專利名稱：治療骨折的復方制劑及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種中藥制劑，尤其是涉及一種治療骨折的中藥復方制劑及其制備方法。
背景技術：
骨折是一種常見病，骨折是創(chuàng)傷骨科臨床常見病、多發(fā)病，可以損害社會勞動力，嚴重危害人類健康。據(jù)調(diào)查，我國骨折的患病率為1.37％，年發(fā)病率為0.28％，由于我國人口基數(shù)巨大，常年存在的骨折患病人口有一千七百八十萬之多。中醫(yī)藥在防治骨折方面積累了豐富的臨床經(jīng)驗，其總的指導思想是以“跌打損傷，皆瘀血在內(nèi)而不散也，血不活則瘀不能去，瘀不去則折不能續(xù)”和“瘀去、新生、骨合”，充分利用活血化瘀接骨續(xù)筋的藥物來糾正因創(chuàng)傷骨斷而引起的臟腑、經(jīng)絡、氣血功能紊亂，達到促進骨折愈合的目的。
現(xiàn)代文獻報告骨折愈合的關鍵在于骨痂的產(chǎn)生和快速增殖，在其增殖過程中一方面要通過機能性刺激使成骨細胞更趨活躍，另一方面是源源不斷地補充骨痂生長所必需的蛋白質(zhì)及微量元素等，研究表明，骨碎補、續(xù)斷，具有強有力的補腎作用，通過補腎達到調(diào)節(jié)免疫，刺激細胞活性增強的作用。目前，中醫(yī)臨床常用接骨七厘片等成藥，但未見使用方海為主要組成藥物的復方制劑。

發(fā)明內(nèi)容
1、發(fā)明目的本發(fā)明的目的在于提供一種能促進骨折愈合，加速骨痂形成的含有方海的有效新制劑。
2、技術方案我們在長期的臨床實踐中認識到，不論骨折發(fā)生在何處，其關鍵病機均在于“瘀血凝滯”，而人體的經(jīng)絡臟腑之氣又都將由實趨虛，因此，在治療用藥時，必須貫徹“祛邪必須扶正，不扶正不足以祛邪”的原則。本發(fā)明正是根據(jù)這一理論及數(shù)十年的臨床實踐，經(jīng)過篩選有效方藥，而研制成治療骨折的中藥復方制劑，其重量配比為
骨碎補0.5～10g、續(xù)斷0.2～8g、方海1.0～20g、當歸1.0～10g、兒茶0.3～5g、血竭0.5～5g、乳香(制)0.2～8g、沒藥(制)0.2～8g、土鱉蟲1.0～8g、自然銅(煅)0.5～3g以上各組分的優(yōu)化重量配比為骨碎補1.5g、續(xù)斷1.2g、方海2.0g、當歸1.4g、兒茶0.35g、血竭0.95g、乳香(制)1.0g、沒藥(制)1.0g、土鱉蟲1.4g、自然銅(煅)1.2g方解骨碎補、續(xù)斷、方海、土鱉蟲為君，骨碎補性味苦溫，入肝腎經(jīng)，續(xù)斷性味苦溫，亦入腎經(jīng)，且強壯筋骨，同從腎水以培骨；方海性味咸寒，破瘀通絡，軟堅散結(jié)，土鱉蟲性味咸寒，破血逐瘀，接骨通絡，同從破瘀通絡以接骨，四味一體，功能攻補兼施，強腎接骨。并用乳香、沒藥、血竭為臣，乳香、沒藥皆為辛、苦、溫之品，行氣活血，舒筋止痛，消腫生肌，血竭性味甘、咸、平，亦具行瘀止血止痛之功，共同助君加強活血消腫止痛，極有利于續(xù)筋接骨，再以當歸、自然銅為佐藥，當歸甘、辛、溫，補血活血，自然銅性味辛平，散瘀止痛，接骨續(xù)筋，二者為佐，共輔君臣，更遣兒茶為使藥，因兒茶性味苦、澀、涼，尤擅理傷斂損，引導諸藥直達病所。全方具有益腎壯骨、祛瘀生新、消腫定痛、續(xù)筋接骨之功效，主治外傷性骨折。
本復方添加適宜的輔料可制成固體口服制劑(膠囊劑、片劑、顆粒劑等)，其制備方法步驟為(1)以上十味，取兒茶、血竭、乳香(制)、沒藥(制)混合低溫粉碎，過篩得細粉；(2)方海與土鱉蟲粗粉碎，加水煎煮，合并煎液，濃縮；(3)骨碎補、續(xù)斷、當歸，加乙醇回流提取，合并提取液，減壓回收乙醇，濃縮；(4)煅自然銅單獨加醋酸水煎煮，濾過，合并濾液，濃縮；(5)并將與上述方海、土鱉蟲提取濃縮液及骨碎補、續(xù)斷、當歸提取濃縮液混勻，真空干燥成干浸膏；(6)再將上述干浸膏粉碎，與步驟(1)的四味生藥粉末混勻，添加適宜的輔料可制成顆粒，或分裝成顆粒劑，或進一步分裝成膠囊劑或壓成片劑。
對上述制備方法的工藝條件，作進一步的說明如下以上十味，取兒茶、血竭、乳香(制)、沒藥(制)混合低溫粉碎，過篩得細粉(80目)。方海與土鱉蟲粗粉碎，加水煎煮3次，每次2小時，合并煎液，濃縮。骨碎補、續(xù)斷、當歸，加50％乙醇回流提取3次，每次2小時，合并提取液，減壓回收乙醇，濃縮至相對密度1.30(60℃熱測)。煅自然銅單獨加pH4醋酸水煎煮2次，每次2小時，濾過，合并濾液，濃縮。并與上述方海、土鱉蟲提取濃縮液及骨碎補、續(xù)斷、當歸提取濃縮液混勻，80℃，0.08MPa真空干燥成干浸膏。上述干浸膏粉碎，與前四味生藥粉末混勻，30％乙醇離心旋轉(zhuǎn)法制粒，干燥，整粒(40目)，灌裝成膠囊或加適量輔料制成顆粒劑或壓成片劑。
3.有益效果我們用伸筋接骨膠囊對家兔及大鼠兩種骨折模型的治療作用，實驗觀察結(jié)果表明具有以下優(yōu)點(1)能夠明顯的抑制血小板聚集，降低血粘度，改善血液循環(huán)。
(2)提高骨密度，加快骨礦的沉積速率，從而促進骨折的愈合。
(3)促進骨小梁增生，使骨折損傷處能夠迅速修復，從而加速骨折的愈合，縮短愈合時間。
(4)可緩解由于骨折愈合過程中炎癥因子滲出所致的疼痛反應。
具體實施例方式
(一)治療骨折的中藥復方制劑的實施方式有實施例1治療骨折的復方制劑，其重量配比為骨碎補1.5g、續(xù)斷1.2g、方海2.0g、當歸1.4g、兒茶0.35g、血竭0.95g、乳香(制)1.0g、沒藥(制)1.0g、土鱉蟲1.4g、自然銅(煅)1.2g實施例2與實施例1基本相同，但復方重量配比為骨碎補2.0 g、續(xù)斷1.2g、方海4.0g、當歸2.0g、兒茶0.5g、血竭1.0g、乳香(制)1.5g、沒藥(制)1.5g、土鱉蟲2.0g、自然銅(煅)1.0g實施例3與實施例1基本相同，但復方重量配比為骨碎補5g、續(xù)斷4g、方海4.0g、當歸2g、兒茶0.5g、血竭1.5g、乳香(制)2.0g、沒藥(制)2.0g、土鱉蟲2g、自然銅(煅)1.5g實施例4與實施例1基本相同，但復方重量配比為骨碎補10g、續(xù)斷8g、方海20g、當歸1.4g、兒茶5g、血竭5g、乳香(制)8g、沒藥(制)8g、土鱉蟲8g、自然銅(煅)3g(二)治療骨折的復方制劑的制備方法有實施例5伸筋接骨膠囊處方骨碎補121.5g、續(xù)斷97.2g、方海162.0g、當歸113.4g、兒茶28.4g、血竭76.9g、乳香(制)81.0g、沒藥(制)81.0g、土鱉蟲113.4g、自然銅(煅)97.2g，共制成1000粒。
制法以上十味，取兒茶、血竭、乳香(制)、沒藥(制)混合低溫粉碎，過篩得細粉(80目)。方海與土鱉蟲粗粉碎，加水煎煮3次，每次2小時，合并煎液，濃縮。骨碎補、續(xù)斷、當歸，加50％乙醇回流提取3次，每次2小時，合并提取液，減壓回收乙醇，濃縮至相對密度1.30(60℃熱測)。煅自然銅單獨加pH4醋酸水煎煮2次，每次2小時，濾過，合并濾液，濃縮。并與上述方海、土鱉蟲提取濃縮液及骨碎補、續(xù)斷、當歸提取濃縮液混勻，80℃，0.08MPa真空干燥成干浸膏。上述干浸膏粉碎，與前四味生藥粉末混勻，30％乙醇離心旋轉(zhuǎn)法制粒，干燥，整粒(40目)，灌裝，即得。
實施例6伸筋接骨片處方骨碎補121.5g 續(xù)斷97.2g方海162.0g 當歸113.4g兒茶28.4g 血竭76.9g乳香(制)81.0g沒藥(制)81.0g土鱉蟲113.4g自然銅(煅)97.2g共制成1000片制法以上十味，取兒茶、血竭、乳香(制)、沒藥(制)混合低溫粉碎，過篩得細粉(80目)。方海與土鱉蟲粗粉碎，加水煎煮3次，每次2小時，合并煎液，濃縮。骨碎補、川續(xù)斷、當歸，加50％乙醇回流提取3次，每次2小時，合并提取液，減壓回收乙醇，濃縮至相對密度1.30(60℃熱測)。煅自然銅單獨加pH4醋酸水煎煮2次，每次2小時，濾過，合并濾液，濃縮。并與上述方海、土鱉蟲提取濃縮液及骨碎補、川續(xù)斷、當歸提取濃縮液混勻，80℃，0.08MPa真空干燥成干浸膏。上述干浸膏粉碎，與前四味生藥粉末混勻，30％乙醇離心旋轉(zhuǎn)法制粒，干燥，整粒(40目)，加適量硬脂酸鎂，壓片，即得。
實施例7伸筋接骨顆粒處方骨碎補337.5g續(xù)斷270.0g方海450.0g 當歸315.0g兒茶78.9g血竭213.6g乳香(制)225.0g沒藥(制)225.0g土鱉蟲315.0g自然銅(煅)270.0g共制成1000g制法以上十味，取兒茶、血竭、乳香(制)、沒藥(制)混合低溫粉碎，過篩得細粉(80目)。方海與土鱉蟲粗粉碎，加水煎煮3次，每次2小時，合并煎液，濃縮。骨碎補、川續(xù)斷、當歸，加50％乙醇回流提取3次，每次2小時，合并提取液，減壓回收乙醇，濃縮至相對密度1.30(60℃熱測)。煅自然銅單獨加pH4醋酸水煎煮2次，每次2小時，濾過，合并濾液，濃縮。并與上述方海、土鱉蟲提取濃縮液及骨碎補、川續(xù)斷、當歸提取濃縮液混勻，80℃，0.08MPa真空干燥成干浸膏。上述干浸膏粉碎，與前四味生藥粉末混勻，加適量矯味劑，乙醇離心旋轉(zhuǎn)法制粒，干燥，整粒(40目)，分裝，即得。
實施例8伸筋接骨膠囊接骨作用的藥效學試驗一對家兔骨折模型的影響(一)實驗材料動物大耳白家兔，♂，體重2-2.5kg，由江寧縣湯山青龍山動物繁殖場提供，儀器日立7020全自動生化分析儀，日本Hitachi公司。
骨密度測定儀(Piximus bone densitometer)，美國General ElectronicLunar公司。
藥物伸筋接骨膠囊，由南京中醫(yī)藥大學海洋中心制劑研究室提供，批號021017，人每日服用量為12粒，每粒相當于生藥量0.883g，每克浸膏粉相當于生藥量2.58g。
三七粉由南京中藥飲片廠提供，批號020606(二)實驗方法(1)動物分組取家兔70只，隨機分為五組，每組14只，分別為模型組(等體積蒸餾水)，三七粉陽性藥組(1.26g/kg)，伸筋接骨膠囊大劑量組(1.14g/kg，相當于2.94g生藥/kg)，伸筋接骨膠囊中劑量組(0.57g/kg，相當于1.47g生藥/kg)，伸筋接骨膠囊小劑量組(0.19g/kg，相當于0.49g生藥/kg)。
(2)骨折模型的制作適應性飼養(yǎng)一周后，家兔用3％戊巴比妥鈉溶液按1ml/kg劑量靜脈麻醉后，兩側(cè)前肢剪毛，75％酒精消毒，在無菌條件下用醫(yī)用手術牙科鉆在兩側(cè)橈骨中上段1/3交界處橫形鉆成寬約為3mm，深入骨髓腔形成骨損傷，縫合皮膚，手術后次日開始灌胃給藥，連續(xù)給藥，給藥后第14、28天取各組家兔中的7只，測定各項指標。
(3)骨密度測定分別于14、28天截取兩側(cè)橈骨，其長度包括骨損傷及上、下各正常段骨質(zhì)，用美國LUNAR公司Piximus bone densito-meter測定儀測定骨密度，觀察骨折愈合情況。
(4)血生化測定用全自動生化分析儀測定血清中的鈣、磷，堿性磷酸酶等指標。
病理形態(tài)截取兩側(cè)橈骨，其長度包括骨損傷及上、下各正常段骨質(zhì)，置于10％福爾馬林內(nèi)固定，經(jīng)脫鈣后常規(guī)石蠟包埋，切片厚4～5μm，HE染色，根據(jù)損傷處結(jié)締組織、軟骨、骨增生修復的程度，分為五級，以骨組織占所有增生組織(包括結(jié)締組織、軟骨、骨組織)的比例記分，骨組織占1/5者記為1分，骨組織占2/5者記為2分，依此類推，損傷處完全由骨組織取代者(骨組織占5/5)記為5分，并依據(jù)修復程度分為+骨組織修復輕度，++中度，+++重度，++++基本修復，+++++完全修復。分值越高，提示療效越好。
(三)結(jié)果(1)伸筋接骨膠囊對家兔骨折模型骨密度的影響表1伸筋接骨膠囊對家兔骨折模型骨密度的影響(X±SD)組別 動物數(shù) 骨密度(g/cm3，14d) 動物數(shù)骨密度(g/cm3，28d)模型組7 0.185±0.0367 0.249±0.049三七粉組 7 0.259±0.053*6 0.356±0.059**大劑量組 7 0.276±0.053**7 0.297±0.016*中劑量組 7 0.209±0.0276 0.301±0.018*小劑量組 7 0.247±0.056*6 0.252±0.061注與模型組比較*P＜0.05**P＜0.01以上實驗結(jié)果表明連續(xù)給予伸筋接骨膠囊14天后，三七粉組和伸筋接骨膠囊小劑量組的骨密度增加，與模型組比較有顯著性差異(P＜0.05)，伸筋接骨膠囊大劑量組也有顯著差異(P＜0.01)。給藥28天后可見三七粉組與模型組比較有明顯差異(P＜0.01)，伸筋接骨膠囊中劑量組、大劑量組與模型組比較有差異(P＜0.05)。并且28天的骨密度比14天的增大，結(jié)果表明伸筋接骨膠囊可以加快骨礦沉積速率，提高骨密度，促進家兔骨損傷部位愈合。
(2)伸筋接骨膠囊對家兔骨折模型血清ALP、磷、鈣的影響表2伸筋接骨膠囊對家兔骨折后血清ALP、磷、鈣的影響(14dX±SD)組別 動物數(shù)ALP(U/L) 磷(mmol/L) 鈣(mmol/L)模型組 7 108.00±36.18 12.40±1.6511.47 ±0.51三七粉組7 125.00±52.39 12.47±2.8012.06±0.80大劑量組7 136.29 ±50.31 12.24±1.6811.19±0.94中劑量組7 110.43±60.43 13.11±1.7211.11±0.77小劑量組7 138.71±52.32 12.15±2.1610.64±0.79
表3伸筋接骨膠囊對家兔骨折后血清ALP、磷、鈣的影響(28dX±SD)組別動物數(shù) ALP(U/L) 磷(mmol/L) 鈣(mmol/L)模型組 7 137.57±40.19 10.32±4.52 9.50±4.16三七粉組6 151.17±27.01 11.50±1.84 10.46±0.43大劑量組7 151.00±38.45 11.44±1.11 10.31±1.32中劑量組6 129.00±45.44 12.20±1.92 9.03±2.22小劑量組6 143.17±52.21 9.02±4.34 8.70±4.18以上實驗結(jié)果表明各組藥物對家兔骨折模型14及28天的血清中ALP、磷及鈣無明顯影響，各組與模型組比較未見顯著性差異。提示口服伸筋接骨膠囊14、28天差能升高血清中的鈣，磷有含量，但與模型組比較無顯著差異。
(3)伸筋接骨膠囊對家兔骨折模型骨折部位的組織學檢查表4伸筋接骨囊膠對骨損傷14天后家兔病理形態(tài)的影響組別骨組織修復+ +++++ ++++ 均分模型組 1/7 4/71/7 --1.86三七組 --5/71/7 --2.00大劑量組 2/7 3/72/7 --2.14中劑量組 3/6 2/61/6 --2.00小劑量組 1/6 3/61/6 1/6 2.50表5伸筋接骨囊膠對骨損傷28天后家兔病理形態(tài)的影響組別骨組織修復+ +++++ ++++ +++++ 均分模型組-- --3/6 2/61/63.67三七組-- ----2/53/54.60大劑量組 -- --1/7 -- 6/74.71中劑量組 -- --2/6 2/62/64.00小劑量組 -- --2/6 1/63/64.16骨折后修復早期表現(xiàn)為纖維組織增生，以后出現(xiàn)軟骨化生，類骨基質(zhì)形成，最后形成骨組織。損傷后14天顯示模型組修復狀況較其他各組差，而三七陽性組，伸筋接骨高劑量組、中劑量組、三組間差別不大。伸筋接骨低劑量組損傷后修復較其他各組好。損傷后28天伸筋接骨高劑量組修復最好，多數(shù)兔(6/7例)骨創(chuàng)傷處已全為骨小梁修復，藥效高于三七處理的骨損傷；其他各組修復的狀況由好到差依次為三七陽性組、伸筋接骨低劑量組、伸筋接骨中劑量組。模型組修復狀況最差，明顯低于其他各實驗組。
(四)結(jié)論骨折后修復早期表現(xiàn)為纖維組織增生，以后出現(xiàn)軟骨化生，類骨基質(zhì)形成，最后形成骨組織。本實驗利用家兔定點造成其骨損傷，連續(xù)給藥后研究藥物對其骨損傷處的治療恢復情況，研究結(jié)果表明，連續(xù)給予伸筋接骨膠囊14、28天后，三七粉組和伸筋接骨膠囊小劑量組的骨密度增加，與模型組比較有顯著性差異，28天的骨密度比14天的增大，結(jié)果表明伸筋接骨膠囊可以加快骨礦沉積速率，提高骨密度，促進家兔骨損傷增生。但藥物能升高家兔血清中ALP、鈣，但與模型組比較無明顯差。病理組織學結(jié)果顯示，損傷后骨組織于14、28天給藥組的組織學形態(tài)都有所增生修復，提示伸筋接骨膠囊提高骨損傷處的骨密度，促進骨組織增生。
二、對大鼠骨折模型的影響(一)實驗材料，與上述一相同。
(二)實驗方法(1)動物分組取大鼠150只，隨機分為五組，每組30只，分別為模型組(等體積蒸餾水)，三七粉陽性藥組(2.34g/kg)，伸筋接骨膠囊大劑量組(2.21g/kg，相當于5.70g生藥/kg)，伸筋接骨膠囊中劑量組(1.11g/kg，相當于2.86g生藥/kg)，伸筋接骨膠囊小劑量組(0.37g/kg，相當于0.95g生藥/kg)。
(2)骨折模型的制作適應性飼養(yǎng)一周后，將各組大鼠麻醉后，于其股骨下端三分之一處，用夾骨鉗造成將其股骨骨折模型。
(3)骨密度測定分別于損傷后10天、20、30天，取其股骨各鼠股骨測其骨密度，觀察各組的骨生長情況。
(4)血生化測定分別于損傷后10天、20、30天取血，用日立7020全自動生化分析儀測定血清鈣、磷含量及堿性磷酸酶活性(5)病理形態(tài)分別于損傷后10天、20、30天取其股骨，置于10％福爾馬林內(nèi)固定，經(jīng)脫鈣后常規(guī)石蠟包埋，切片厚4～5μm，HE染色，根據(jù)損傷處結(jié)締組織、軟骨、骨增生修復的程度，分為五級，以軟骨及骨組織占所有增生組織(包括結(jié)締組織、軟骨、骨組織)的比例記分，軟骨及骨組織占1/5者記為1分，軟骨及骨組織占2/5者記為2分，依此類推，損傷處完全由軟骨及骨組織取代者(即軟骨及骨組織占5/5)記為5分。分值越高，提示療效越好。對其病理形態(tài)組織學分析，觀察各組的骨生長情況。
(三)結(jié)果(1)伸筋接骨膠囊對大鼠骨折模型骨密度的影響表6伸筋接骨膠囊對大鼠骨折模型骨密度的影響(X±SD)組別 動物骨密度動物 骨密度 動物數(shù) 骨密度數(shù) (g/cm3，10d) 數(shù) (g/cm3，20d) (g/cm3，30d)模型組 10 0.113±0.019 70.118±0.023 9 0.154±0.034三七粉組 9 0.136±0.021*90.170±0.043*8 0.195±0.024*大劑量組 7 0.133±0.015*10 0.165±0.038**9 0.200±0.026**中劑量組 9 0.132±0.010*90.163±0.028**8 0.195±0.033*小劑量組 9 0.134±0.019*90.151±0.019**8 0.173±0.023注與模型組比較*P＜0.05**P＜0.01以上實驗結(jié)果表明連續(xù)給藥10天后，可見三七粉組和伸筋接骨膠囊各劑量組的骨密度增加，與模型組比較均有顯著性差異(P＜0.05)。給藥20天后，三七粉組的骨密度增加，與模型組比較有差異(P＜0.05)，伸筋接骨膠囊大、中、小劑量組都有顯著性差異(P＜0.01)。給藥30天后，三七粉組與模型組比較有差異(P＜0.05)，伸筋接骨膠囊中劑量組和大劑量組與模型組比較有顯著性差異(P＜0.01)。表明大鼠骨折以后，伸筋接骨膠囊可以加快骨礦成分的沉積速率，提高了骨的密度，從而促進骨折的愈合。
(2)伸筋接骨膠囊對大鼠骨折模型血清ALP、磷、鈣的影響表7伸筋接骨膠囊對大鼠骨折后血清ALP、磷、鈣影響(10d X±SD)組別動物數(shù)ALP(U/L) 磷(mmol/L) 鈣(mmol/L)模型組 9 264.22±86.12 15.24±1.84 9.38±0.54三七粉組 9 290.22±28.27 17.02±3.01 9.90±0.53大劑量組 10 273.30±79.00 14.43±1.45 9.81±0.57中劑量組 10 276.90±94.72 15.84±1.41 9.92±0.30小劑量組 10 271.70±64.41 16.15±2.14 9.72±0.76表8伸筋接骨膠囊對大鼠骨折后血清ALP、磷、鈣影響(20d X±SD)組別動物數(shù)ALP(U/L) 磷(mmol/L) 鈣(mmol/L)模型組 8 264.75±86.54 14.76±1.97 8.83±0.29三七粉組 8 210.00±57.79 17.05±2.50 8.84±0.54大劑量組 10 234.80±50.94 14.50±1.15 9.02±0.48中劑量組 9 250.44±83.35 15.19±1.36 9.30±0.50小劑量組 9 294.78±157.80 15.84±2.28 9.06±0.52表9伸筋接骨膠囊對大鼠骨折后血清ALP、磷、鈣影響(30d X±SD)組別動物數(shù)ALP(U/L) 磷(mmol/L) 鈣(mmol/L)模型組 8 230.88±45.84 9.03±0.70 16.65±4.20三七粉組 8 201.25±49.70 8.90±0.50 14.73±2.02大劑量組 7 198.86±54.30 8.60±0.39 14.61±1.55中劑量組 9 227.44±39.59 8.78±0.33 14.95±0.99小劑量組 8 202.75±36.04 8.78±0.29 14.30±1.88以上實驗結(jié)果表明各組藥物對大鼠骨折模型10、20及30天的血清中ALP、磷及鈣無明顯影響，各組與模型組比較未見差異，提示藥物經(jīng)口服吸收后對血液中的磷、鈣及堿性磷酸酶的含量無影響。
病理形態(tài)表10伸筋接骨膠囊對大鼠骨損傷模型10天后的病理形態(tài)學的影響組別 骨組織修復+ ++ 均分模型組 2/8-- 1.86三七組 4/8-- 2.00大劑量組 7/8-- 2.29中劑量組 3/9-- 1.67小劑量組 4/9 1/9 1.33
表11伸筋接骨膠囊對大鼠骨損傷模型20天后的病理形態(tài)學的影響組別骨組織修復+ ++ 均分模型組 8/9 -- 2.10三七組 5/71/7 2.43大劑量組 3/73/7 2.80中劑量組 4/61/6 2.33小劑量組 2/41/4 2.50表12伸筋接骨膠囊對大鼠骨損傷模型30天后的病理形態(tài)學的影響組別骨組織修復+ ++ 均分模型組 3/74/7 3.00三七組 4/95/9 3.22大劑量組 2/64/6 3.50中劑量組 6/82/8 2.50小劑量組 3/63/6 3.80骨折損傷后不同時間段用半定量方法分析骨折修復狀況顯示骨折后10天，伸筋接骨膠囊大劑量組對骨折的療效優(yōu)于三七陽性組、伸筋接骨膠囊中劑量組、伸筋接骨膠囊小劑量組，骨折后20、30天后顯示伸筋接骨膠囊小劑量組療效最好，其次為伸筋接骨膠囊大劑量組。伸筋接骨膠囊于骨折后20天，30天時大劑量組及小劑量組比模型組修復狀況好。模型組在骨折損傷后不同時間段修復狀況較差，每例動物均分明顯低于多數(shù)其他實驗組。
(四)結(jié)論骨折在臨床上比較常見，主要是指骨或骨小梁在外力的作用或在某些病理情況下遭到完整性破壞。本實驗通過大鼠骨折實驗動物模型研究藥物的治療作用，伸筋接骨膠囊能提高大鼠骨折端的骨密度，加快骨礦成分的沉積速率，促進骨折的愈合，但對血清中ALP、磷及鈣無明顯影響。病理形態(tài)學表明伸筋接骨膠囊能促進骨小梁增生，使骨折損傷處能迅速修復。
實施例9伸筋接骨膠囊對血液流變學的影響一、伸筋接骨膠囊對家兔骨折模型血液流變學的影響(一)實驗材料動物大耳白家兔，♂，體重2-2.5kg，儀器LG-R-80血液粘度測試儀，PAPER-1型血小板集聚及血凝測定儀，藥物同實施例8(二)實驗方法(1)動物分組同實施例8(2)骨折模型制備適應性飼養(yǎng)一周后，各組家兔用3％戊巴比妥鈉溶液按1ml/kg劑量靜脈麻醉后，前肢剪毛，75％酒精消毒，在無菌條件下用醫(yī)用手術牙科鉆在橈骨中上段1/3交界處橫形鉆成寬約為3mm，深入骨髓腔的骨損傷，于傷口滴入青霉素溶液消炎，縫合皮膚，手術后次日開始灌胃給藥，連續(xù)給藥。
(3)血液流變學測定于給藥后第14、28天，頸動脈采血，測血小板聚集率，全血、血漿粘度。
(三)結(jié)果(1)伸筋接骨膠囊對家兔骨折模型血液流變學的影響表13伸筋接骨膠囊對家兔骨折模型血液流變學的影響(14d X±SD)組別動物數(shù) 全血粘度 血漿粘度模型組 73.37±1.571.97±1.03三七粉組 73.84±1.952.40±1.07大劑量組 72.63±0.271.97±0.80中劑量組 72.97±0.542.51±1.52小劑量組 72.96±1.411.94±0.77表14伸筋接骨膠囊對家兔骨折模型血液流變學的影響(28d X±SD)組別動物數(shù) 全血粘度 血漿粘度模型組 75.37±0.841.87±0.13三七粉組 64.77±0.482.00±0.21大劑量組 74.61±0.38*1.94±0.10中劑量組 64.86±0.422.02±0.06小劑量組 64.19±0.62*1.86±0.10注與模型組比較*P＜0.05**P＜0.01
以上實驗結(jié)果表明，連續(xù)給予伸筋接骨膠囊14天后，藥物對家兔骨折模型的全血粘度，血漿粘度沒有明顯影響，各組和模型組比較無明顯性差異。給藥28天后可見伸筋接骨膠囊大劑量組和小劑量組的全血粘度，紅細胞比容都比模型組有明顯的降低，與模型組比較也有差異(P＜0.05)。
表15伸筋接骨膠囊對家兔骨折模型血小板聚集率的影響(X±SD)組別 動物數(shù)血小板聚集率(14d)動物數(shù)血小板聚集率(28d)模型組 7 77.67±13.56 792.87±10.30三七粉組 7 52.54±18.68*678.25±8.69*大劑量組 7 60.52±11.86*768.74±23.16*中劑量組 7 58.67±16.33*680.90±18.49小劑量組 7 71.58±21.13 674.85±15.63*注與模型組比較*P＜0.05**P＜0.01以上實驗結(jié)果表明當連續(xù)給藥14天時，陽性藥三七粉組與模型組比較有顯著性差異(P＜0.05)，伸筋接骨膠囊中劑量組及大劑量組與模型組比較有顯著性差異(P＜0.05)，給藥28天后，各組再與模型組比較，三七粉組、伸筋接骨膠囊小劑量組和大劑量組有差異(P＜0.05)。表明伸筋接骨膠囊對實驗性骨損傷家兔血小板聚集有抑制作用，但量效關系不明顯，提示伸筋接骨膠囊能降低血小板的聚集率，促進血液循環(huán)。
(四)結(jié)論本實驗利用家兔定點造成其骨損傷，連續(xù)給藥后研究藥物對其骨損傷處的治療恢復情況，研究結(jié)果表明，給藥14天時，對其全血粘度，血漿粘度，沒有明顯影響，但給藥28天后可見伸筋接骨膠囊大劑量組和小劑量組的全血粘度都比模型組有明顯的降低，給藥14及28天后，可以改善局部血液供應，伸筋接骨膠囊高、中兩個劑量組均能降低血小板的聚集率，高劑量組可以降低全血粘度。
二、伸筋接骨膠囊對大鼠骨折模型血液流變學的影響(一)實驗材料動物SD大白鼠，♂，120-150g，由南京醫(yī)科大學實驗動物中心提供，儀器LG-R-80血液粘度測試儀，北京世帝科學儀器公司
PAPER-1型血小板集聚及血凝測定儀，北京世帝科學儀器公司藥物伸筋接骨膠囊由南京中醫(yī)藥大學海洋中心制劑研究室提供，批號021017，人每日服用量為12粒，每粒相當于生藥量0.883g，每克浸膏粉相當于生藥量2.58g。
三七粉 由南京中藥飲片廠提供批號020606(二)實驗方法(1)實驗分組同實施例8(二)(2)(2)動物模型的制備適應性飼養(yǎng)一周后，各組用夾骨鉗將其股骨夾斷造成骨折模型。次日各組灌胃給藥(正常組給等體積的蒸餾水)，每日一次，連續(xù)給藥。
(3)血液流變學的測定分別于給藥后的第10、20及30天頸總動脈采血，測血小板聚集率，全血及血漿粘度。
(三)實驗結(jié)果(1)、伸筋接骨膠囊對大鼠骨折模型血液流變學的影響表16伸筋接骨膠囊對大鼠骨折模型血液流變學的影響(10d X±SD)組別 動物數(shù) 全血粘度 血漿粘度模型組 9 4.54±0.91 1.99±1.26三七粉組 9 4.81±0.97 1.45±0.34大劑量組10 5.16±0.86 2.00±0.77中劑量組10 5.17±0.69 1.76±0.37小劑量組10 5.03±0.74 1.57±0.27表17伸筋接骨膠囊對大鼠骨折模型血液流變學的影響(20d X±SD)組別 動物數(shù) 全血粘度血漿粘度模型組 84.71±1.57 1.64±0.42三七粉組 84.58±1.03 1.74±0.56大劑量組 104.74±1.66 1.99±0.48中劑量組 94.54±1.63 1.95±0.48小劑量組 95.30±1.38 2.37±1.11
表18伸筋接骨膠囊對大鼠骨折模型血液流變學的影響(30dX±SD)組別 動物數(shù) 全血粘度血漿粘度模型組 8 6.16±0.46 1.75±0.09三七粉組 8 6.09±0.99 1.81±0.08大劑量組 7 6.21±1.57 1.90±0.15*中劑量組 9 5.89±0.87 1.78±0.06小劑量組 8 6.87±2.17 2.00±0.52注與模型組比較*P＜0.05**P＜0.01以上實驗結(jié)果表明各組藥物對大鼠骨折模型10、20及30天的全血粘度無明顯影響，與模型組比較沒有差異。血漿粘度除了30天伸筋接骨膠囊大劑量組比模型組有顯著升高，與模型組比較有差異(P＜0.05)外，其他各組藥物對大鼠骨折模型10、20及30天的血漿粘度無明顯影響，與模型組比較沒有差異。連續(xù)給藥后第10天時的陽性藥三七粉組和連續(xù)給藥后第20天時的伸筋接骨膠囊大劑量組紅細胞比容比模型組有顯著升高，與模型組比較有差異(P＜0.05)。其它各組藥物對大鼠骨折模型10、20及30天的紅細胞比容無明顯影響，與模型組比較沒有差異。
表19伸筋接骨膠囊對大鼠骨折模型血小板聚集率的影響組別動物數(shù) 血小板聚集率 動物數(shù) 血小板聚集率 動物數(shù) 血小板聚集率(10d) (20d) (30d)模型組 9 53.50±10.83 8 80.89±8.15 8 83.80±7.05三七粉組 9 31.34±12.62**8 63.35±17.79*8 67.73±12.26**大劑量組 10 43.16±19.3410 65.66±16.97*7 71.83±8.95*中劑量組 10 38.66±12.26*9 78.03±14.059 66.63±19.45*小劑量組 10 30.80±15.98*9 73.66±13.638 70.39±26.92注與模型組比較*P＜0.05**P＜0.01以上的實驗結(jié)果表明在大鼠連續(xù)給藥10天時，給藥組與模型組比較，陽性藥三七粉組有明顯的差異(P＜0.01)，伸筋接骨膠囊小劑量組和中劑量組有差異(P＜0.05)。在20天時，給藥組再與模型組比較，三七粉組和伸筋接骨膠囊大劑量組有差異(P＜0.05)。在30天時與模型組比較，伸筋接骨膠囊從中劑量組有差異(P＜0.05)，三七粉組有明顯差異(P＜0.01)。伸筋接骨膠囊各劑量組血小板聚集率與模型組比，都有一定的下降。說明伸筋接骨膠囊通過對骨折以后大鼠血小板聚集抑制作用。
實施例10伸筋接骨膠囊抗炎鎮(zhèn)痛作用一、對大鼠棉球肉芽腫的影響動物ICR大白鼠，♂，120-150g，由南京中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供，儀器SARTORIUS。BP-310S電子天平藥物伸筋接骨膠囊，阿司匹林，實驗方法取體重為120-150g健康雄性大鼠50只，隨機分成5組，每組10只。(1)模型組(等體積蒸餾水)；(2)阿司匹林組(200mg/kg)；伸筋接骨膠囊大劑量組.(2.21g/kg，相當于5.70g生藥/kg)；伸筋接骨膠囊中劑量組(1.11g/kg，相當于2.86g生藥/kg)；伸筋接骨膠囊小劑量組(0.37g/kg，相當于0.95g生藥/kg)。適應性飼養(yǎng)后，用戊巴比妥鈉(30mg/kg)進行麻醉，在大鼠左右兩側(cè)腋下75％酒精消毒后，植入滅菌20mg的棉球(用前青霉素和鏈霉素混合液0.2ml處理)。于次日灌胃給藥，每日一次，連續(xù)五日，第六日將大鼠處死，將棉球連同周圍結(jié)蒂組織一起取出，除去脂肪組織，于60℃的烘相中烘至恒重后稱其重量重，并計算抑制率，結(jié)果按下面公式計算抑制率＝(1-給藥組肉芽組織的干重/空白組肉芽組織干重)×100％實驗結(jié)果見表20表20伸筋接骨膠囊對大鼠棉球肉芽腫的影響(X±SD)組別動物數(shù) 肉芽腫凈重(mg) 抑制率(％)模型組1060.25±13.71 ----阿司匹林 1052.85±5.91*11.92大劑量組 9 59.45±15.20 1.33中劑量組 1059.55±8.88 1.16小劑量組 1060.00±11.46 0.41注與模型組比較*P＜0.05以上實驗結(jié)果表明阿斯司林組與模型組比較有差異(P＜0.05)，但是伸筋接骨膠囊大，中，小劑量組與模型組比較沒有顯著性差異，對棉球肉芽腫的抑制率比較低，提示伸筋接骨膠囊的對棉球肉芽腫的抗炎作用不明顯。
二、對醋酸致小鼠扭體實驗的影響目的觀察伸筋接骨膠囊對醋酸所致小鼠扭體反應有無鎮(zhèn)痛作用。
動物ICR小鼠，♀♂各半，由南京醫(yī)科大學實驗動物中心提供，動物生產(chǎn)許可證蘇動準字號SCXK(蘇)2002-0031。
藥物伸筋接骨膠囊，阿司匹林，醋酸實驗方法取體重為18～22g的健康小鼠61只，雌雄各半，隨機分成5組，(1)模型組；(2)阿司匹林組(200mg/kg)；(3)伸筋接骨膠囊大劑量組(3.12g/kg，相當于8.05g生藥/kg)；(4)伸筋接骨膠囊中劑量組(1.56g/kg，相當于4.02g生藥/kg)；(5)伸筋接骨膠囊小劑量組(0.52g/kg，相當于1.37g生藥/kg)。適應性飼養(yǎng)后，各組小鼠灌胃給藥，每天一次，連續(xù)三天。于末次給藥后一小時(阿斯匹林半小時)。經(jīng)腹腔注射0.6％醋酸溶液0.2ml/只，立即計時，觀察并記錄小鼠在15min內(nèi)的扭體反應數(shù)，并計算藥物的抑制率。結(jié)果按下面公式計算抑制率＝(生理鹽水組平均扭體數(shù)-給藥組平均扭體數(shù))/生理鹽水組平均扭體數(shù)×100％實驗結(jié)果伸筋接骨膠囊對醋酸所致小鼠扭體反應次數(shù)的影響表21伸筋接骨膠囊對醋酸所致小鼠扭體反應次數(shù)的影響(X±SD)組別 動物數(shù) 扭體次數(shù) 抑制率(％)正常組 12 46.6±14.7阿司匹林組 13 17.3±16.9**62.8大劑量組12 26.9±21.3*42.2中劑量組12 22.4±15.1**51.9小劑量組12 31.7±17.3*32.0注與正常組比較*P＜0.05**P＜0.01以上實驗結(jié)果表明阿司匹林組和伸筋接骨膠囊中劑量組與正常組比較有顯著性差異(P＜0.01)，對化學性疼痛引起的小鼠扭體反應次數(shù)有明顯的抑制作用，伸筋接骨膠囊大劑量和小劑量組與正常組比較有差異(P＜0.05)，對引起的小鼠扭體反應有一定的抑制作用。說明伸筋接骨膠囊對化學性疼痛模型有明顯的鎮(zhèn)痛作用。
三、對醋酸致小鼠炎癥毛細血管通透性的影響目的伸筋接骨膠囊對醋酸致小鼠炎癥使毛細血管通透性增加有無抑制作用動物ICR小鼠，♀♂各半，由南京醫(yī)科大學實驗動物中心提供，儀器離心機，BECKMEN公司。
DU-640核酸蛋白分析儀，BECKMEN公司。
藥物伸筋接骨膠囊，阿司匹林，醋酸，實驗方法取ICR健康小鼠60只，雌雄各半，隨機分成5組，(1)模型組(等體積蒸餾水)；(2)阿司匹林組(200mg/kg)；(3)伸筋接骨膠囊大劑量組(3.12g/kg，相當于8.05g生藥/kg)；(4)伸筋接骨膠囊中劑量組(1.56g/kg，相當于4.02g生藥/kg)；(5)伸筋接骨膠囊小劑量組(0.52g/kg，相當于1.37g生藥/kg)。適應性飼養(yǎng)后，各組小鼠灌胃給藥，每天一次，連續(xù)三天。于末次給藥后一小時(阿斯匹林半小時)。經(jīng)尾靜脈注入0.5％的伊文思蘭液0.01ml/g，隨機腹腔注射0.5％的醋酸水溶液0.02ml/g。0.5小時后處死動物，用10ml生理鹽水沖洗腹腔，剪開腹腔，收集腹腔液，將其液在1000rpm離心5min，取上清夜用DU-640核酸蛋白分析儀在590nm處測其吸收度。記錄數(shù)據(jù)看藥物對醋酸引起的小鼠腹腔毛細血管通透性增加有無抑制作用。實驗結(jié)果見表15表22伸筋接骨膠囊對醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性的影響(x±SD)組別 動物數(shù) 吸光度正常組 100.208±0.072阿司匹林組 110.157±0.044*大劑量組110.217±0.092中劑量組100.190±0.052小劑量組100.199±0.061注與正常組比較*P＜0.05以上實驗結(jié)果表明阿斯司林組與模型組比較有差異(P＜0.05)，但是伸筋接骨膠囊大，中，小劑量組與模型組比較沒有顯著性差異，伸筋接骨膠囊各劑量組的吸光度與正常組比較也沒有明顯的降低。提示伸筋接骨膠囊對醋酸所致的炎癥抑制作用不顯著。
結(jié)論通過以上抗炎鎮(zhèn)痛實驗結(jié)果表明伸筋接骨膠囊不能抑制毛細血管通透性，提示伸筋接骨膠囊對骨損傷所致的炎癥沒有抑制作用；炎癥后期纖維母細胞的增殖無抑制作用，但伸筋接骨膠囊對化學性疼痛引起的小鼠扭體反應次數(shù)有明顯的抑制作用，提示伸筋接骨膠囊可以改善骨折炎癥因子釋放所致的疼痛反應。
權利要求
1.一種治療骨折的復方制劑，其特征在于它是由下列重量配比的原料所組成骨碎補0.5～10g、續(xù)斷0.2～8g、方海1.0～20g、當歸1.0～10g、兒茶0.3～5g、血竭0.5～5g、乳香(制)0.2～8g、沒藥(制)0.2～8g、土鱉蟲1.0～8g、自然銅(煅)0.5～3g。
2.按照權利要求1所述的治療骨折的復方制劑，其特征在于，復方中各原料組分的優(yōu)化配比為骨碎補1.5g、續(xù)斷1.2g、方海2.0g、當歸1.4g、兒茶0.35g、血竭0.95g、乳香(制)1.0g、沒藥(制)1.0g、土鱉蟲1.4g、自然銅(煅)1.2g
3.按照權利要求1或2所述的治療骨折的復方制劑，其特征在于添加適宜的輔料后，可制成固體口服制劑。
4.一種制備權利要求1所述的治療骨折的復方制劑的方法，其制備方法步驟為(1)將上述處方中兒茶、血竭、乳香(制)、沒藥(制)混合低溫粉碎，過篩得細粉；(2)把方海與土鱉蟲粗粉碎，加水煎煮，合并煎液，濃縮；(3)將骨碎補、續(xù)斷、當歸，加乙醇回流提取，合并提取液，減壓回收乙醇，濃縮；(4)煅自然銅加pH4醋酸水煎煮，濾過，合并濾液，濃縮；(5)將上述提取步驟(2)、(3)和(4)的濃縮液混勻，真空干燥成干浸膏；(6)再將上述干浸膏粉碎，與步驟(1)的四味生藥粉末混勻，添加適宜的輔料可制成顆粒，或分裝成顆粒劑；或進一步分裝成膠囊劑；或壓成片劑。
5.根據(jù)權利要求4所述的復方制劑的制備方法，其特征在于在步驟(1)中的細粉為80目。
6.根據(jù)權利要求4所述的復方制劑的制備方法，其特征在于在步驟(2)中加水煎煮3次，每次2小時。
7.根據(jù)權利要求4所述的復方制劑的制備方法，其特征在于在步驟(3)中加50％的乙醇回流提取3次，每次2小時，濃縮至相對密度1.30。
8.根據(jù)權利要求4所述的復方制劑的制備方法，其特征在于在步驟(4)中加醋酸水煎煮2次，每次2小時。
9.根據(jù)權利要求4所述的復方制劑的制備方法，其特征在于在步驟(5)中，真空干燥溫度80℃，0.08MPa。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療骨折的中藥復方制劑及其制備方法。該中藥由骨碎補、續(xù)斷、方海、當歸、兒茶、血竭、乳香、沒藥、土鱉蟲、自然銅所組成。其制法是(1)先將兒茶、血竭、乳香、沒藥混合后粉碎成細粉；(2)把方海與土鱉蟲粗粉碎、加水煎煮、煎液濃縮；(3)將骨碎補、續(xù)斷、當歸、加乙醇提取、濃縮；(4)自然銅加醋酸水煎煮、過濾、濾液濃縮；(5)將上述提取液、濃縮液合并后真空干燥成干浸膏；(6)將干浸膏粉碎后與上述四味生藥粉末混勻，添加適宜的輔料可制成顆粒劑、膠囊劑或片劑。它具有明顯的抑制血小板聚集，改善血液循環(huán)，提高骨密度，加快骨礦的沉積速率、促進骨生長，加快骨折愈合，縮短愈合時間等功效，是治療骨折的理想藥物。
文檔編號A61P19/08GK1593583SQ200410041020
公開日2005年3月16日 申請日期2004年6月18日 優(yōu)先權日2004年6月18日
發(fā)明者狄留慶, 陸茵, 吳皓, 李偉, 徐木金, 李莛歧, 張科衛(wèi), 趙曉莉, 李嶙 申請人:南京中醫(yī)藥大學