包括微生物蛋白酶變體的組合物和方法
【專利摘要】本發明提供了枯草蛋白酶變體和包括至少一種此處所述的枯草蛋白酶變體的組合物，以及使用這些變體和組合物的方法。在一些實施方式中，本發明提供了適用于衣物清潔應用的蛋白酶變體。
【專利說明】包括微生物蛋白酶變體的組合物和方法
[0001]本申請為2009年6月3日提交的，發明名稱為“包括微生物蛋白酶變體的組合物和方法”的PCT申請PCT/US2009/046067的分案申請，所述PCT申請進入中國國家階段的日期為2011年I月31日，申請號為200980130352.6。
發明領域
[0002]本發明提供枯草蛋白酶變體及包含至少一種本文所述枯草蛋白酶變體的組合物，以及使用這些變體和組合物的方法。
[0003]發明背景
[0004]絲氨酸蛋白酶是包含多種具有廣泛特性和生物學功能的酶類別的羰基水解酶的一個亞型。已經對枯草蛋白酶進行了很多研究，這很大程度上是由于它們在清潔及飼料應用中的用途。另外的研究集中在能對這些酶各種應用功能產生不利影響的有害環境條件上(如:暴露于氧化劑、螯合劑、極端溫度和/或PH中)。然而，本領域中仍需要能夠抵抗這些不利條件并且保持或比本領域已知的那些活性具有改善的活性的酶系統。
發明概要
[0005]本發明提供枯草蛋白酶變體及包含至少一種本文所述的枯草蛋白酶變體的組合物，以及使用這些變體和組合物的方法。具體而言，本發明提供了適合于衣物清潔用途的蛋白酶變體。
[0006]本發明提供了包含至少一種修飾的枯草蛋白酶變體，其中所述至少一種修飾選自:G100C、S101D、S101H、Q103D、M124G、L126G、S132H、S161N、Q275Z 和 / 或選自下列的至少一組修飾:
[0007]A001T/L096V/G097S/A098D/D099I, A001V/G097S/A098R/D099G, V004M/A098D/D099G,
[0008]V004M/D099R/G100S/Z100.0IL, V004M/G127C/G128S/P129R, V004M/M119C/D120S,
[0009]V008I/A098G/D099R, V008I/A098N, V008I/M119C/D120G, Q010L/G097R/A098C/D099S,
[0010]K012N/A098R/D099V, K012R/G097D/A098H/D099G, A013T/S101R/Q103S,
[0011]A013V/G097N/A098H/D099G/G160S, A013V/G097S/Z097.01R/A098R, A013V/G100R/S101G,
[0012]A013V/N118G/M119I, A013V/P129Z/S130H/S132G, P014L/N062D/S101R/Q103S,
[0013]P014S/A098S/D099G, A015T/V068N/A069G, L016M/G128R/P129R/Z129.01G,
[0014]H017Q/G127R/P129G, H017Y/A098R/D099I，H017Y/A098R/D099Z/S101G, HO 17Y/P129R,
[0015]H017Y/S130Y/G131S/S132L, Q019H/G128R/Z128.01R/P129D, Q019H/Z128.0lG/Z128.02G,
[0016]G020D/G097R/A098G/D099C, G020D/P129Z/S130G/G131R/S132C, N025Y/S101L/Q103N,
[0017]A029V/G097R/A098S, S033I/T066G/H067R/V068D/A216E, S038F/A098R/D099S,
[0018]V044I/G097C/A098D/D099G, V044I/G097R/A098R, V044I/G100S/S101G,
[0019]A045V/G097C/A098R/D099S, A048V/G097L/A098G/D099S, A048V/G100R/S101G,
[0020]A048V/G128S/P129L/Z129.01G, M050I/A098G, S053F/S130I/S132G, S053T/D099H/S101Z,
[0021]E054D/A098R/D099G, T055I/S101R/Q103R, T055S/T066I/Z066.01G/Z066.02G,
[0022]Q059H/D099S/S101G, Q059H/M119S/D120R, Q059K/M119V/V121C, Q059L/P129G,
[0023]N061D/G128R/P129V/Z129.0lG, S063T/G097D/A098R/D099S, G065R/Z101.0lR/Z101.02G,
[0024]T066S/H067S, V068C/A069G, V068C/A069G/H238Q, V068G/A069G, V068G/A069G/V150I,
[0025]V068G/A069S, V068I/A069G/A144V, V068I/G097D/A098G/D099Z/G100R, V068L/A069G,
[0026]V068L/A069S, V068S/A069G, V068S/A069G/A116T, A069G/T071G, A069G/T071I,
[0027]L075G/N076G/N077Z, L075R/N076G/N077Z, N076D/D099R/Z100.01G, 1079F/A098G,
[0028]V081A/S101R/Q103V, V081I/G097R/A098G/D099C, V084D/G097S/A098G/D099N,
[0029]V084I/G127C/P129G, V084I/G127L, A085V/A098G,A085V/G097R/A098S/D099N,
[0030]A085V/G128S/P129R/Z129.0lG, A085V/N218I, A085V/S101G,A085V/S204P,
[0031]A085V/Z099.01H/S101R, P086S/G131D/S132G, P086T/S101D/Q103S/V147I,
[0032]A088S/S101R/Q103V, A088T/A098R/D099R, A088T/D099G/Z100.01G, A088T/G127N/P129R,
[0033]A088T/G127S/P129R/Q206R/A273S, A088T/P129S/G146D, A088T/S101G,
[0034]A088T/S130R/G131H/S132N, A088V/G100Z/S101C/Q103R, A088V/P129Z, A092G/S249R,
[0035]A092G/V093C, A092G/V093I, A092G/V093L, A092L/V093G/K094Z, A092S/K094V,
[0036]A092S/V093C, A092S/V093G, A092S/V093S, A092V/V093L, V093I/G128D/P129R,V093I/P129Z,
[0037]V093R/Z093.01G/K094R, K094E/V095D, K094S/V148I,L096I/N118R/M119C/D120G/A151V,
[0038]Z096.01D/A098R, Z096.01H/A098G, Z096.01N/A098H, Z096.01R/A098C, Z096.0IR/A098G,
[0039]Z096.01R/A098G/V192I, Z096.01R/A098R, Z096.01R/A098R/V192A, Z096.0lR/A098S,
[0040]Z096.01R/A098S/G157S, Z096.01R/Z096.02G, Z096.01R/Z096.02G/V147I,Z096.01S/A098G,
[0041]Z096.01S/A098N, G097C/A098D/D099S, G097C/A098G/D099G,G097C/A098G/D099N,
[0042]G097C/A098G/D099S, G097C/A098G/D099S/G100Z, G097C/A098G/D099V,
[0043]G097C/A098N/D099S, G097C/A098R, G097C/A098R/D099G, G097C/A098R/D099H,
【權利要求】
1.一種枯草蛋白酶變體，包括至少一個修飾，其中所述修飾選自:G100C、S101D、S101H、Q103D、M124G、L126G、S132H、S161N、Q275Z 和 / 或選自下列中的至少一組修飾:A001T/L096V/G097S/A098D/D099I, A001V/G097S/A098R/D099G,
V004M/A098D/D099G,V004M/D099R/G100S/Z100.0IL, V004M/G127C/G128S/P129R,V004M/M119C/D120S, V008I/A098G/D099R, V008I/A098N, V008I/M119C/D120G,Q010L/G097R/A098C/D099S, K012N/A098R/D099V, K012R/G097D/A098H/D099G,A013T/S101R/Q103S, A013V/G097N/A098H/D099G/G160S, A013V/G097S/Z097.0lR/A098R,
A013V/G100R/S101G, A013V/N118G/M119I, A013V/P129Z/S130H/S132G,
P014L/N062D/S101R/Q103S, P014S/A098S/D099G, A015T/V068N/A069G,
L016M/G128R/P129R/Z129.01G, H017Q/G127R/P129G, H017Y/A098R/D099I,
H017Y/A098R/D099Z/S101G, H017Y/P129R, H017Y/S130Y/G131S/S132L,
Q019H/G128R/Z128.01R/P129D, Q019H/Z128.01G/Z128.02G, G020D/G097R/A098G/
D099C,
G020D/P129Z/S130G/G131R/S132C, N025Y/S101L/Q103N,A029V/G097R/A098S,S033I/T066G/H067R/V068D/A216E, S038F/A098R/D099S, V044I/G097C/A098D/D099G,V044I/G097R/A098R, V044I/G100S/S101G, A045V/G097C/A098R/D099S,A048V/G097L/A098G/D099S, A048V/G100R/S101G, A048V/G128S/P129L/Z129.01G,M050I/A098G,
S053F/S130I/S132G, S053T/D099H/S101Z, E054D/A098R/D099G, T055I/S101R/Q103R,
T055S/T066I/Z066.01G/Z066.02G, Q059H/D099S/S101G, Q059H/M119S/D120R,
Q059K/M119V/V121C, Q059L/P129G, N061D/G128R/P129V/Z129.01G,
S063T/G097D/A098R/D099S, G065R/Z101.01R/Z101.02G, T066S/H067S, V068C/A069G,
V068C/A069G/H238Q, V068G/A069G, V068G/A069G/V150I, V068G/A069S, V068I/A069G/
A144V,
V068I/G097D/A098G/D099Z/G100R, V068L/A069G, V068L/A069S, V068S/A069G,V068S/A069G/A116T, A069G/T071G, A069G/T071I, L075G/N076G/N077Z, L075R/N076G/N077Z,
N076D/D099R/Z100.01G, 1079F/A098G, V081A/S101R/Q103V, V0811/G097R/A098G/D099C,
V084D/G097S/A098G/D099N, V084I/G127C/P129G, V084I/G127L, A085V/A098G,A085V/G097R/A098S/D099N, A085V/G128S/P129R/Z129.01G, A085V/N218I, A085V/S101G,
A085V/S204P, A085V/Z099.01H/S101R, P086S/G131D/S132G, P086T/S101D/Q103S/V147I,
A088S/S101R/Q103V, A088T/A098R/D099R, A088T/D099G/Z100.01G, A088T/G127N/P129R,
A088T/G127S/P129R/Q206R/A273S, A088T/P129S/G146D, A088T/S101G,
A088T/S130R/G131H/S132N, A088V/G100Z/S101C/Q103R, A088V/P129Z, A092G/S249R,



G097A/G100S/G128A/Y217Q/K237N, G097A/Z099.01S/G128S/P129D/Y217Q,
G097A/G100S/G128S/P129D/Y217Q, Z096.01D/G097A/A098R/G128A/Y217Q,
G097A/Z099.01S/I122S/N123G/G128A/Y217Q,
G097A/Z099.01S/I122S/N123G/G128A/Y217Q/T220A/A232T,
P005S/G097A/Z099.01S/S101D/G128A/Y217Q, G097A/S101D/G128A/P129V/Y217Q,V093Z/K094S/V095C/L096S/G097A/G128A/Y217Q, G097A/G100S/S101D/G128A/Y217Q/A232P, Z096.01D/G097A/A098R/S101D/G128A/Y217Q,和 G097A/Z099.01S/G100S/G128A/Y217Q，其中所述位置對應于BPN’的枯草蛋白酶SEQ ID NO:2的位置。
2.權利要求書2缺失
3.一種枯草蛋白酶變體，包括至少兩個修飾，其中所述修飾選自:
G097A/G128S/Z128.01A/P129L/Y217Q, G097A/G128Y/Z128.01A/P129S/Y217Q,G097A/G128S/Z128.01A/P129M/R186H/Y217Q, G097A/G128E/Z128.01A/P129D/Y217Q,G097A/G128T/P129L/Y217Q, G097A/G128F/P129D/Y217Q, G097A/G128V/Z128.0lA/P129R/Y217Q,
G097A/G128L/Z128.01A/P129S/Y217Q, G097A/G128Y/P129T/Y217Q, G097A/G128C/P129Y/Y217Q, G097A/G128C/P129T/Y217Q，其中所述位置對應于BPN’枯草蛋白酶SEQ ID NO:2的位置。
4.一種枯草蛋白酶變體，包括至少兩個修飾，其中所述修飾選自: G097A/G128A/Y217Q/M222Q, Ml24V/L126A/P129V/Y217Q, G128A/P129V/Y217Q G097A/G128A/P129V/Y217Q，NI23G/P129V/Y217Q，
V30I/Z096.01D/G097A/A098R/G128A/Y217Q, Z096.01D/A098R/G128A/Y217Q,
Z096.01D/A098R/M124V/L126A/Y217Q, G097A/Z098.01S/G128A/Y217Q,
Z096.01D/A098R/N123G/Y217Q, Z096.01D/G097A/A098R/G128A/Y217Q/S236F,
Z098.01S/M124V/L126A/Y217Q, Z098.01S/G128A/Y217Q,
Z096.01D/G097A/A098R/G128A/Y217Q, V093I/Z098.01S/M124V/L126A/Y217Q,
A073V/Z098.01S/N123G/Y217Q, G065D/Z098.01S/G128A/Y217Q,
.1011L/Z098.01S/G128A/Y217Q, L082F/Z096.01D/A098R/N123G/Y217Q, Z098.01S/N123G/A138V/Y217Q, Z098.01S/N123G/Y217Q，其中所述位置對應于 BPN’ 枯草蛋白酶SEQ ID NO: 2的位置。
5.一種枯草蛋白酶變體，包括取代Y217L，而且進一步包括權利要求1-4任一項中定義的至少一個修飾，其中所述位置對應于BPN’枯草蛋白酶SEQ ID NO:2的位置。
6.一種枯草蛋白酶變體，包括取代G97A/G128A/Y217Q，而且進一步包括權利要求1_4任一項中定義的至少一個修飾，其中所述位置對應于BPN’枯草蛋白酶SEQ ID N0:2的位置。
7.一種清潔組合物，包括至少一種如權利要求1-6中任一項所述的枯草蛋白酶變體。
8.如權利要求7所述的清潔組合物，其中所述清潔組合物為衣物洗滌劑。
9.如權利要求8所述的衣物洗滌劑，其中所述衣物洗滌劑是強效液體衣物洗滌劑。
10.如權利要求7所述的清潔組合物，其中所述清潔組合物為餐具洗滌劑。
11.如權利要求7-10中任一項所述的清潔組合物，進一步包括一種或多種其它酶或酶衍生物，所述酶或酶衍生物選自下組中:半纖維素酶、過氧化物酶、蛋白酶、纖維素酶、木聚糖酶、脂肪酶、磷脂酶、酯酶、角質酶、果膠酶、角蛋白酶、還原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂加氧酶、木質素酶、支鏈淀粉酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、甘露聚糖酶、β -葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、透明質酸酶、軟骨素酶、漆酶和淀粉酶，或它們的混合物。
12.如權利要求7-11中任一項所述的清潔組合物，進一步包括至少一種穩定劑。
13.一種清潔組合物，包括至少0.0001重量百分比的至少一種如權利要求1-7中任一項所述的枯草蛋白酶變體，和可選的至少一種適宜的添加劑成分。
14.一種清潔的方法，所述方法包括步驟: a)將包括織物的表面和/或物品與如權利要求7-13中任一項所述的清潔組合物相接觸；和 b)可選地洗滌和/或漂洗所述表面或物品。
15.一種動物飼料，包括至少一種如權利要求1-7中任一項所述的枯草蛋白酶變體。
16.一種 食物加工組合物，包括至少一種如權利要求1-7中任一項所述的枯草蛋白酶變體。
【文檔編號】C12N9/56GK104130993SQ201410363913
【公開日】2014年11月5日 申請日期:2009年6月3日 優先權日:2008年6月6日
【發明者】V·Y·阿列克謝耶夫, L·G·卡斯康-佩雷拉, A·比薩奇科, J·T·小凱利斯 申請人:丹尼斯科美國公司