專利名稱：一種固定化酶法制備高f值紫蘇低聚肽的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是一種功能性食品的生產(chǎn)方法，具體是一種固定化酶法制備高F值紫蘇低聚肽的方法。
背景技術(shù)：
紫蘇是一種傳統(tǒng)藥食兩用植物，同時它的果實(shí)及紫蘇子是一種含油率高的油料資源，目前常用于提取紫蘇油，其副產(chǎn)物紫蘇柏常用于作動物飼料，尚未有同步制取紫蘇油與紫蘇蛋白或多肽產(chǎn)品的研究。本發(fā)明以紫蘇子為原料，脫皮粉碎后與蒸餾水按比例混合，先用能水解蛋白質(zhì)特定位點(diǎn)的內(nèi)切酶，切下肽段的N-末端或C-末端的芳香族氨基酸，酶解后經(jīng)滅酶離心得到紫蘇油、混合的多肽液及殘渣，然后向多肽液中加入另外一種能切下芳香族氨基酸基團(tuán)的外切酶，將芳香族氨基酸殘基從肽鏈中釋放出來，經(jīng)滅酶離心、活性炭吸附純化得到低聚肽混合液，再經(jīng)透析、超濾、冷凍干燥得到純度高達(dá)90%的高F值低聚肽。使用的內(nèi)切酶、外切酶均使用油交聯(lián)-吸附法制得的固定化酶，增加了酶的可回收率及重復(fù)利用率，減少了資源浪費(fèi)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種新型的高F值紫蘇低聚肽制備技術(shù)，即首先采用脫殼粉碎的紫蘇子，與水混合后流入裝有一定量固定化內(nèi)切酶的連續(xù)攪拌罐反應(yīng)器，反應(yīng)一段時間后將酶解液流出并進(jìn)行滅酶離心，分離出紫蘇油、多肽液、殘渣；將多肽液流入另一裝有一定量固定化外切酶的連續(xù)攪拌罐反應(yīng)器，反應(yīng)一段時間后將酶解液流出并進(jìn)行滅酶離心，分離得到低聚肽溶液，加入活性炭吸附除去芳香族氨基酸，經(jīng)進(jìn)一步的分離純化即可得到高F值低聚肽。 一種固定化酶法制備高F值紫蘇低聚肽的方法，方法步驟如下
步驟一對紫蘇子脫殼粉碎，與水混合得到混合液，所述加水量為物料質(zhì)量的6倍。步驟二 將步驟一中所得混合液放入裝有固定化Alcalase2. 4L堿性蛋白酶的連續(xù)攪拌罐反應(yīng)器中，反應(yīng)3h后流出產(chǎn)物進(jìn)行離心，分離出紫蘇油、多肽液及殘渣。步驟三將步驟二收集的多肽液放入裝有固定化木瓜蛋白酶連續(xù)攪拌罐反應(yīng)器，反應(yīng)2h后流出產(chǎn)物進(jìn)行滅酶，高速離心分離出混合液。步驟四將步驟三中的混合液加入一定量的活性炭，吸附除去芳香族氨基酸，經(jīng)超濾脫鹽得到高F值的紫蘇低聚肽。所述步驟一中紫蘇子的粉碎粒度在60-90目。所述步驟二中固定化Alcalase2. 4L堿性蛋白酶由3%殼聚糖、0. 5%戊二醛經(jīng)交聯(lián)-吸附法交聯(lián)時間4h后，調(diào)pH=9在給酶量950u/g的載體上固定化8h制得，其添加量為底物濃度的0. 5-3%，溫度40-60°C，pH=7. 5-9. 5，滅酶條件為滅酶條件為沸水中加熱5min，離心條件為轉(zhuǎn)速4500rpm，溫度4°C，時間20min。
所述步驟三中固定化木瓜蛋白酶的制備方法同Alcalase2. 4L，添加量為底物濃度的0. 5-3%，溫度40-60°C，pH=7. 5-9. 5，滅酶條件為滅酶條件為沸水中加熱5min，離心條件為轉(zhuǎn)速4500rpm，溫度4°C，時間20min。所述步驟四中活性炭添加量為底物質(zhì)量的5-15倍，pH=2_5，溫度為25_50°C，超濾膜孔徑為2-8微米，截留分子量在100-1000，操作壓差在1-2. 5MPa。本發(fā)明的有益點(diǎn)是本發(fā)明采用一種固定化酶法制備高F值紫蘇低聚肽，首先采用脫殼粉碎的紫蘇子，與水混合后流入裝有一定量固定化內(nèi)切酶的連續(xù)攪拌罐反應(yīng)器，反應(yīng)一段時間后將酶解液流出并進(jìn)行滅酶離心，分離出紫蘇油、多肽液、殘渣；將多肽液流入另一裝有一定量固定化外切酶的連續(xù)攪拌罐反應(yīng)器，反應(yīng)一段時間后將酶解液流出并進(jìn)行滅酶離心，分離得到低聚肽溶液，加入活性炭吸附除去芳香族氨基酸，經(jīng)進(jìn)一步的分離純化即可得到高F值低聚肽。


附圖是本發(fā)明工藝路線圖
具體實(shí)施例方式具體實(shí)施方式
一本實(shí)施方式的步驟如下
步驟一對紫蘇子脫殼粉碎，粉碎粒度為60目，與水按1:6的比例混合。步驟二 將步驟一中所得物料放入裝有固定化Alcalase2. 4L堿性蛋白酶的連續(xù)攪拌罐反應(yīng)器，反應(yīng)3h后流出產(chǎn)物進(jìn)行滅酶離心，分離出紫蘇油、多肽液及殘渣。固定化Alcalase2. 4L堿性蛋白酶的添加量`為底物濃度的1%，溫度55°C，pH=8. 5 ;滅酶條件為沸水中加熱5min ;離心條件為轉(zhuǎn)速4500rpm,溫度4°C,時間20min。步驟三將步驟二收集的多肽液放入裝有固定化木瓜蛋白酶連續(xù)攪拌罐反應(yīng)器，反應(yīng)2h后流出產(chǎn)物進(jìn)行滅酶離心，分離出低聚肽混合液。固定化木瓜蛋白酶的添加量為底物濃度的1%，溫度50°C，pH=6 ;滅酶條件為沸水中加熱5min ;離心條件為轉(zhuǎn)速8000rpm，溫度 4°C，時間 IOmin0步驟四將步驟三中的低聚肽混合液按1:5的比例加入活性炭,吸附40min,pH=3,溫度20°C，去除芳香族氨基酸。步驟五將步驟四中的物料經(jīng)超濾得到肽分子量在10(T1000的高F值低聚肽。具體實(shí)施方法二 本實(shí)施方法與具體實(shí)施方法一不同點(diǎn)在于步驟一中紫蘇子的粉碎粒度在70目。其它組成和步驟與具體實(shí)施方法一相同；
具體實(shí)施方法三本實(shí)施方法與具體實(shí)施方法一不同點(diǎn)在于步驟二中Alcalase2. 4L的添加量為2%，溫度50°C，pH=8 ；
具體實(shí)施方法四本實(shí)施方法與具體實(shí)施方法一不同點(diǎn)在于步驟三中木瓜蛋白酶的添加量為底物濃度的2%，溫度60°C，pH=6. 5。其它組成和步驟與具體實(shí)施方法一相同；
具體實(shí)施方法五本實(shí)施方法與具體實(shí)施方法一不同點(diǎn)在于步驟四中活性炭添加量為1:10，吸附60min，pH=4，溫度30°C。其它組成和步驟與具體實(shí)施方法一相同。
權(quán)利要求
1.一種固定化酶法制備高F值紫蘇低聚肽的方法，其特征在于所述方法步驟如下 步驟一對紫蘇子脫殼粉碎，與水混合得到混合液，所述加水量為物料質(zhì)量的6倍； 步驟二 將步驟一中所得混合液放入裝有固定化Alcalase2. 4L堿性蛋白酶的連續(xù)攪拌罐反應(yīng)器中，反應(yīng)3h后流出產(chǎn)物進(jìn)行離心，分離出紫蘇油、多肽液及殘渣； 步驟三將步驟二收集的多肽液放入裝有固定化木瓜蛋白酶連續(xù)攪拌罐反應(yīng)器，反應(yīng)2h后流出產(chǎn)物進(jìn)行滅酶，高速離心分離出混合液； 步驟四將步驟三中的混合液加入一定量的活性炭，吸附除去芳香族氨基酸，經(jīng)超濾脫鹽得到高F值的紫蘇低聚肽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種固定化酶法制備高F值紫蘇低聚肽的方法，其特征在于所述步驟一中紫蘇子的粉碎粒度在60-90目。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種固定化酶法制備高F值紫蘇低聚肽的方法，其特征在于所述步驟二中固定化Alcalase2. 4L堿性蛋白酶由3%殼聚糖、0. 5%戊二醛經(jīng)交聯(lián)-吸附法交聯(lián)時間4h后，調(diào)pH=9在給酶量950u/g的載體上固定化8h制得，其添加量為底物濃度的0.5-3%，溫度40-60°C，pH=7. 5-9. 5，滅酶條件為滅酶條件為沸水中加熱5min，離心條件為轉(zhuǎn)速4500rpm,溫度4°C,時間20min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種固定化酶法制備高F值紫蘇低聚肽的方法，其特征在于所述步驟三中固定化木瓜蛋白酶的制備方法同Alcalase2. 4L，添加量為底物濃度的0.5-3%，溫度40-60°C，pH=7. 5-9. 5，滅酶條件為滅酶條件為沸水中加熱5min，離心條件為轉(zhuǎn)速4500rpm,溫度4°C,時間20min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種固定化酶法制備高F值紫蘇低聚肽的方法，其特征在于所述步驟四中活性炭添加量為底物質(zhì)量的5-15倍，pH=2-5，溫度為25-50°C，超濾膜孔徑為2-8微米，截留分子量在100-1000，操作壓差在1-2. 5MPa。
全文摘要
本發(fā)明提供一種固定化酶法制備高F值紫蘇低聚肽的新工藝，采用一種固定化酶法制備高F值紫蘇低聚肽，首先采用脫殼粉碎的紫蘇子，與水混合后流入裝有一定量固定化內(nèi)切酶的連續(xù)攪拌罐反應(yīng)器，反應(yīng)一段時間后將酶解液流出并進(jìn)行滅酶離心，分離出紫蘇油、多肽液、殘渣；將多肽液流入另一裝有一定量固定化外切酶的連續(xù)攪拌罐反應(yīng)器，反應(yīng)一段時間后將酶解液流出并進(jìn)行滅酶離心，分離得到低聚肽溶液，加入活性炭吸附除去芳香族氨基酸，經(jīng)進(jìn)一步的分離純化即可得到高F值低聚肽。
文檔編號C12P21/06GK103060408SQ20121055777
公開日2013年4月24日 申請日期2012年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月20日
發(fā)明者江連洲, 李楊, 齊寶坤, 馮紅霞, 王歡, 曹亮 申請人:東北農(nóng)業(yè)大學(xué)