對亞型禽流感病毒進行檢測過程中rna樣品的收集的制作方法
【專利摘要】本發明公開了對亞型禽流感病毒進行檢測過程中RNA樣品的收集，首先對樣品進行酶切鑒定，即在適宜的溫水中進行消化，至少5小時，然后用百分之二點三的瓊脂糖凝膠電泳進行測試，檢驗其結果；第二步是對其進行序列測定，即對于回收的陽性產物，以此作為模版繼續擰PCR擴增，然后連接、轉化，得到陽性克隆物，對其進行測序；去除PCR反應中的反應物，加入適量的酶混合物，二者重量比例為5：1；充分混合后烤箱中烘干；溫浴；懸浮沉淀物；吸取沉淀物即可；在進行懸浮之前，可以進行低速離心，最多三分鐘；所述酶切鑒定和序列鑒定兩個步驟之間，時間間隔不能超過12小時。本發明的有益效果是，實驗的特異性和靈敏性比較高，能夠配合闡述核酸序列結構，操作相對簡單，對條件要求不高。
【專利說明】對亞型禽流感病毒進行檢測過程中RNA樣品的收集
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種實驗方法，具體來說是指對亞型禽流感病毒進行檢測過程中RNA樣品的收集。
【背景技術】
[0002]禽流感病毒(AIV)屬甲型流感病毒。流感病毒屬于RNA病毒的正黏病毒科，分甲、乙、丙3個型。其中甲型流感病毒多發于禽類，一些亞型也可感染豬、馬、海豹和鯨等各種哺乳動物及人類；乙型和丙型流感病毒則分別見于海豹和豬的感染。一般來說，禽流感病毒與人流感病毒存在受體特異性差異，禽流感病毒是不容易感染給人的。個別造成人感染發病的禽流感病毒可能是發生了變異的病毒。變異的可能性一是兩種以上的病毒進入同一細胞進行重組，如豬既可感染人流感病毒，又可能感染禽流感病毒，每種病毒都具有8個基因片段，從理論上講，可以形成256個新的重組病毒；二是病毒基因位點由于某種因素的影響，1983年4月，美國賓夕法尼亞州曾暴發H5N2型病毒引起的雞和火雞低致病性禽流感，由于沒有及時得到有效控制，到同年10月份，同樣的H5N2型毒株突然由低致病性變成高致病性，造成禽類大量死亡。因此對于禽流感病毒的研究刻不容緩。
【發明內容】
[0003]為克服上述技術問題，我們提出了以下技術方案:
對亞型禽流感病毒進行檢測過程中RNA樣品的收集，首先對樣品進行酶切鑒定，即在適宜的溫水中進行消化，至少5小時，然后用百分之二點三的瓊脂糖凝膠電泳進行測試，檢驗其結果；第二步是對其進行序列測定，即對于回收的陽性產物，以此作為模版繼續擰PCR擴增，然后連接、轉化，得到陽性克隆物，對其進行測序；去除PCR反應中的反應物，加入適量的酶混合物，二者重量比例為5:1 ;充分混合后烤箱中烘干；溫浴；懸浮沉淀物；吸取沉淀物即可。`
[0004]本發明中，在進行懸浮之前，可以進行低速離心，最多三分鐘。
[0005]本發明中，所述酶切鑒定和序列鑒定兩個步驟之間，時間間隔不能超過12小時。 本發明的有益效果是，可以有效避免蛋白氨基酸丟失，且穩定性好，表達量高，具有成
本低，操作簡單的優點。
【具體實施方式】
[0006]對亞型禽流感病毒進行檢測過程中RNA樣品的收集，首先對樣品進行酶切鑒定，即在適宜的溫水中進行消化，至少5小時，然后用百分之二點三的瓊脂糖凝膠電泳進行測試，檢驗其結果；第二步是對其進行序列測定，即對于回收的陽性產物，以此作為模版繼續擰PCR擴增，然后連接、轉化，得到陽性克隆物，對其進行測序；去除PCR反應中的反應物，加入適量的酶混合物，二者重量比例為5:1 ;充分混合后烤箱中烘干；溫浴；懸浮沉淀物；吸取沉淀物即可；在進行懸浮之前，可以進行低速離心，三分鐘；所述酶切鑒定和序列鑒定兩個步驟之間，時間間隔12小時。
以上所述，僅為本發明較佳的【具體實施方式】，但本發明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本【技術領域】的技術人員在本發明披露的技術范圍內，根據本發明的技術方案及其發明構思加以等同替換或改變，都應涵蓋在本發明的保護范圍之內。
【權利要求】
1.對亞型禽流感病毒進行檢測過程中RNA樣品的收集，其特征在于，首先對樣品進行酶切鑒定，即在適宜的溫水中進行消化，至少5小時，然后用百分之二點三的瓊脂糖凝膠電泳進行測試，檢驗其結果；第二步是對其進行序列測定，即對于回收的陽性產物，以此作為模版繼續擰PCR擴增，然后連接、轉化，得到陽性克隆物，對其進行測序；去除PCR反應中的反應物，加入適量的酶混合物，二者重量比例為5:1 ;充分混合后烤箱中烘干；溫浴；懸浮沉淀物；吸取沉淀物即可。
2.如權利要求1所述的對亞型禽流感病毒進行檢測過程中RNA樣品的收集，其特征在于，在進行懸浮之前，可以進行低速離心，最多三分鐘。
3.如權利要求1所述的對亞型禽流感病毒進行檢測過程中RNA樣品的收集，其特征在于，所述酶切鑒定和序列鑒定兩個`步驟之間，時間間隔不能超過12小時。
【文檔編號】C12Q1/68GK103614492SQ201310544096
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年11月6日 優先權日:2013年11月6日
【發明者】李剛 申請人:李剛