一種用于銅綠微囊藻的培養基及其應用的制作方法
【專利摘要】本發明涉及一種用于銅綠微囊藻的培養基。采用的技術方案是：培養基由NaCl、K2HPO4、MgSO4·7H2O、Ca(NO3)2、檸檬酸、FeCl3、檸檬酸三銨、EDTANa2、Na2CO3、A5儲備液和水組成。采用本發明的培養基及培養方法，不僅縮短培養時間，且培養過程中藻液不會變黃，所培養的銅綠微囊藻到達生長穩定期時的藻細胞數可達9×106個/mL。
【專利說明】—種用于銅綠微囊藻的培養基及其應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種銅綠微囊藻(Microcystisaeruginosd)的培養方法,包括銅綠微囊藻培養基改良和培養條件優化。
【背景技術】
[0002]隨著工業、農業的迅速發展，向環境中排放的營養物質日趨增多，水體的富營養化現象日益加劇，由此造成的有害藻類水華爆發也日趨頻繁，不僅破壞了水域生態系統的平衡,在水體中占主導地位的藻類,如微囊藻(Microcystis)等還會產生大量藻毒素等代謝產物對公眾健康、牲畜和水源供給帶來負面影響。有害藻類水華在我國及世界范圍的爆發頻率有逐年增加的趨勢。
[0003]為了探索行之有效的抑制藻類水華暴發的途徑，更好的了解藻類水華爆發的自然條件，就需要進行大量的實驗室模擬培養。但是作為水華爆發的主要藻類，微囊藻的實驗室純培養比較困難，特別是現有的培養基及培養條件很難達到實驗室純培養銅綠微囊藻的要求。
【發明內容】
[0004]為解決銅綠微囊藻實驗室純培 養較困難的問題，本發明提供一種利于銅綠微囊藻生長的培養基及培養條件。
[0005]本發明采用的技術方案是:一種用于銅綠微囊藻的培養基，其組成如下:
NaCl 1.0-1.5 g/L、K2HPO4 0.02-0.06 g/L、MgSO4.7H20 0.05-0.1 g/L、 Ca(NO3) 2 0.05-0.1 g/L、檸檬酸 0.004-0.008 g/L、FeCl3 0.004-0.008 g/L、 檸檬酸三銨 0.003-0.008 g/L、EDTANa2 0.001-0.003 g/L、Na2CO3 0.01-0.03g/L、 A5儲備液l-2mL/L、水余量。
[0006]優選的，培養基的組成如下:
NaCl1.024g/L、K2HPO4 0.04g/L、MgSO4.7H20 0.075g/L、
Ca(NO3) 2 0.077g/L、檸檬酸 0.006g/L、FeCl30.006g/L、
檸檬酸三銨 0.005g/L、EDTANa2 0.001g/L、Na2CO3 0.02g/L、
A5儲備液 lmL/L、水余量。
[0007]所述的A5 儲備液的組成如下=H3BO3 2-3 g/L、MnSO4 1-2 g/L、ZnS04.7H20
0.1-0.3g/L,NaMoO4.2Η20 0.1-0.5 g/L,CuSO4.5Η20 0.05-0.lg/L、水余量，pH值7.2~7.4。
[0008]優選的，A5儲備液的組成如下=H3BO3 2.86g/L、MnSO4 1.59g/L、ZnS04.7H20
0.22g/L、NaMoO4.2H20 0.39g/L、CuSO4.5H20 0.08g/L、水余量，pH 值 7.2~?.4。
[0009]一種銅綠微囊藻的培養方法如下:將上述的培養基經120-125°C滅菌20_30min，室溫冷卻后，將銅綠微囊藻按2-7%的體積比接種于培養基中，于光照培養箱中培養，每天搖晃2-3次，設置光照培養箱的光照強度為10001x~15001x，暖光，光暗比為14h:10h，光室培養溫度為30°C，暗室為25°C。[0010]本發明的有益效果是:采用本發明的培養基及培養方法，不僅縮短培養時間，且培養過程中藻液不會變黃，所培養的銅綠微囊藻到達生長穩定期時的藻細胞數可達9 X IO6個/ml。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0011]圖1是銅綠微囊藻生長曲線。
【具體實施方式】
[0012]實施例1 一種銅綠微囊藻的培養方法 (一)用于銅綠微囊藻的培養基
1.A5 儲備液的組成如下=H3BO3 2.86g/L，MnSO4 1.59g/L，ZnS04.7H20 0.22g/L，NaMoO4.2H20 0.39g/L, CuSO4.5H20 0.08g/L、水余量，pH 值 7.2~?.4。
[0013]方法:按上述的配比，量取H3BO3, MnSO4, ZnS04.7H20, NaMoO4.2H20 和 CuSO4.5H20,用水定溶至I升，pH值7.2^7.4。
[0014]2.培養基的組成如下:
NaCl1.024g/L、K2HPO4 0.04g/L、MgSO4.7H20 0.075g/L、
Ca(NO3) 2 0.077g/L、檸檬酸 0.006g/L、FeCl30.006g/L、
檸檬酸三銨 0.005g/L、EDTANa2 0.001g/L、Na2CO3 0.02g/L、
A5儲備液 lmL/L、水余量。
[0015]方法:按上述的配比，量取NaCl、K2HP04、MgSO4.7H20、Ca(NO3) 2、檸檬酸、FeCl3、檸檬酸三銨、EDTANa2、Na2CO3和A5儲備液，用水定溶至I升。
[0016](二)銅綠微囊藻的培養方法
將上述的培養基經120-125°C滅菌20-30min，培養基冷卻到室溫后，將銅綠微囊藻按5%的體積比接種于裝有培養基的三角瓶中，于光照培養箱中培養，每天搖晃2-3次。設置光照培養箱的光照強度為1000Ix~15001X，暖光，光暗比為14h:10h，光室培養溫度為30°C，暗室為25°C。
[0017](三)培養結果
每天在無菌條件下，取藻液，用血球計數板在顯微鏡下觀察計數，計算藻細胞密度，繪制生長曲線，結果見圖1。
[0018]從圖1可以看出，(T3d為銅綠微囊藻生長的延滯期，3~lld為對數生長期，11~15d為穩定期，15d之后逐漸進入衰亡期。達到穩定期時藻細胞數為9.03X IO6個/mL。
【權利要求】
1.一種用于銅綠微囊藻的培養基，其特征在于培養基的組成如下: NaCl 1.0-1.5 g/L、K2HPO4 0.02-0.06 g/L, MgSO4.7H20 0.05-0.1 g/L、 Ca(NO3) 2 0.05-0.1 g/L、檸檬酸 0.004-0.008 g/L、FeCl3 0.004-0.008 g/L、 檸檬酸三銨 0.003-0.008 g/L、EDTANa2 0.001-0.003 g/L、Na2CO3 0.01-0.03g/L、 A5儲備液 l-2mL/L、水余量； 所述的 A5 儲備液的組成如下=H3BO3 2-3 g/L、MnSO4 1-2 g/L、ZnS04.7H20 0.1-0.3g/L、NaMoO4.2H20 0.1-0.5 g/L、CuSO4.5H20 0.05-0.lg/L、水余量，pH 值 7.2~?.4。
2.如權利要求1所述的用于銅綠微囊藻的培養基，其特征在于培養基的組成如下: NaCl1.024g/L、K2HPO4 0.04g/L、MgSO4.7H20 0.075g/L、 Ca(NO3) 2 0.077g/L、檸檬酸 0.006g/L、FeCl30.006g/L、 檸檬酸三銨 0.005g/L、EDTANa2 0.001g/L、Na2CO30.02g/L、 A5儲備液 lmL/L、水余量。
3.如權利要求1或2所述的用于銅綠微囊藻的培養基，其特征在于:所述的A5儲備液的組成如下:H3BO3 2.86g/L、MnSO4 1.59g/L、ZnS04.7H20 0.22g/L、NaMoO4.2H20 0.39g/L、CuSO4.5H20 0.08g/L、水余量，pH 值 7.2~7.4。
4.一種銅綠微囊藻的培養方法，其特征在于:將權利要求1、2或3所述的培養基經120-125°C滅菌20-30min，室溫冷卻后，將銅綠微囊藻按2_7%的體積比接種于培養基中，于光照培養箱中培養，每天搖晃2-3次，設置光照培養箱的光照強度為10001x~15001x，暖光，光暗比為14h:10h，光室培養溫`度為30°C，暗室為25°C。
【文檔編號】C12N1/20GK103555635SQ201310557730
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年11月7日 優先權日:2013年11月7日
【發明者】付保榮, 張潤潔, 郭鑫, 楊玉東, 付豪, 魯男 申請人:遼寧大學