小而密低密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種小而密低密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒，包括R1和R2兩種獨立液態試劑，R1試劑各成分濃度為：PH值為7.0的MOPS緩沖液20～24g/L，過氧化氫酶1.8～2.2g/L，膽固醇氧化酶0.09～0.11g/L，膽固醇酯酶1.2～1.4g/L，作為表面活性劑I的PEG-2000含量為9～11g/L，N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽(TOOS)1.4～1.8g/L，其余為純化水；R2試劑各成分濃度為：PH值為7.0的MOPS緩沖液20～24g/L，過氧化物酶0.12～0.15g/L，作為表面活性劑Ⅱ的PEG-6000含量為13～17g/L，4-氨基安替比林0.45～0.55g/L，作為穩定劑的乙二胺四乙酸0.9～1.1g/L，其余為純化水。本發明能適合臨床實驗室對小而密低密度脂蛋白膽固醇含量測定的需要。
【專利說明】小而密低密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒
【技術領域】
[0001]本發明屬于血清檢測試劑【技術領域】，尤其與一種用于血清小而密低密度脂蛋白膽固醇測定的試劑盒有關。
【背景技術】
[0002]低密度脂蛋白是血清脂蛋白中的一種。血清低密度脂蛋白膽固醇對動脈粥樣硬化斑塊的形成有極大的作用，是冠心病的重要風險因子。根據其密度和大小的不同，低密度脂蛋白(LDL)又可分為大而輕低密度脂蛋白和小而密低密度脂蛋白(sdLDL),其中sdLDL因其顆粒小、易氧化等特點是LDL致動脈粥樣硬化的主要亞型，所以目前臨床實驗室普遍開展對小而密低密度脂蛋白膽固醇含量的測定工作。
【發明內容】

[0003]本發明目的就是要適應臨床實驗室對小而密低密度脂蛋白膽固醇含量測定的需要，提供一種用于血清小而密低密度脂蛋白膽固醇測定的試劑盒。
[0004]為此，本發明采用以下技術方案:小而密低密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒，包括Rl和R2兩種獨立液態試劑，其特征是:所述的Rl試劑各成分濃度為:PH值為7.0的MOPS緩沖液20~24g/L，過氧化氫酶1.8~2.2 g/L，膽固醇氧化酶0.09~0.11 g/L，膽固醇酯酶1.2~1.4 g/L,作為表面活性劑I的PEG-2000含量為9~11 g/L, N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽(TOOS) 1.4~1.8 g/L,其余為純化水；
所述的R2試劑各成分濃度為:PH值為7.0的MOPS緩沖液20~24g/L，過氧化物酶0.12~0.15 g/L，作為表面活性劑II的PEG-6000含量為13~17 g/L，4_氨基安替比林
0.45~0.55 g/L，作為穩定劑的乙二胺四乙酸0.9~1.1 g/L，其余為純化水。
[0005]本發明用于測定血清小而密低密度脂蛋白膽固醇時，首先制作測定樣本，使用含肝素150U/ml、氯化鎂90mmol/L、加速劑5mmol/L的前處理液與等體積血清混合,在溫度37°C下孵育IOmin,然后直立冰水浴15min,在溫度4°C下以1300r/min離心旋轉15min后收集上清液作為sdLDL-C直接測定的待測標本；測定標本制作好后，選用兩根試管分別作為校準管和樣品管，校準管中加入10微升校準液，樣品管中加入10微升待測標本，然后在校準管和樣品管中各加入本發明所述的Rl試劑240微升混勻，在溫度37°C下孵育5分鐘，使用全自動生化分析儀在主波長546nm時測定各管的吸光度A1,然后再在校準管和樣品管中各加入本發明所述的R2試劑80微升混勻，在溫度37°C下孵育5分鐘，使用全自動生化分析儀在主波長546nm時測定各管的吸光度A2，可以計算出使用Rl和R2測得的吸光度差值Δ A=A2-A1，血清小而密低密度脂蛋白膽固醇含量就可以通過下述公式計算而得:sdLDL-C(nmol/L)=(A A測定/ Λ A校準)XCs (校準液sdLDL-C溶度)。本發明產品的性能要求:精密度(CV) ≤ 5.0%，靈敏度在醫學決定水平濃度下(0.62mmol/L)，試劑與樣本反應產生的吸光度值應≥0.01OA0
[0006]使用本發明可以達到以下有益效果:能夠使用全自動生化分析儀直接測定血清小而密低密度脂蛋白膽固醇容量，適合臨床實驗室對小而密低密度脂蛋白膽固醇含量測定的需要。
【具體實施方式】
[0007]下面結合實施例對本發明進行進行詳細描述。
[0008]實施例一:
本發明試劑盒的Rl和R2試劑按下 述成分和含量配置:Rl試劑各成分濃度為:PH值為7.0的MOPS緩沖液20g/L，過氧化氫酶2.2 g/L,膽固醇氧化酶0.11 g/L,膽固醇酯酶1.2g/L,作為表面活性劑I的PEG-2000含量為9 g/L, N-乙基-N- (2-羥基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽(TOOS) 1.8 g/L，其余為純化水；所述的R2試劑各成分濃度為:PH值為7.0的MOPS緩沖液20g/L，過氧化物酶0.15 g/L,作為表面活性劑II的PEG-6000含量為13g/L，4-氨基安替比林0.45 g/L，作為穩定劑的乙二胺四乙酸1.1 g/L，其余為純化水。
[0009]使用羅氏P800全自動生化分析儀，測定方法采用兩點重點法，主波長采用546nm，定標模式采用線性，反應方向正向上升，首先使用含肝素150U/ml、氯化鎂90mmol/L、加速劑5mmol/L的前處理液與等體積血清混合，在溫度37°C下孵育lOmin，然后直立冰水浴15min，在溫度4°C下以1300r/min離心旋轉15min后收集上清液作為sdLDL-C直接測定的待測標本；選用兩根試管分別作為校準管和樣品管，校準管中加入10微升校準液，樣品管中加入10微升待測標本，然后在校準管和樣品管中各加入Rl試劑240微升混勻，在溫度37°C下孵育5分鐘，測定各管的吸光度A1，然后再在校準管和樣品管中各加入本發明所述的R2試劑80微升混勻，在溫度37°C下孵育5分鐘，測定各管的吸光度A2,生化分析儀計算出使用Rl和R2測得的吸光度差值Λ A=A2-A1，并通過下述公式自動計算出血清小而密低密度脂蛋白膽固醇含量:sdLDL-C (1111101/1)=(厶4測定/厶4校準)\(^(校準液8(10^-(:溶度)。重復測10次取平均值，實測結果如下:平均值為0.43鹽01/1，標準差0.0201;根據精密度公式:精密度=標準差/平均值X 100 %，精密度為4.7 %，小于5 %，符合要求。
[0010]實施例二:
本發明試劑盒的Rl和R2試劑按下述成分和含量配置:Rl試劑各成分濃度為:ΡΗ值為
7.0的MOPS緩沖液24g/L，過氧化氫酶1.8 g/L，膽固醇氧化酶0.09 8/1，膽固醇酯酶1.4 g/L，作為表面活性劑I的PEG-2000含量為11 g/L, N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽(TOOS) 1.4 g/L,其余為純化水；R2試劑各成分濃度為:PH值為7.0的MOPS緩沖液24g/L，過氧化物酶0.12 g/L,作為表面活性劑II的PEG-6000含量為17 g/L, 4-氨基安替比林0.55 g/L，作為穩定劑的乙二胺四乙酸0.9，其余為純化水。
[0011]使用羅氏P800全自動生化分析儀，測定方法采用兩點重點法，主波長采用546nm，定標模式采用線性，反應方向正向上升，首先使用含肝素150U/ml、氯化鎂90mmol/L、加速劑5mmol/L的前處理液與等體積血清混合，在溫度37°C下孵育lOmin，然后直立冰水浴15min，在溫度4°C下以1300r/min離心旋轉15min后收集上清液作為sdLDL-C直接測定的待測標本；選用兩根試管分別作為校準管和樣品管，校準管中加入10微升校準液，樣品管中加入10微升待測標本，然后在校準管和樣品管中各加入Rl試劑240微升混勻，在溫度37°C下孵育5分鐘，測定各管的吸光度A1，然后再在校準管和樣品管中各加入本發明所述的R2試劑80微升混勻，在溫度37°C下孵育5分鐘，測定各管的吸光度A2,生化分析儀計算出使用Rl和R2測得的吸光度差值Λ A=A2-A1，并通過下述公式自動計算出血清小而密低密度脂蛋白膽固醇含量:sdLDL-C (nmol/L) = ( Λ A測定/ Λ A校準)XCs (校準液sdLDL-C溶度)。重復測10次取平均值，實測結果如下:平均值為0.56鹽01/1，標準差0.0269;根據精密度公式:精密度=標準差/平均值X 100%，精密度為4.8%，小于5%，符合要求。
[0012]實施例三:
本發明試劑盒的Rl和R2試劑按下述成分和含量配置:Rl試劑各成分濃度為:PH值為7.0的MOPS緩沖液22.5g/L，過氧化氫酶2.01 g/L，膽固醇氧化酶0.106 g/L，膽固醇酯酶1.32 g/L,作為表面活性劑I的PEG-2000含量為10 g/L, N-乙基-N- (2-羥基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽(TOOS) 1.65 g/L，其余為純化水；R2試劑各成分濃度為:PH值為7.0的MOPS緩沖液22.5g/L，過氧化物酶0.13 g/L,作為表面活性劑II的PEG-6000含量為15g/L，4-氨基安替比林0.51 g/L，作為穩定劑的乙二胺四乙酸1.0，其余為純化水。
[0013]使用羅氏P800全自動生化分析儀，測定方法采用兩點重點法，主波長采用546nm，定標模式采用線性，反應方向正向上升，首先使用含肝素150U/ml、氯化鎂90mmol/L、加速劑5mmol/L的前處理液與等體積血清混合，在溫度37°C下孵育lOmin，然后直立冰水浴15min，在溫度4°C下以1300r/min離心旋轉15min后收集上清液作為sdLDL-C直接測定的待測標本；選用兩根試管分別作為校準管和樣品管，校準管中加入10微升校準液，樣品管中加入10微升待測標本，然后在校準管和樣品管中各加入Rl試劑240微升混勻，在溫度37°C下孵育5分鐘，測定各管的吸光度A1，然后再在校準管和樣品管中各加入本發明所述的R2試劑80微升混勻，在溫度37°C下孵育5分鐘，測定各管的吸光度A2,生化分析儀計算出使用Rl和R2測得的吸光度差值Λ A=A2-A1，并通過下述公式自動計算出血清小而密低密度脂蛋白膽固醇含量:sdLDL-C (nmol/L) = ( Λ A測定/ Λ A校準)XCs (校準液sdLDL-C溶度)。重復測10次取平均值，實測結果如下:平均值為0.58鹽01/1，標準差0.0248;根據精密度公式:精密度=標準差/平均值X 100 %，精密度為4.3 %，小于5 %，符合要求。
【權利要求】
1.小而密低密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒，包括Rl和R2兩種獨立液態試劑，其特征是:所述的Rl試劑各成分濃度為:PH值為7.0的MOPS緩沖液20~24g/L，過氧化氫酶·1.8~2.2 g/L，膽固醇氧化酶0.09~0.11 g/L，膽固醇酯酶1.2~1.4 g/L，作為表面活性劑I的PEG-2000含量為9~11 g/L, N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)_3_甲基苯胺鈉鹽(TOOS) 1.4~1.8 g/L，其余為純化水； 所述的R2試劑各成分濃度為:PH值為7.0的MOPS緩沖液20~24g/L，過氧化物酶·0.12~0.15 g/L，作為表面活性劑II的PEG-6000含量為13~17 g/L，4_氨基安替比林·0.45~0.55 g/L，作為穩定劑的·乙二胺四乙酸0.9~1.1 g/L，其余為純化水。
【文檔編號】C12Q1/44GK103589776SQ201310414650
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2013年9月12日 優先權日:2013年9月12日
【發明者】石麗萍, 夏春偉 申請人:紹興圣康生物科技有限公司