本發(fā)明屬于食品領(lǐng)域，涉及一種酵素，具體來說是一種玫瑰安神酵素的制備方法。

背景技術(shù)：

玫瑰屬于一種集觀賞、醫(yī)藥、食品和日用化工等價值于一身的薔薇科植物資源。中國傳統(tǒng)的玫瑰代表是平陰玫瑰，具有理氣活血，花大瓣厚，香味濃郁的特點。大馬士革玫瑰是保加利亞種植的主要的玫瑰品種，也是世界公認(rèn)的優(yōu)質(zhì)玫瑰品種，其富含多種維生素、葡萄糖、果糖、檸檬酸、蘋果酸、三萜類化合物等數(shù)百種有益于人體健康的物質(zhì)。《本草綱目》評述其有舒肝解郁，通經(jīng)活絡(luò)，美容養(yǎng)顏的功效。其含有的活性成分單萜類化合物、黃銅和多酚類化合物以及花青素和多糖，除具有美白養(yǎng)顏延緩衰老的功效，對于清除體內(nèi)自由基，行氣解郁，消炎止痛也有顯著效果。

“酵素”是一種具有一定保健功能，包含了酶及其產(chǎn)酶微生物和發(fā)酵生成的生理活性物質(zhì)所構(gòu)成的微生態(tài)整體，其作為一種功能性產(chǎn)品在全球大規(guī)模興起。發(fā)酵是“酵素”制造的一個重要環(huán)節(jié)，通過發(fā)酵原料組織受到微生物酶的作用而崩解，原料細(xì)胞中的功能性成分得以充分釋放并發(fā)生小分子化而變得容易為人體吸收。

隨著社會現(xiàn)代化的程度加快，人們的生活壓力也越來越大，免疫功能下降、內(nèi)分泌失調(diào)是健康問題中一種普遍存在的現(xiàn)象。據(jù)中國衛(wèi)生部統(tǒng)計失眠抑郁的病癥已占中國疾病負(fù)擔(dān)的第二位，嚴(yán)重困擾著人們正常工作、學(xué)習(xí)和生活。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

針對現(xiàn)有技術(shù)中的上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種可食用的玫瑰安神酵素的制備方法，所述制備方法通過對全身的酶系調(diào)理，使得中藥成分的藥效更加得以顯現(xiàn)，輔助解決安神效果，符合現(xiàn)代人們的健康理念。

本發(fā)明提供了一種玫瑰安神酵素的制備方法，包括如下步驟：

1)將玫瑰花瓣進(jìn)行清洗，用均質(zhì)機(jī)均質(zhì)，或烘干粉碎成粉末狀；

2)按照質(zhì)量比稱取五味子、酸棗仁、合歡花、花生藤、柏子仁、遠(yuǎn)志。所述的五味子、酸棗仁、合歡花、花生藤、柏子仁和遠(yuǎn)志的質(zhì)量比為1:1:0.5-1:0-1:0-1:0-1，將五味子、酸棗仁、合歡花、花生藤、柏子仁、遠(yuǎn)志膠體按比例混合后研磨成粉；

3)將步驟1）中的玫瑰花瓣勻漿液或干燥粉末和水混合后加入到一個平底發(fā)酵罐中，再加入第一批次的蜂蜜、第一批次的糖、第一批次的抗壞血酸、滅菌，加入第一批次的發(fā)酵菌劑發(fā)酵1-3個月；所述的玫瑰勻漿液或玫瑰粉的質(zhì)量為發(fā)酵體系質(zhì)量的10wt%-30wt%，所述的第一批次的蜂蜜的質(zhì)量為發(fā)酵體系質(zhì)量的2wt%-20wt%，所述的第一批次的糖的質(zhì)量為發(fā)酵體系質(zhì)量的2wt%-20wt%，所述的第一批次的抗壞血酸的質(zhì)量為發(fā)酵體系質(zhì)量的0.0005wt%-0.002wt%，所述的第一批次的發(fā)酵菌劑為米曲霉、紅茶菌、或者釀酒酵母等益生菌的任意一種或者兩種以上的混合，所述的第一批次的發(fā)酵菌劑質(zhì)量為發(fā)酵體系質(zhì)量的2wt%-10wt%，余量為水；

4)將步驟2）中的五味子、酸棗仁、合歡花、花生藤、柏子仁、遠(yuǎn)志膠體和水混合后加入到另外一個平底發(fā)酵罐中，再加入第二批次的蜂蜜、第二批次的糖、第二批次的抗壞血酸、滅菌，加入第二批次的發(fā)酵菌劑發(fā)酵1-3個月；所述的五味子、酸棗仁、合歡花、花生藤、柏子仁、遠(yuǎn)志膠體中質(zhì)量之和為發(fā)酵體系質(zhì)量的3wt%-10wt%，所述的第二批次的蜂蜜的質(zhì)量為發(fā)酵體系質(zhì)量的2wt%-20wt%，所述的第二批次的糖的質(zhì)量為發(fā)酵體系質(zhì)量的2wt%-20wt%，所述的第二批次的抗壞血酸的質(zhì)量為發(fā)酵體系質(zhì)量的0.0005wt%-0.002wt%，所述的第二批次的發(fā)酵菌劑為米曲霉、紅茶菌、或者釀酒酵母等益生菌的任意一種或者兩種以上的混合，所述的第二批次的發(fā)酵菌劑質(zhì)量為發(fā)酵體系質(zhì)量的2wt%-10wt%，余量為水；

5)將步驟3）和4）所得發(fā)酵液按照質(zhì)量比1-30：1混合，再加入第三批次的蜂蜜、第三批次的糖、第三批次的抗壞血酸、滅菌，加入第三批次的發(fā)酵菌劑進(jìn)行二次發(fā)酵1-3個月，所述的第三批次的蜂蜜的質(zhì)量為發(fā)酵體系質(zhì)量的2wt%-20wt%，所述的第三批次的糖的質(zhì)量為發(fā)酵體系質(zhì)量的2wt%-20wt%，所述的第三批次的抗壞血酸的質(zhì)量為發(fā)酵體系質(zhì)量的0.0005wt%-0.002wt%，所述的第三批次的發(fā)酵菌劑為紅茶菌、釀酒酵母、木醋桿菌、乳酸菌、或者植物乳桿菌中的任意一種，所述的第三批次的發(fā)酵菌劑質(zhì)量為發(fā)酵體系質(zhì)量的2wt%-10wt%，余量為水；

6)將步驟5）中所得發(fā)酵液，加入不同發(fā)酵周期的酵素液、食用添加劑、或者紅糖或木糖醇進(jìn)行調(diào)配，得到玫瑰安神酵素。

進(jìn)一步的，所述的玫瑰花為大馬士革玫瑰、平陰玫瑰、或二者雜交品種。

進(jìn)一步的，所述的玫瑰花粉的粒徑為20-200目。

進(jìn)一步的，所述的中藥成分研磨成粉的粒徑是20-200目。

進(jìn)一步的，所述的蜂蜜為天然蜂蜜。

進(jìn)一步的，所述的糖為紅糖、果糖、麥芽糖、白糖中的任意一種或者兩種以上的混合。

進(jìn)一步的，滅菌條件為105℃滅菌5min或者紫外線滅菌。

進(jìn)一步的，所述步驟3）、4）、5）中的發(fā)酵溫度為20-30℃。

進(jìn)一步的，所述的不同發(fā)酵周期的酵素液包括發(fā)酵了1-2個月的初期酵素和發(fā)酵了3-4個月的中期酵素按風(fēng)味要比例調(diào)配，初期酵素和中期酵素的加入量為發(fā)酵體系質(zhì)量的5wt%-80wt%。

進(jìn)一步的，所述的食品添加劑為黃原膠、明膠、魔芋膠中的任意一種和山梨糖醇按不同比例搭配，所述的食品的添加劑加入量為發(fā)酵體系質(zhì)量的0.5wt%-5wt%。

進(jìn)一步的，所述的紅糖或木糖醇的加入量為發(fā)酵體系質(zhì)量的5wt%-50wt%。

五味子、酸棗仁、合歡花、花生藤、柏子仁、遠(yuǎn)志中含有的木脂素和黃酮類活性物質(zhì)有解郁安神，生津補(bǔ)肝，鎮(zhèn)靜催眠，抗菌消炎、緩解失眠健忘、神經(jīng)衰弱等癥狀。在本發(fā)明中，利用米曲霉、紅茶菌、酵母、乳酸菌、醋酸菌和植物乳桿菌等益生菌，以蜂蜜、紅糖、白糖等為輔料，以大馬士革、平陰玫瑰及其雜交玫瑰為主料，配以一定比例的藥食同源中藥材五味子、酸棗仁、合歡花、花生藤、柏子仁、遠(yuǎn)志，使其與玫瑰花瓣中的有益成分相配合，效果更加相得益彰，經(jīng)過1-6個月的發(fā)酵生成酵素半固狀飲品。

本發(fā)明的制備方法包括玫瑰花瓣無菌處理、細(xì)化、護(hù)色、中藥成分五味子、酸棗仁、合歡花、花生藤、柏子仁、遠(yuǎn)志研磨，二次發(fā)酵、調(diào)和。在制備的過程中嚴(yán)格控制糖度、酸度和發(fā)酵溫度，以降低其它雜菌的染菌幾率和最大限度地保留酵素活性。所用的發(fā)酵菌劑選擇了米曲霉，釀酒酵母、紅茶菌等益生菌，過程采用二步發(fā)酵有利于提升酵素功能的綜合活性，發(fā)酵時間為1-6個月。后期做進(jìn)一步調(diào)配有利于保持產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定和增加口感的舒適度。

本發(fā)明和已有技術(shù)相比，其技術(shù)進(jìn)步是顯著的。本發(fā)明提供了一種制備以可食用玫瑰、藥食同源中藥成分五味子、酸棗仁、合歡花、花生藤、柏子仁、遠(yuǎn)志等為原料，以蜂蜜、果糖和微量元素礦物質(zhì)作為輔料，應(yīng)用傳統(tǒng)微生物米曲霉、酵母菌、乳酸菌、紅茶菌和植物乳桿菌等，經(jīng)二次發(fā)酵制成具有安神解郁作用的玫瑰酵素的方法。本發(fā)明制備得到的玫瑰安神酵素具有抗氧化、抗衰老、調(diào)理腸道功能、從整體上對身體進(jìn)行功能調(diào)節(jié)，使其中的功能性物質(zhì)有效溶出，使發(fā)酵液體系中的含量得到大幅度提高，對安神治療失眠等癥狀有著非常重要的作用。

附圖說明

圖1是實施例1-4的實施例方法獲得的酵素的dpph清除自由基能力。

圖2是實施例1-4的實施例方法獲得的酵素的黃酮濃度。

圖3是實施例1-4的實施例方法獲得的酵素的木脂素濃度。

圖4是實施例1-4的實施例方法獲得的酵素的有機(jī)酸濃度。

圖5是實施例1-4的實施例方法獲得的酵素的總酚濃度。

具體實施方式

實施例1

將采摘開放且新鮮的大馬士革平陰雜交玫瑰花的花瓣與花蕊分離，并用打漿機(jī)進(jìn)行粉碎或烘干粉碎，得到20目左右的玫瑰花花瓣或粉末。加入發(fā)酵體系質(zhì)量的10wt%玫瑰花粉末，8wt%蜂蜜、2wt%紅糖，0.01wt%抗壞血酸（vc），余量為水，制成發(fā)酵培養(yǎng)基，105℃滅菌5min，再加入發(fā)酵體系質(zhì)量的2wt%的米曲霉發(fā)酵1個月；

將發(fā)酵體系質(zhì)量的3wt%的五味子、酸棗仁、合歡花、花生藤、柏子仁、遠(yuǎn)志，中藥按1:1:0.5：0:0.1:0.1的配比，余量為水，制成發(fā)酵培養(yǎng)基，105℃滅菌5min，再加入發(fā)酵體系質(zhì)量的2wt%的米曲霉發(fā)酵1個月；

在上述的一次發(fā)酵所得發(fā)酵液按照質(zhì)量比1：1混合；

接入發(fā)酵體系質(zhì)量的10wt%的紅茶菌進(jìn)行二次發(fā)酵3個月；

待二次發(fā)酵液取出后，將混合后的發(fā)酵1個月的發(fā)酵液與發(fā)酵3個月的二次發(fā)酵液進(jìn)行調(diào)配；并用山梨糖醇、果膠、紅糖進(jìn)行復(fù)配。

混合后的發(fā)酵1個月的發(fā)酵液、發(fā)酵3個月的二次發(fā)酵液、山梨糖醇、果膠、紅糖的質(zhì)量比為30wt%：60wt%：2wt%：2wt%：6wt%。

實施例2

將采摘開放且新鮮的大馬士革平陰雜交玫瑰花的花瓣與花蕊分離，并用打漿機(jī)進(jìn)行粉碎或烘干粉碎，得到20目左右的玫瑰花花瓣或粉末。加入發(fā)酵體系質(zhì)量的20wt%玫瑰花粉末，8wt%蜂蜜、2wt%果糖、0.01wt%抗壞血酸（vc），余量為水，制成發(fā)酵培養(yǎng)基，105℃滅菌5min，再加入發(fā)酵體系質(zhì)量的2wt%米曲霉發(fā)酵1個月；

將發(fā)酵體系質(zhì)量3wt%的五味子、酸棗仁、合歡花、花生藤、柏子仁、遠(yuǎn)志，中藥按1:1:0.5：0.1:0:0.1的配比，余量為水，制成發(fā)酵培養(yǎng)基，105℃滅菌5min，再加入發(fā)酵體系質(zhì)量的2wt%米曲霉發(fā)酵1個月；

在上述的一次發(fā)酵所得發(fā)酵液混按照質(zhì)量比1：1混合；

接入發(fā)酵體系質(zhì)量的20wt%紅茶菌進(jìn)行二次發(fā)酵3個月；

待二次發(fā)酵液取出后，將混合后的發(fā)酵1個月的發(fā)酵液與發(fā)酵3個月的二次發(fā)酵液進(jìn)行調(diào)配；并用山梨糖醇、黃原膠、紅糖進(jìn)行復(fù)配。

混合后的發(fā)酵1個月的發(fā)酵液、發(fā)酵3個月的二次發(fā)酵液、山梨糖醇、黃原膠、紅糖的質(zhì)量比為30wt%：60wt%：2wt%：2wt%：6wt%。

實施例3

將采摘開放且新鮮的大馬士革平陰雜交玫瑰花的花瓣與花蕊分離，并用打漿機(jī)進(jìn)行粉碎或烘干粉碎，得到20目左右的玫瑰花花瓣或粉末。加入發(fā)酵體系質(zhì)量的20wt%玫瑰花粉末，8wt%蜂蜜、2wt%果糖、0.01wt%抗壞血酸（vc），余量為水，制成發(fā)酵培養(yǎng)基，105℃滅菌5min，再加入發(fā)酵體系質(zhì)量的2wt%米曲霉和釀酒酵母發(fā)酵1個月；

將發(fā)酵體系質(zhì)量的3wt%五味子、酸棗仁、合歡花、花生藤、柏子仁、遠(yuǎn)志，中藥按1:1:0.5：0:0:0的配比，余量為水，制成發(fā)酵培養(yǎng)基，105℃滅菌5min，再加入發(fā)酵體系質(zhì)量的2wt%米曲霉和釀酒酵母發(fā)酵1個月；

在上述的一次發(fā)酵所得發(fā)酵液按照質(zhì)量比1：1混合；

接入發(fā)酵體系質(zhì)量的20wt%紅茶菌進(jìn)行二次發(fā)酵3個月；

待二次發(fā)酵液取出后，將混合后的發(fā)酵1個月的發(fā)酵液與發(fā)酵3個月的二次發(fā)酵液進(jìn)行調(diào)配；并用山梨糖醇、魔芋膠、木糖醇進(jìn)行復(fù)配。

混合后的發(fā)酵1個月的發(fā)酵液、發(fā)酵3個月的二次發(fā)酵液、山梨糖醇、魔芋膠、木糖醇的質(zhì)量比為20wt%：60wt%：2wt%：3wt%：15wt%。

實施例4

將采摘開放且新鮮的大馬士革平陰雜交玫瑰花的花瓣與花蕊分離，并用打漿機(jī)進(jìn)行粉碎或烘干粉碎，得到20目左右的玫瑰花花瓣或粉末。加入發(fā)酵體系質(zhì)量的20wt%玫瑰花粉末，8wt%蜂蜜、2wt%果糖、0.01wt%抗壞血酸（vc），余量為水，制成發(fā)酵培養(yǎng)基，105℃滅菌5min，加入發(fā)酵體系質(zhì)量的2wt%米曲霉和釀酒酵母發(fā)酵1個月。

將發(fā)酵體系質(zhì)量的3wt%的五味子、酸棗仁、合歡花、花生藤、柏子仁、遠(yuǎn)志，中藥按1:1:0.5：0.1:0.1:0.1的配比，余量為水，制成發(fā)酵培養(yǎng)基，105℃滅菌5min，再加入發(fā)酵體系質(zhì)量的2wt%米曲霉和釀酒酵母發(fā)酵1個月。

將上述的一次發(fā)酵所得發(fā)酵液按照質(zhì)量比1：1混合；

接入發(fā)酵體系質(zhì)量的20wt%紅茶菌進(jìn)行二次發(fā)酵3個月；

待二次發(fā)酵液取出后，將混合后的發(fā)酵1個月的發(fā)酵液與發(fā)酵3個月的二次發(fā)酵液進(jìn)行調(diào)配；并用山梨糖醇，黃原膠，紅糖，木糖醇進(jìn)行復(fù)配；

混合后的發(fā)酵1個月的發(fā)酵液、發(fā)酵3個月的二次發(fā)酵液、山梨糖醇、黃原膠、紅糖、木糖醇的質(zhì)量比為20%：60%：2wt%：3wt%：5wt%：10wt%。

本發(fā)明的酵素中的木脂素和黃酮類化合物是起安神作用的主要有效成分，其含量的多少代表了安神效果的強(qiáng)弱，同時酵素中含有的有機(jī)酸和酚類化合物具有抗氧化、清除自由基的功效，以上各實施例中的具體數(shù)據(jù)圖1-5所示。

檢測方法如下：

1、dpph清除自由基能力

1）將3ul,6ul,9ul,12ul,15ul樣品分別加去離子水至2ml；

2）再加入4ml0.1mmol/ldpph-甲醇溶液；

3）再加入450ul50mmol/ltris-hclbuffer(7.4)25℃下恒溫水浴30min；

4）以去離子水為參比溶液，以vc為對照，在517nm下測吸光度。

dpph自由基清除能力（%）=【(a0-(a1-a2))/a0】*100

a0為空白対照液吸光度；a1樣品測定管吸光度；a2樣品本底管吸光度

2、黃酮濃度

1）標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：精密稱取蘆丁對照品10.03mg,加60%甲醇適量,置水浴中加熱溶解,放冷,以60%甲醇定容于100ml容量瓶中,搖勻備用,配成蘆丁含量為0.103mg/ml的工作液,備用。

2）最佳檢測波長選擇：取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液于400～600nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描,確定黃酮的最大吸收波長。

3）標(biāo)準(zhǔn)曲線建立：取蘆丁標(biāo)液0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0ml分別加入25ml容量瓶,加入1ml5%nano3,靜置5min,加入1ml10%al（no3)3靜置6min，加入4ml10%naoh靜置6min，分別用10%naoh定容。于溫水浴中加熱10min取出,用1cm玻璃比色皿在蘆丁最大吸收波長處測定吸光度a,同時以未加標(biāo)準(zhǔn)蘆丁的溶液作空白參比。以吸光度對蘆丁濃度作圖。

4）樣品測定：將3）中蘆丁標(biāo)液換為5ml樣液其余試劑相同。于溫水浴中加熱10min,取出,同時作試劑空白,以試劑空白為對照,于蘆丁最大吸光值處測定吸光度a,查標(biāo)準(zhǔn)曲線,即得所取樣液中黃酮含量。

3、木脂素濃度

1）對照品溶液制備：精密稱取五味子酯甲對照品5mg加甲醇溶于10ml容量瓶中，得濃度0.5mg·ml-1的對照品溶液。

2）標(biāo)準(zhǔn)曲線制：精確吸取20，40，60，80，100μl對照品溶液置具塞試管中。另取一試管加甲醇10μl作空白，待溶劑揮發(fā)完后，依次加入10％變色酸水溶液0.5ml，濃硫酸3ml，蒸餾水1.5ml，在沸水浴中放置30min，取出用流水冷卻，于570nm處測吸光度，測定3次。橫坐標(biāo)為五味子酯甲濃度縱坐標(biāo)為吸光度做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程。總木脂素含量按五味子酯甲計算。

3）樣品中總木脂素含量的測定：分別精密吸取供試品溶液10μl置具塞試管內(nèi)，按總木脂素標(biāo)準(zhǔn)曲線項下操作測定吸光度，測定3次。由回歸方程計算含量計算木脂素含量。

4、有機(jī)酸濃度

1）稱取25g待測樣液置于100ml燒杯中，用約80℃煮沸過的水將燒杯中的內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到250ml容量瓶，置于沸水浴中煮沸30min(搖動2到3次使待測樣中有機(jī)酸全部溶于溶液)，取出，冷卻至室溫，用煮沸過的水定容到250ml。用濾紙過濾，收集濾液進(jìn)行測定。

2）稱取15g待測樣液置于250ml三角瓶，加50ml水及0.2ml1%酚酞指示劑，用0.1mol/l氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定至微紅色30s不褪色，記錄消耗0.1mol/l氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積數(shù)值(v1)。同一被測樣品滴定2次。

3）空白樣液，用水代替待測樣液，按2）步驟，記錄消耗0.1mol/l氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積數(shù)值（v2）

4）結(jié)果計算

總酸含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)x計，數(shù)值以（g/kg）表示

x=c*(v1_v2)k*f/m*1000

c氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液濃度的準(zhǔn)確數(shù)值，單位為mol/l

v1滴定待測樣液時消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積數(shù)值，單位為ml

v2空白試驗時消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積數(shù)值，單位為ml

k酸的換算系數(shù)

f待測樣液稀釋倍數(shù)

m待測樣液質(zhì)量數(shù)值，單位為g

5、總酚濃度

1）取兩個25ml容量瓶，分別標(biāo)識空白樣品、檢測樣品，分別加入10ml樣品，再加入8ml羧甲基纖維素溶液，充分混勻。

2）將檢測樣品中內(nèi)加入0.5ml鐵試劑，充分混勻。

3）將空白樣品、檢測樣品內(nèi)分別加入0.5ml氨水（1:2），用蒸餾水稀釋至刻度，充分混勻。

4）將空白樣品和檢測樣品于常溫下靜止10min，用10mm玻璃比色皿，以空白樣品調(diào)零，測定檢測樣品吸光度。