，統計不同轉基因材料達到果實不同成熟時期(綠熟期，破色期，黃熟期和紅熟期)的時間(用番茄開花后天數DPA計量)(如圖3所示)。干涉表達轉基因番茄的果實成熟相比對照AC顯著延遲，最終成熟時間比對照番茄Ailsa Craig延遲了 26天。這說明干涉幻基因以后番茄果實的成熟進程顯著延遲；而超量表達轉基因番茄的成熟時間與對照番茄Ailsa Craig相比較，成熟進度變快，但是差異不顯著。實施例6 :果實呼吸速率的檢測
對轉基因果實成熟期進行觀察，并隨機采摘轉基因材料和對照果實綠熟期，破色期，黃熟期和紅熟期的果實，采用CEA-800型紅外線C02分析儀測定果實的呼吸強度，結果表示為C02 ml/kg/h，每時期每樣品測定三個果實，并做三次生物學重復(如圖4所示)。結果顯示，超量表達轉基因番茄和對照番茄Ailsa Craig在果實成熟的過程中，都有一個呼吸釋放的高峰，顯示了呼吸躍變型果實的典型特征；然而在干涉轉基因番茄果實發育成熟的整個過程中，呼吸速率都沒有發生顯著的變化，沒有呼吸躍變高峰的出現。表明幻傾^基因被干涉以后，其果實成熟進程受阻。實施例7 :果實乙烯釋放的測定
隨機采摘轉基因材料和對照不同成熟期果實進行乙烯測定。用聚丙烯薄膜將果實密封后置于25°C 48h，用注射器從中吸取Iml氣體，注入氣相色譜儀(Agilent 6890N, USA)檢測乙烯含量，記錄出峰時間和峰面積，并與標準乙烯對比計算樣品的乙烯釋放量，以ul/L表示。每時期每樣品測定三個果實，并做三次生物學重復(如圖5所示)。檢測結果與實施例6的結果相似，超量表達轉基因番茄和對照番茄Ailsa Craig在果實成熟的過程中，都有乙烯釋放的高峰，而這也是呼吸躍變型果實的另一典型特征；然而在干涉轉基因番茄果實發育成熟的整個過程中，乙烯釋放速率都沒有發生顯著的變化。更充分的表明幻傾^基因被干涉以后，其果實成熟進程受到抑制。實施例8 :果實硬度的檢測
采取轉基因和對照不同成熟時期的果實，用硬度計(Model GY-1, Cany PrecisionInstruments Co. , Ltd, Shanghai, China)測定每個果實果頂和赤道對稱的四個點，以柱形探頭刺破5_果皮時所消耗的力(N)表示(如圖6所示)。結果表明在干涉表達轉基因果實發育的前期，其果實硬度與對照番茄Ailsa Craig相比較沒有顯著差異，但到了果實發育的最終階段果實硬度是對照的一半，表明干涉轉基因番茄在發育的后期階段軟化速度降低。而超量表達轉基因番茄的果實硬度與對照沒有顯著差異，隨著果實的發育成熟果實硬度逐漸降低。這表明干涉轉基因番茄果實的成熟軟化受到抑制，而超量表達轉基因番茄的成熟進程沒有發生顯著變化。上述實驗結果表明，干涉表達幻傾^基因可以顯著抑制番茄果實的成熟進程?！?br> 權利要求
1.ー種番茄果實成熟基因幻傾び，其特征在于其具有如SEQ ID NO. I所示核苷酸序列或編碼如SEQ ID NO. 2所示氨基酸序列的蛋白質。
2.權利要求I所述的番茄果實成熟基因S1NAC3在控制番茄以及其他呼吸躍變型果實成熟進程中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種番茄果實成熟基因SlNAC3及其應用，番茄SlNAC3基因具有如SEQIDNO.1所示核苷酸序列或編碼如SEQIDNO.2所示氨基酸序列的蛋白質；具有典型的NAC家族保守結構域，編碼NAC蛋白；本發明采用功能基因組學相關技術證實番茄SlNAC3基因在番茄果實成熟中發揮重要作用。將本發明果實成熟基因SlNAC3構建到植物表達載體上并轉入番茄中干涉表達，轉基因番茄會表現出果實成熟延緩的能力，可以直接用于生產中控制果實的成熟進程。
文檔編號C12N15/82GK102787124SQ20121029646
公開日2012年11月21日 申請日期2012年8月21日 優先權日2012年8月21日
發明者夏雪山, 宋玉竹, 韓芹芹, 高凱 申請人:昆明理工大學