乳腺癌易感基因快速檢測試劑盒及檢測方法
【專利摘要】本發明公開了一種乳腺癌易感基因快速檢測試劑盒，包括檢測Foxp3、FGFR2、CD14、BRCA1基因所對應的5個SNP多態性檢測。本發明還公開一種乳腺癌易感基因快速檢測方法。本發明的有益效果如下：通過半巢式AS-PCR擴增和瓊脂糖凝膠電泳檢測，根據DNA電泳條帶進行基因分型，篩選出具有潛在乳腺癌易感的個體，從而達到預防乳腺癌的目的；此方法操作簡便，檢測時間短、成本低，此外還具有靈敏度高，特異性強，應用前景廣闊。
【專利說明】乳腺癌易感基因快速檢測試劑盒及檢測方法
【技術領域】:
[0001]本發明涉及生物基因檢測【技術領域】，具體為一種乳腺癌易感基因快速檢測試劑盒及檢測方法。
【背景技術】:
[0002]乳 腺癌(Breast cancer)被稱之為女性殺手，發病率僅次于肺癌。據世界衛生組織國際癌癥研究中心發布的癌癥報告(GL0B0CAN2008)估計，全世界每年約有138萬婦女罹患乳腺癌，約有54萬乳腺癌患者死亡。2008年中國女性乳腺癌新發病例數約16.9萬，世界人口標化發病率為21.6/10萬，居女性所有惡性腫瘤第2位；死亡率為5.7/10萬，居女性癌癥死亡的第6位。
[0003]早診斷早發現，乳腺癌病情的治愈還是相當令人樂觀的。在第IV期得到診斷的乳腺癌患者一只有20%能夠存活到5年之后，而在第I期就確診的患者一 100%活到5年之后。因此，乳腺癌的早期診斷是目前亟待解決的問題。
[0004]目前，臨床上對乳腺癌檢測有傳統的檢測方法，包括X線診斷、超聲顯象檢查、細胞學及組織學診斷等，但這些檢測手段針對性不強，檢出率低，具有較大的局限性；還有一些基因檢測手段，如免疫組化技術、熒光原位雜交技術、熒光定量PCR技術、基因芯片技術等。免疫組化技術可檢測腫瘤和靶細胞蛋白表達情況，不能觀察基因水平突變類型，FISH能直接和準確的判斷靶基因是否存在擴增，但較昂貴和繁瑣。基因芯片技術可檢測人數多、位點多，時間短，但僅用于已公布的基因位點、重復準確性低，價格高。熒光定量PCR技術試劑昂貴，需精密儀器等。這些技術的缺點都大大的限制了乳腺癌早期診斷的應用。
[0005]國內外對乳腺癌易感基因的研究表明，乳腺癌患者在基因水平存在某些基因突變的現象，大多表現為SNP或堿基缺失多態性。乳腺癌具有發病率、死亡率高等特點，因此，通過早期基因篩查、風險評估和監測來規避乳腺癌的發生就顯得尤為重要。
[0006]目前，乳腺癌與基因多態性關聯性研究成果使乳腺癌易感基因篩查成為可能。研究表明，Foxp3、⑶14、FGFR2、BRCA14個基因多態位點突變與乳腺癌發生顯著相關。4個基因中，Foxp3為調節性T細胞特異性轉錄因子，對其發育和功能起著重要的調節作用，Foxp3+⑶4+⑶25在腫瘤免疫逃逸機制中起重要作用。⑶14識別、結合LPS復合物，介導LPS所致的細胞反應，在LPS性炎癥反應、內毒休克等病理反應中起重要作用，D14參與了乳腺癌，膀胱癌等腫瘤的發生過程；FGFR2指導細胞分裂、遷移和分化成更加具有功能性的細胞，FGFR2受體鑲嵌在細胞表面，接受來自外部的信號，從而傳遞信號到內表面，最終指導細胞分化。FGFR2基因的突變，會引起細胞過度增生而引起癌癥的發生；BRCA1主要作用是控制傳遞細胞繁殖的信息，如果出現變異，細胞將會無節制地繁殖，導致癌癥。大約有10%的乳腺癌由遺傳性的BRCAl基因突變引發的。
[0007]中國漢族乳腺癌人群中，廣泛存在Foxp3、⑶14、FGFR2、BRCAl，4個基因的單核苷酸多態性改變，從而導致乳腺癌的發生，因此篩查該4個基因的多態位點突變對于防治乳腺癌具有特殊的意義。
【發明內容】
:
[0008]本發明的目的是以上述現有技術為基礎，提供一種操作簡易、多位點、高效率、低成本、高靈敏度的，對乳腺癌能起到預防作用的乳腺癌易感基因快速檢測試劑盒。
[0009]本發明另一目的是提供一種乳腺癌易感基因快速檢測方法。
[0010]為了實現本發明目的，本發明采取的技術方案是:乳腺癌易感基因快速檢測試劑盒，包括檢測Foxp3基因上rs2294021號多態位點的引物混合物，其中，檢測Foxp3基因上rs2294021號多態位點的引物混合物為:
[0011]
【權利要求】
1.乳腺癌易感基因快速檢測試劑盒，其特征在于，包括檢測Foxp3基因上rs2294021號多態位點，其中檢測Foxp3基因多態位點的引物混合物為:
SEQ N0.1:5’ -CCCGCAGGAAGGAGGAGGTCT-3’ ；
SEQ N0.2:5’ -TTCCGAACAGCATCGTCCT-3’ ；
SEQ N0.3:5’ -GGCAGGGGCTCATGGAC-3’ ；
SEQ N0.4:5’ -GGCAGGGGCTCATGGAT-3’。
2.根據權利要求1所述的乳腺癌易感基因快速檢測試劑盒，其特征在于，還包括檢測FGFR2基因上rsl219648和rs2981582號多態位點。 其中，檢測FGFR2基因上rsl219648號多態位點的引物混合物為:
SEQ N0.1:5’ -ATAAATACATCCCTTGTTCTCGT-3’ ；
SEQ N0.2:5’ -TCTGGGCTCTCTATTCTGTTC-3’ ；
SEQ N0.3:5’ -CACGCCTATTTTACTTGACACATG-3’ ；
SEQ N0.4:5’ -CACGCCTATTTTACTTGACACATT-3’ ；
SEQ N0.5:5’ -ATAAATACATCCCTTGTTCTCGT-3’ ；
SEQ N0.6:5’ -TCTGGGCTCTCTATTCTGTTC-3’ ；
SEQ N0.7:5’ -CACGCCTATTTTACTTGACACATG-3’ ；
SEQ N0.8:5’ -CACGCCTATTTTACTTGACACATT-3’ ； 檢測FGFR2基因上rs2981582號多態位點的引物混合物為:
SEQ N0.9:5’ -TCCAAGTATCACAGGGCAT-3’ ；
SEQ N0.10:5’ -CAAGAGGCAGTTCCATAATCG-3’ ；
SEQ N0.11:5’ -CACTTAATGAACCTGTTTTC-3’ ；
SEQ N0.12:5’ -CACTTAATGAACCTGTTTTT-3’。
3.根據權利要求2所述的乳腺癌易感基因快速檢測試劑盒，其特征在于，還包括檢測⑶14基因上rs2569190號多態位點，其中，檢測⑶14基因多態位點的引物混合物為:
SEQ N0.13:5’ -GCAGCAACAAGCAGGACG-3’ ；
SEQ N0.14:5’ -TGGTGCCAACAGATGAGG-3’ ；
SEQ N0.15:5’ -ATGTTTCAGGGAGGGGTG-3’ ；
SEQ N0.16:5’ -ATGTTTCAGGGAGGGGTA-3’。
4.根據權利要求3所述的乳腺癌易感基因快速檢測試劑盒，其特征在于，還包括檢測BRCAl基因上rs2046210號多態位點，其中，檢測BRCAl基因多態位點的引物混合物為:
SEQ N0.17:5’ -CGGTCATTACAACACAGAACTAT-3’ ；
SEQ N0.18:5’ -CACAGAACTAAACCACCAAGAG-3’ ；
SEQ N0.19:5’ -CTTTTATTTCAGGTAGATTT-3’ ；
SEQ N0.20:5’ -CTTTTATTTCAGGTAGATTC-3’。
5.根據權利要求1、2、3或者4所述的乳腺癌易感基因快速檢測試劑盒，其特征在于，檢測Foxp3基因上rs2294021號多態位點的引物混合物的摩爾數比為SEQ N0.1 =SEQ N0.2/SEQ N0.3: SEQ N0.4=1:1:1 ;檢測FGFR2基因上rsl219648號多態位點的引物混合物的摩爾數比都為 SEQ N0.5:SEQ N0.6/SEQ N0.7: SEQ N0.8=1:1:1 ;檢測 FGFR2 基因上 rs2981582號多態位點的引物混合物的摩爾數比都為SEQ N0.9:SEQ N0.10/SEQ N0.1liSEQ N0.12=1:1:1 ;檢測CD14基因上rs2569190號多態位點的引物混合物的摩爾數比為SEQ N0.13 =SEQN0.14/SEQ N0.15:SEQ N0.16=1:1:1 ;檢測 BRCAl 基因上 rs2046210 號多態位點的引物混合物的摩爾數比為 SEQ N0.17:SEQ N0.19/SEQ N0.19:SEQ N0.20=0.2-0.5:1:1。
6.根據權利要求1所述的乳腺癌易感基因快速檢測試劑盒，其特征在于，還包括擴增試劑和擴增后的基因分型用試劑，所述擴增試劑包括PCR緩沖液、dNTPs混合物、熱啟動Taq酶和超純水；所述擴增后的基因分型用試劑包括瓊脂糖、TAE緩沖液、DNA分子量標準、DNA無毒染料和DNA上樣緩沖液。
7.根據權利要求6所述的乳腺癌易感基因快速檢測試劑盒，其特征在于，所述擴增試劑包括 IOX PCR buffer:其中，Tris-HCl pH8.0100mM;KC1500mM;MgCl215mM，各組分濃度為2.5mM的dNTPs混合物，5U/ μ I的熱啟動Taq酶用量為0.1-0.125 μ I。
8.根據權利要求1所述的乳腺癌易感基因快速檢測試劑盒，其特征在于，擴增試劑由以下體積的組分組成:
9.一種乳腺癌易感基因快速檢測方法，其特征在于，其步驟包括， (1)、檢材基因組的DNA提取； (2)、擴增和擴增產物的檢測分析；
【文檔編號】C12Q1/68GK103966310SQ201410040644
【公開日】2014年8月6日 申請日期:2014年1月27日 優先權日:2014年1月27日
【發明者】陳偉民, 婁婧婧 申請人:廣州市體育科學研究所