專利名稱：動態高壓微射流-酶解法制備低過敏性β-乳球蛋白方法
技術領域：
本發明涉及一種生產低過敏性β-乳球蛋白的加工方法，屬于乳品加工技術研究領域。
背景技術：
牛乳及其制品是人類食物蛋白的重要來源之一，對人類健康具有重要意義。但近年來的研究發現，牛乳中的蛋白質可引起過敏反應嚴重威脅著人類健康，成為食品安全研究熱點之一。在中國，牛乳過敏問題一直沒有引起足夠的重視，有關牛乳過敏特別是針對β-Lg過敏的統計資料報道較少。在我國，治療嬰幼兒牛乳過敏常采取的方法為停用牛乳制品、改用代乳品以及服用特定的藥物。但是這些治療方法都只是暫時性的，不能從根本上 解決嬰幼兒過敏的問題，而且還容易造成嬰幼兒營養不良。牛乳中β -乳球蛋白(β -Lg)被認為是主要的過敏原，其主要原因之一是β-Lg在人乳中缺乏，未經母乳喂養的嬰幼兒容易對其過敏，據報道其中約82%的牛乳過敏病人都對β -Lg過敏。此外，β -Lg具有眾多良好的功能性，被廣泛應用于食品加工中，但因其是主要過敏原而受到應用限制。因此，開發低敏性或無過敏性的β -Lg是解決其過敏問題的有效途徑。β_乳球蛋白是牛乳乳清中的主要蛋白質，不存在于人乳中，是新生兒遭遇到的第一個外來蛋白。牛乳蛋白的致敏性是由其線性表位和構象表位共同決定的，相對線性表位而言，食品加工過程中的溫度、壓力、輻照等因素對其構象表位影響可能更大，因此，牛乳蛋白通過加工手段來影響過敏性的研究在國際上備受關注。目前，關于通過各種加工手段研究β_乳球蛋白的抗原性的變化近年來已有較多報道①加熱法，在高于90°C條件下的熱處理能應用于降低乳球蛋白的過敏性，而當溫度低于90°C時其過敏性隨著溫度的上升而增加。②化學方法，如β_乳球蛋白與麥芽糖通過美拉德反應結合能有效降低其過敏性；利用蛋白酶解破會過敏表位，也可以降低β-Lg的過敏性。③物理方法，采用微波處理β -乳球蛋白其過敏性有顯著降低；采用動態高壓微射流技術高壓處理β -Lg其過敏性有所降低。目前這些研究中降低或消除β-Lg的過敏性最有效的方法主要還是集中在酶法改性上，但這些研究的應用目前尚存在一些困難。例如，β-Lg在天然態下對消化酶具有特殊的抗拒作用，單獨采用酶解的方法不易使其完全水解；此外國內外水解蛋白后容易產生嚴重的苦味等等。本發明的目的是提出一種采用動態高壓微射流技術和酶法相結合法改性β_乳球蛋白的方法及其應用，先采用物理方法動態高壓微射流技術處理β_乳球蛋白使其構象發生一定的改變提高其消化性能，再利用消化酶酶解蛋白水解β_乳球蛋白，使β -Lg的致敏性大幅度降低，不產生苦味。本發明改性后的β -乳球蛋白具有消化性高和致敏性低的性能，可應用于新生嬰幼兒的配方乳中和對β_乳球蛋白過敏的成年患者適用的乳制品中。經檢索，沒有發現采用動態高壓微射流技術結合酶處理手段生產低敏性的β -乳球蛋白制品的報道。

發明內容
本發明的目的是針對現有技術的不足和β -乳球蛋白的弱點，提供一種安全、功能性質優良的低過敏性β_乳球蛋白制品，為β_乳球蛋白過敏的新生嬰幼兒以及成年患者提供一種安全的β_乳球蛋白。本發明采用的技術方案是采用動態高壓微射流結合酶法制備低過敏性的β -乳球蛋白。本發明的工藝步驟如下
1、按lmg/mL的濃度比例配制β-乳球蛋白溶液，在常溫條件下，取IgP _乳球蛋白樣品溶于IL 二次去離子水中，采用磁力攪拌器在50-80rpm的轉速下攪拌5_10min使蛋白質完全溶解； 2、采用動態高壓微射流處理步驟I所得的β-乳球蛋白溶液，經過160MPa壓力處理，處理次數為3次，收集處理后的樣品進行凍干，得到壓力改性后的β_乳球蛋白樣品；
3、將步驟2所得樣品、10，000U/mg的胰蛋白酶和胰蛋白酶抑制劑分別溶于50mM、pH7.8和離子強度為O. 08MNaCl的Tris緩沖液中，濃度分別配制為O. 66mM ,0. 56μΜ和8. 5μΜ，備用；
4、將步驟3所配制成的β-乳球蛋白和胰蛋白酶溶液按1:40的酶與底物的比值混合均勻，在37°C恒溫水浴中進行50rpm的轉速攪拌反應30min，反應結束迅速后加入體積比12. 5%步驟3所配制好的胰蛋白酶抑制劑終止反應，收集反應后的樣品；
5、將步驟4所得樣品溶液采用截留分子量為20kDda的超濾管，在8000r/min條件下離心IOmin進行超濾，超濾所得溶液凍干即為低致敏性β-乳球蛋白。本發明具有的有益效果本發明方法能明顯降低或消除β-乳球蛋白的過敏性；本發明制備的β-乳球蛋白除降低過敏性外，同時具有易消化吸收等功能，且安全性高、無副作用；本發明方法制備β-乳球蛋白無苦味和其他不良風味。


附圖I為制備低過敏性β-乳球蛋白的工藝線路示意圖。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明作進一步詳細說明
稱取IgP-乳球蛋白，在常溫條件下，溶于IL 二次去離子水中，采用磁力攪拌器進行50-80rpm的轉速攪拌5_10min使蛋白質完全溶解；采用動態高壓微射流在壓力為160MPa下對β -乳球蛋白溶液處理3次,收集樣品凍干；稱取118. 8mg凍干后的β -乳球蛋白樣品溶于IOmL的50mM、pH7. 8和離子強度為O. 08M(NaCl)的Tris緩沖液中備用；稱取O. 066mg胰蛋白酶(10，000U/mg)溶于5mL的50mM、pH7. 8和離子強度為(λ 08M (NaCl)的Tris緩沖液中備用；稱取胰蛋白酶抑制劑110. 6mg溶于2mL的50mM、pH7. 8和離子強度為0. 08M(NaCl)的Tris緩沖液中備用；按照1:40的酶與底物比值分別量取250μ 的胰蛋白酶溶液加入IOmL的β -乳球蛋白溶液中，在37°C恒溫水浴下于50rmp的轉速攪拌反應30min,反應結束后迅速加入I. 75mL8. 5μΜ的溶于Tris緩沖液中的胰蛋白酶抑制劑以鈍化殘余酶活。將反應后的樣品溶液采用分子量為20kDa的超濾管,在8000r/min條件下離心IOmin進行超濾，將超濾后所得濾液凍干即為低致敏性β_乳球蛋白。制得的低致敏性β_乳球蛋白 的過敏性為I. 9ng/mL。
權利要求
1.一種動態高壓微射流-酶解法制備低過敏性3 -乳球蛋白方法，其特征是 (1)按lmg/mL的濃度比例配制P-乳球蛋白溶液，在常溫條件下，取IgP -乳球蛋白樣品溶于IL 二次去離子水中，采用磁力攪拌器在50-80rpm的轉速下攪拌5_10min使蛋白質完全溶解； (2)采用動態高壓微射流處理步驟(I)所得的P-乳球蛋白溶液，經過160MPa壓力處理，處理次數為3次，收集處理后的樣品進行凍干，得到壓力改性后的￠-乳球蛋白樣品； (3)將步驟(2)所得樣品、10，000U/mg的胰蛋白酶和胰蛋白酶抑制劑分別溶于50mM、pH7. 8和離子強度為0. 08MNaCl的Tris緩沖液中，濃度分別配制為0. 66mM ,0. 56剛和,8.5剛，備用； (4)將步驟(3)所配制成的￠-乳球蛋白和胰蛋白酶溶液按1:40的酶與底物的比值混合均勻，在37°C恒溫水浴中進行50rpm的轉速攪拌反應30min，反應結束迅速后加入體積比,12.5%步驟3所配制好的胰蛋白酶抑制劑終止反應，收集反應后的樣品； (5)將步驟(4)所得樣品溶液采用截留分子量為20kDda的超濾管，在8000r/min條件下離心IOmin進行超濾，超濾所得溶液凍干即為低致敏性￠-乳球蛋白。
全文摘要
一種動態高壓微射流-酶解法制備低過敏性β-乳球蛋白方法，是以牛乳中的β-乳球蛋白為主要原料，運用新興的物理加工手段動態高壓微射流技術結合胰蛋白酶酶解技術處理β-乳球蛋白，得到低過敏性的β-乳球蛋白產品。利用本方法制備的低過敏性β-乳球蛋白具有良好的功能性，且該方法可有效降低或消除β-乳球蛋白過敏性；本發明安全性高、無副作用。
文檔編號A23J3/34GK102960536SQ20121043118
公開日2013年3月13日 申請日期2012年11月2日 優先權日2012年11月2日
發明者鐘俊楨, 劉成梅, 劉偉 申請人:南昌大學