一種新的金花菌及其應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種新的金花菌及其應用。新的金花菌-假灰綠曲霉（Aspergillus?pseudoglaucus）A671，該菌于2013年9月26日保藏于中國典型培養物保藏中心（CCTCC），地址：中國武漢市武漢大學，保藏編號為CCTCC?NO：M2013450。本發明是從墨夫人黑茶中分離獲得的金花菌被鑒定為假灰綠曲霉。假灰綠曲霉以往未見報道可在黑茶發酵過程中形成“金花”。利用該菌株，在特定的工藝條件下，能夠在黑茶內產生金花，從而制作優質的黑茶茶磚。同時，該菌的發酵液可能與冠突曲霉具有相同的功能，因此具有極大的開發利用前景。
【專利說明】一種新的金花菌及其應用
【技術領域】:
[0001]本發明屬于微生物領域，具體涉及一種新的金花菌及其應用。
【背景技術】:
[0002]湖南黑茶中特有的茯磚茶是黑茶在加工過程中通過特殊的工藝使特定的微生物在磚茶中生長，發酵轉化磚茶，并在茶磚內部產生金黃色的閉囊殼，民間謂之“金花”，在其作用下使磚茶產生特殊的醇厚味道與香氣。金花也成為評價茯磚茶質量的一個標準。過去多年研究確定產生金花的微生物為冠突曲霉(冠突散囊菌)。冠突曲霉的發酵液與綠茶、茶多酚復合物相比較，能更好地提高胃蛋白酶、胰蛋白酶、淀粉酶的活性，并能抑制脂肪酶的活力，有利于淀粉、蛋白質的消化吸收，改善人體腸道功能；同時其對脂肪酶的活力的抑制，有利于阻止腸道對脂肪的吸收。

【發明內容】
:
[0003]本發明的第一個目的是提供一種新的金花菌-假灰綠曲霉(Aspergi I Iuspseudoglaucus)A671，該菌于2013年9月26日保藏于中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，地址:中國武漢市武漢大學，保藏編號為CCTCC NO:M2013450。
[0004]本發明的新的金花菌-假灰綠曲霉(Aspergillus pseudoglaucus)A671是從廣西合浦蟠龍居茶業有限公司的墨夫人黑茶中分離獲得的。
[0005]一、培養特征及形態特征:
[0006] 假灰綠曲霉(Aspergillus pseudoglaucus) A671在查氏培養基上菌落生長緩慢，270C 7天直徑為7-15mm ;淡黃至黃色，背面白至黃色，致密；16天長滿整個平皿，蜜黃色至橄欖褐色，中央黃色，背面黃褐色；分生孢子產孢結構及閉囊殼較少。
[0007]在20%蔗糖查氏培養基上菌落生長較快，27°C 7天直徑為50_55mm ;淡黃至黃色，背面黃色，菌落平，薄；具大量閉囊殼，黃色，分生孢子產孢結構較少。閉囊殼球形，扁球形至橄橢球形，50-100 X 90-150 u m ;子囊近球形，7-13 u m ;子囊孢子雙凸鏡形，表面光滑，無脊，無溝或具淺溝痕，3.5-4.5X2.5-3.5 Um0分生孢子頭呈輻射形，45-70 y m，頂囊半球形至燒瓶形，15-28 u m, 1/2至全部表面可孕，孢梗莖520-560X9-10 u m ;產孢結構單層，瓶梗5.6-8.3X1.5-2 um ;分生孢子梨形，橢球形或近球形，兩端平截，4_7X 2.5_4iim，表面具密集小刺。
[0008]在40%麥芽汁酵母瓊脂培養基上菌落生長迅速，27°C 7天長滿整個平皿，邊緣白至黃色，中央灰黃綠色，氣生菌絲發達，見大量分生孢子產孢結構及閉囊殼，背面橙黃褐色至黃褐色。
[0009]在37°C下，可于40%麥芽汁酵母瓊脂培養基上生長，7天直徑為50mm，但不能在查氏培養基及20%蔗糖查氏培養基上生長。
[0010]假灰綠曲霉(Aspergillus pseudoglaucus) A671的子囊孢子電鏡圖片如圖1所示，其與冠突曲霉的子囊孢子(圖2)相比，冠突曲霉的子囊孢子表面不光滑，赤道面生有冠狀關起。
[0011]二、分子分類地位的確定
[0012]1、(6 -微管蛋白基因(BT2gen):常規方法提取假灰綠曲霉(Aspergilluspseudoglaucus) A671的P -微管蛋白基因，并進行測序，其序列如SEQ ID N0.1所不，測得序列經 Blastn 方法，在 GenBank 數據庫(http://www.ncb1.nlm.nih.gov/)中檢索該序列同源性最高的物種，結果顯示，該金花菌與假灰綠曲霉具有99%以上的同源性。冠突曲霉的(6-微管蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID N0.2所示，灰綠曲霉(Aspergilluspseudoglaucus) A671和冠突曲霉的P _微管蛋白基因的序列比對分析結果如圖3所示。
[0013]本發明的假灰綠曲霉(Aspergillus pseudoglaucus) A671與冠突曲霉(Aspergillus cristatus,=冠突散囊菌Eurotium cristatum,傳統分離的金花菌)的主要區別:
[0014]1、冠突曲霉的子囊孢子表面不光滑，赤道面生有冠狀突起；
[0015]2、冠突曲霉37°C可在查氏培養基及20%蔗糖查氏培養基上生長；
[0016]3、(6-微管蛋白基因序列(BT2)序列不同。
[0017]因此,本發明的假灰綠曲霉(Aspergillus pseudoglaucus) A671是一種新的金花菌。
[0018]綜合以上的培養特征、形態學和分子分類學特征，本發明的菌株確定是一個新的金花菌，是一個新的分離株，將其歸入曲霉屬(Aspergillus)，被鑒定為假灰綠曲霉(Aspergillus pseudoglaucus)A671,該菌于2013年9月26日保藏于中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，地址:中國武漢市武漢大學，保藏編號為CCTCC NO:M2013450。
[0019]本發明的第二個目的是假灰綠曲霉(AspergiIIus pseudoglaucus)A671在黑茶發酵過程中形成“金花”中的應用。
[0020]本發明是從墨夫人黑茶中分離獲得的金花菌被鑒定為假灰綠曲霉。假灰綠曲霉以往未見報道可在黑茶發酵過程中形成“金花”。利用該菌株，在特定的工藝條件下，能夠在黑茶內產生金花，從而制作優質的黑茶茶磚。同時，該菌的發酵液可能與冠突曲霉具有相同的功能，因此具有極大的開發利用前景。
[0021]本發明的假灰綠曲霉(Aspergilluspseudoglaucus) A671,于 2013 年 9 月 26 日保藏于中國典型培養物保藏中心(CCTCC)Jia:中國武漢市武漢大學，保藏編號為CCTCCNO:M2013450o
【專利附圖】

【附圖說明】:
[0022]圖1是假灰綠曲霉(Aspergillus pseudoglaucus) A671的子囊孢子電鏡圖；
[0023]圖2是冠突曲霉的子囊孢子電鏡圖；
[0024]圖3是灰綠曲霉(Aspergillus pseudoglaucus)A671和冠突曲霉的P -微管蛋白基因的序列比對分析結果圖。
【具體實施方式】:·
[0025]以下實施例是對本發明的進一步說明，而不是對本發明的限制。
[0026]實施例1:假灰綠曲霉(Aspergillus pseudoglaucus) A671的分離和鑒定[0027]本發明的新的金花菌-假灰綠曲霉(Aspergillus pseudoglaucus)A671是從廣西合浦蟠龍居茶業有限公司的墨夫人黑茶中分離獲得的。
[0028]在無菌環境下，小心掰開具有大量黃色金花的墨夫人黑茶茶磚，利用滅菌的接種針或鑷子挑取部分金花，接種于40%蔗糖麥芽汁酵母瓊脂培養基上，在27°C培養5-7天，菌株生長旺盛，菌落邊緣白至黃色，中央灰黃綠色，氣生菌絲發達。將分離獲得的菌株(假灰綠曲霉(Aspergillus pseudoglaucus) A671)接種于20%鹿糖查氏培養基上，27°C培養，7天直徑為50-55_，菌落淡黃至黃色，背面黃色，平，薄，肉眼可見大量黃色球形閉囊殼，即茶葉上生長的“金花菌”。
[0029]一、培養特征及形態特征:[0030]假灰綠曲霉(Aspergillus pseudoglaucus) A671在查氏培養基上菌落生長緩慢，270C 7天直徑為7-15mm ;淡黃至黃色，背面白至黃色，致密；16天長滿整個平皿，蜜黃色至橄欖褐色，中央黃色，背面黃褐色；分生孢子產孢結構及閉囊殼較少。
[0031]在20%蔗糖查氏培養基上菌落生長較快，27°C 7天直徑為50-55mm ;淡黃至黃色，背面黃色，菌落平，薄；具大量閉囊殼，黃色，分生孢子產孢結構較少。閉囊殼球形，扁球形至橄橢球形，50-100 X 90-150 u m ;子囊近球形，7-13 u m ;子囊孢子雙凸鏡形，表面光滑，無脊，無溝或具淺溝痕，3.5-4.5X2.5-3.5 Um0分生孢子頭呈輻射形，45-70 y m，頂囊半球形至燒瓶形，15-28 u m, 1/2至全部表面可孕，孢梗莖520-560 X 9-10 u m ;產孢結構單層，瓶梗
5.6-8.3X1.5-2 ii m ;分生孢子梨形，橢球形或近球形，兩端平截，4-7X 2.5_4iim，表面具密集小刺。
[0032]在40%麥芽汁酵母瓊脂培養基上菌落生長迅速，27°C 7天長滿整個平皿，邊緣白至黃色，中央灰黃綠色，氣生菌絲發達，見大量分生孢子產孢結構及閉囊殼，背面橙黃褐色至黃褐色。
[0033]在37°C下，可于40%麥芽汁酵母瓊脂培養基上生長，7天直徑為50mm，但不能在查氏培養基及20%蔗糖查氏培養基上生長。
[0034]假灰綠曲霉(Aspergillus pseudoglaucus) A671的子囊孢子電鏡圖片如圖1所示，其與冠突曲霉的子囊孢子(圖2)相比，冠突曲霉的子囊孢子表面不光滑，赤道面生有冠狀關起。
[0035]二、分子分類地位的確定
[0036]1、P -微管蛋白基因(BT2gen):常規方法提取假灰綠曲霉(Aspergilluspseudoglaucus) A671的0 -微管蛋白基因，并進行測序,其序列如SEQ ID N0.1所示，測得序列經 Blastn 方法，在 GenBank 數據庫(http://www.ncb1.nlm.nih.gov/)中檢索該序列同源性最高的物種，結果顯示，該金花菌與假灰綠曲霉具有99%以上的同源性。冠突曲霉的(6-微管蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID N0.2所示，假灰綠曲霉(Aspergilluspseudoglaucus) A671和冠突曲霉的P _微管蛋白基因的序列比對分析結果如圖3所示。
[0037]本發明的假灰綠曲霉(Aspergillus pseudoglaucus) A671與冠突曲霉(Aspergillus cristatus,=冠突散囊菌Eurotium cristatum,傳統分離的金花菌)的主要區別:
[0038]1、冠突曲霉的子囊孢子表面不光滑，赤道面生有冠狀突起；
[0039]2、冠突曲霉37°C可在查氏培養基及20%蔗糖查氏培養基上生長；[0040]3、(6-微管蛋白基因序列(BT2)序列不同(圖3)。
[0041]因此,本發明的假灰綠曲霉(Aspergillus pseudoglaucus) A671是一種新的金花菌。
[0042]綜合以上的培養特征、形態學和分子分類學特征，本發明的菌株確定是一個新的金花菌，是一個新的分離株，將其歸入曲霉屬(Aspergillus)，被鑒定為假灰綠曲霉(Aspergillus pseudoglaucus)A671,該菌于2013年9月26日保藏于中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，地址:中國武漢市武漢大學，保藏編號為CCTCC NO:M2013450。
[0043]實施例2:
[0044]墨夫人黑茶茶磚以原生態老茶樹的單片成熟葉為加工原料。采用滾筒殺青機預熱至260°C，然后投入鮮葉快速翻炒，殺青。趁熱裝入揉捻機揉捻。將揉捻好的茶葉撒落在無異味的大篷布上，使茶葉干燥。新加工的干茶要先存放一年，然后放到烘焙機焙火三次。將干茶投入蒸籠中，用100°C的蒸汽溫度蒸茶，將蒸好的茶放入模匣內拍平，然后將模匣放入壓力機內進行壓制。施壓成型后的茶餅經過冷卻后，用宣紙包裹好擺放在架子上，冷卻，保持室溫在25-30°C，空氣相對濕度80%-85%，自然發花。墨夫人黑茶茶磚整體生產過程在含有假灰綠曲霉(Aspergillus pseudoglaucus) A671孢子的環境中進行，15-20天即可觀察到金花的生長。
[0045]實施例3:
[0046]取未經蒸制發花的黑茶生茶，置于密閉的玻璃瓶中，加適量水，于121°C高溫蒸汽滅菌30分鐘,冷卻后,在無菌環境下,接種適量假灰綠曲霉(Aspergillus pseudoglaucus)A671液體菌種，置于27 °C培養避光。7-10天后，肉眼可見茶葉表面長出黃色球形閉囊殼，即茶葉上生長的“·金花菌”。因此可以利用本發明的假灰綠曲霉(Aspergilluspseudoglaucus) A671在黑茶內產生金花,從而制作優質的黑茶。
【權利要求】
1.假灰綠曲霉(Aspergilluspseudoglaucus) A671,其保藏編號為 CCTCC NO:M2013450。
2.權利要求1所述的假灰綠曲霉(Aspergilluspseudoglaucus) A671在黑茶發酵過程中形成 “金花”中的應用。
【文檔編號】A23F3/10GK103667076SQ201310559912
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年11月12日 優先權日:2013年11月12日
【發明者】魯慧玲, 李桂才, 王磊, 潘清靈, 章衛民, 龐明 申請人:廣西合浦蟠龍居茶業有限公司