一種提高谷氨酰胺轉胺酶熱穩定性的短肽及其應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種提高谷氨酰胺轉氨酶熱穩定性的短肽，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示；本發明還公開了一種熱穩定性提高的谷氨酰胺轉氨酶，其特征在于C端含有上述短肽，氨基酸如SEQ?ID?NO.2所示。應用上述短肽能顯著提高谷氨酰胺轉氨酶的熱穩定性，其50℃的半衰期由3.7min延長至9.1min，提高1.5倍；TG-tag1熔解溫度為76.4oC，與野生酶相比提高7.5℃。
【專利說明】一種提高谷氨酰胺轉胺酶熱穩定性的短肽及其應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種短肽及其應用，特別是一種提高谷氨酰胺轉氨酶熱穩定性的短肽及其應用。
【背景技術】
[0002]微生物谷氨酰胺轉胺酶(蛋白質-谷氨酸-谷氨酰胺轉胺酶，MicrobialTransglutaminase, EC2.3.2.13簡稱MTG)能夠催化蛋白質肽鏈中谷氨酰胺殘基的Y-羧酰胺基與賴氨酸ε-酰基或其他酰基反應，形成ε_( Y-谷氨酰基)賴氨酸共價鍵。特殊的催化能力使TGase廣泛應用于食品工程、紡織與皮革加工、材料工程、生物醫藥等領域。但由于MTG異源表達分泌量低等缺陷，限制了 MTG的應用范圍。
[0003]在前期研究中，本研究室篩選出一株新的產谷氨酰胺轉胺酶的菌株(Streptomyces hygroscopicus CCTCC M203062),通過基因克隆方法,得到了MTG基因序列及其上下游序列，含MTG自身的啟動子和終止子(Genebank:EU477523)，并實現了 MTG和其酶原區在大腸桿菌中的高效表達(Liu S，Zhang D, Wang M, Cui W，Chen K, Liu Y, Du G, ChenJ,Zhou Z (2011)The pro-region of Streptomyces hygroscopicus transglutaminaseaffects its secretion by Escherichia col1.FEMS Microbiol Lett324(2):98-105)。
[0004]谷氨酰胺轉胺酶具有重要的工業應用價值，但其熱穩定性始終是一個不可逾越的障礙，為提高TGase酶的穩定性，本發明選取該穩定短肽融合至TGase酶C端，以期得到熱穩定性提高的突變酶。

【發明內容】

[0005]本發明所要解決的問題是提供一種提高的谷氨酰胺轉氨酶熱穩定性的短肽，其氨基酸序列如SEQ ID N0.1所示。
[0006]SEQ ID N0.1:短肽氨基酸序列為:IGCIILT。
[0007]本發明要解決的技術問題是提供一種熱穩定性提高的谷氨酰胺轉氨酶，其C端含有上述短肽序列，氨基酸序列如SEQ ID N0.2所示。
[0008]SEQ ID N0.2:谷氨酰胺轉胺酶C端加短肽序列為
【權利要求】
1.一種提高谷氨酰胺轉氨酶熱穩定性的短肽，其氨基酸序列如SEQ ID N0.1所示。
2.一種熱穩定性提高的谷氨酰胺轉氨酶，其特征在于C端含有權利要求1所述的短肽，氨基酸如SEQ ID N0.2所示。
3.一種應用權利要求1所述短肽提高谷氨酰胺轉氨酶熱穩定性的方法，其特征在于在谷氨酰胺轉氨酶C端插入權利要求1所述短肽序列。
4.權利要求3所述的方法，其特征在于所述短肽通過PCR方法或化學全合成的方法插入谷氨酰胺轉氨酶 C端。
【文檔編號】C12N9/10GK103554223SQ201310316129
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年7月25日 優先權日:2013年7月25日
【發明者】陳堅, 王廣圣, 陳康康, 劉松, 堵國成 申請人:江南大學