沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌復合增菌培養基及其制備方法
【專利摘要】本發明公開了沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌復合增菌培養基及其制備方法，該培養基的質量組分包括：胰蛋白胨5-15份，酵母提取物2.5-7.5份，氯化鈉5-15份，葡萄糖1-3份，磷酸氫二鈉1.5-3份，甘露醇1-3份，丙酮酸鈉1-3份，甘氨酸1-3份，蒸餾水1000份，pH值為7.2-7.5。將各組分加至蒸餾水中，攪拌溶解，高壓滅菌。沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌是我國食品衛生標準中需檢測的主要致病菌。使用本發明中的復合增菌培養基，能夠實現上述三種菌的等速、快速增殖。增菌16小時，即可直接用于多重PCR、基因芯片、微流控芯片等高通量檢測，實現上述三種病原菌的篩查。
【專利說明】沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌復合增菌培養基及 其制備方法

【技術領域】
[0001] 本發明屬于致病菌的前增菌培養基，特別是涉及到一種同時對沙門氏菌、志賀氏 菌和金黃色葡萄球菌復合增菌的培養基及其制備方法。

【背景技術】
[0002] 細菌性微生物是我國食源性疾病發生的主要病因，嚴重危及人們的健康，造成重 大經濟損失，成為目前較為突出的公共衛生問題之一。沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球 菌是食源性疾病的主要致病菌，也是目前我國食品安全風險監測的重要指標。中國食源性 疾病統計報告顯示，超過30%的相關案例都與這3種細菌有關，沙門氏菌更是高居首位。食 品安全問題日益被人們所重視的今天，這3種致病菌同時檢測方法的建立迫在眉睫。
[0003] 目前國際上檢測食源性致病菌的方法主要是依賴于基因的檢測方法。PCR技術發 展迅速，熒光定量PCR已經成熟，同時檢測多種細菌的多重熒光定量PCR得到廣泛應用。環 介導等溫擴增（LAMP)是一種新型的核酸擴增方法，LAMP技術和PCR擴增技術相比，其多 個引物的設計能帶來更高的特異性，即使高背景的微生物材料仍可準確檢測，且其反應快， 實驗操作簡單，可實現現場高通量的快速檢測。然而食品基質復雜，目標菌體濃度低，達到 目前技術檢測的需求，實現較高的靈敏度仍需要一個前增菌步驟。當前前增菌培養基有很 多種，但大多成分復雜，配制繁瑣，所以研制出一種成分簡單，配制方便的培養基成為當前 必要。


【發明內容】

[0004] 本發明的目的在于提供一種可同時培養沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌復 合增菌的培養基，適用于多重PCR、基因芯片、微流控芯片等高通量檢測，用于沙門氏菌、志 賀氏菌和金黃色葡萄球菌三種病原菌的篩查。
[0005] 本發明的目的通過如下技術方案實現： 一種沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌復合增菌培養基，以質量份數計，其配方組 成為：胰蛋白胨5-15份，酵母提取物2. 5-7. 5份，氯化鈉5-15份，葡萄糖1-3份，磷酸氫二 鈉1. 5-3. 5份，甘露醇1-3份，丙酮酸鈉1-3份，甘氨酸1-3份，蒸饋水1000份。pH值為 7. 2-7. 5。
[0006] 本發明的優選配方為，以質量份數計：胰蛋白胨10份，酵母提取物5份，氯化鈉 10 份，葡萄糖2份，磷酸氫二鈉 2. 5份，甘露醇2份，丙酮酸鈉 2份，甘氨酸2份，蒸餾水1000 份。pH值為7. 4。
[0007] 本發明的又一個目的是提供了沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌復合增菌培 養基的制備方法，它是有以下步驟制成： (1)按照比例將胰蛋白胨，酵母提取物，氯化鈉，葡萄糖，磷酸氫二鈉，甘露醇，丙酮酸 鈉，甘氨酸加至蒸餾水中，攪拌溶解； (2) 用10 mol/L的NaOH進行酸度矯正pH值至7· 2-7. 5 ; (3) 121°C高壓滅菌 15-20min，4°C保存。
[0008] 本發明通過選擇合適的組分，進行合理混配，經攪拌溶解、高壓滅菌等步驟而獲得 一種沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌復合增菌的培養基。本發明培養基中胰蛋白胨， 酵母提取物，氯化鈉作為基礎組分，為細菌提供生長必需的碳源、氮源、無機鹽和生長因子。 磷酸氫二鈉是緩沖劑。葡萄糖、甘氨酸促進細菌生長。甘露醇促進金黃色葡萄球菌的生長。 丙酮酸鈉用于修復損傷的細菌。
[0009] 相對于現有技術，本發明具有以下優點： 本發明的沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌復合增菌培養基成分簡單，配制方便， 各組分無需分步添加。
[0010] 本發明按照配方組分及制備方法制備的復合增菌培養基能夠使沙門氏菌、志賀氏 菌和金黃色葡萄球菌三種細菌在復合培養過程中實現等速、快速的增殖。
[0011] 本發明增菌16小時，即可滿足直接用于多重PCR、基因芯片、微流控芯片等高通量 檢測的需求，用于沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌三種病原菌的篩查。

【具體實施方式】
[0012] 實施例1 稱取胰蛋白胨5g，酵母提取物7. 5g，氯化鈉 15g，葡萄糖3g，磷酸氫二鈉 1. 5g，甘露醇 3g，丙酮酸鈉 lg，甘氨酸lg，蒸饋水1000ml,攪拌溶解后，用10 mol/L的NaOH進行酸度矯 正pH值至7.2，121°C高壓滅菌15min，4°C保存。
[0013] 將菌體濃度均為1〇9 CFU/mL的沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌培養液分別 稀釋1〇7倍，然后分別取100 μ?，接入10 mL制備好的用于沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡 萄球菌復合增菌的培養基中，使培養基中各菌體濃度為1 CFU/mL，37°C培養16h，取增菌培 養后的增菌液100 ML,適當稀釋后涂布到XLD瓊脂和Baird-parker平板，進行分離培養。 根據沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌在平板上的特征菌落進行計數。結果見表1. 表1復合增菌培養基增菌效果

【權利要求】
1. 用于沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌復合增菌的培養基，其特征在于，以質量 份數計，其配方組成為：胰蛋白胨5-15份，酵母提取物2. 5-7. 5份，氯化鈉5-15份，葡萄糖 1-3份，磷酸氫二鈉1. 5-3份，甘露醇1-3份，丙酮酸鈉1-3份，甘氨酸1-3份，蒸餾水1000 份；pH 值為 7. 2-7. 5。
2. 根據權利要求1所述用于沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌復合增菌的培養 基，其特征在于：以質量份數計，其配方為胰蛋白胨10份，酵母提取物5份，氯化鈉10份，葡 萄糖2份，磷酸氫二鈉2. 5份，甘露醇2份，丙酮酸鈉2份，甘氨酸2份，蒸餾水1000份；pH 值為7.4。
3. 根據權利要求1、2所述用于沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌復合增菌的培養 基的制備方法，其特征在于包括以下步驟： (1) 按照比例將胰蛋白胨，酵母提取物，氯化鈉，葡萄糖，磷酸氫二鈉，甘露醇，丙酮酸 鈉，甘氨酸加至蒸餾水中，攪拌溶解； (2) 用10 mol/L的NaOH進行酸度矯正pH值至7. 2-7. 5 ; (3) 121°C高壓滅菌 15-20min，4°C保存。
【文檔編號】C12R1/01GK104195081SQ201410426477
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年8月27日 優先權日:2014年8月27日
【發明者】張巖, 劉銘, 李云, 葛少林, 邢婉麗 申請人:博奧生物集團有限公司, 清華大學, 廣東粵檢生物科技有限公司