專利名稱：一種遠(yuǎn)志酸和遠(yuǎn)志皂苷元的高效分離提純方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥材活性成分的分離方法，屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體來說， 本發(fā)明涉及一種從遠(yuǎn)志中分離提取高純度遠(yuǎn)志酸和遠(yuǎn)志皂苷元方法，以及遠(yuǎn)志酸 和遠(yuǎn)志皂苷元的高效液相色譜分析方法。
技術(shù)背景遠(yuǎn)志是一種常用中藥材，《中國藥典》2005年版一部收載其來源為遠(yuǎn)志科 Polygalaceae植物遠(yuǎn)志戶ofyga/a fem/z》/^ Willd.或卵葉遠(yuǎn)志P. W6zWa L.的干 燥根，具有安神益智、祛痰消腫的功效。遠(yuǎn)志主要含皂苷、樹脂、脂肪油等化學(xué) 成分。遠(yuǎn)志皂苷元和遠(yuǎn)志酸屬于遠(yuǎn)志皂苷類成分，是遠(yuǎn)志中的主要活性成分，它 們的結(jié)構(gòu)式如下-遠(yuǎn)志酸 遠(yuǎn)志阜苷元 2005版藥典首次收載遠(yuǎn)志酸為對(duì)照品，將其作為遠(yuǎn)志藥材質(zhì)量控制含量測 定的指標(biāo)。因此，近年來在中藥遠(yuǎn)志和中成藥質(zhì)量分析中對(duì)遠(yuǎn)志酸這一對(duì)照品的 需求量日趨增加。但目前，國內(nèi)外多釆取按遠(yuǎn)志藥材的不同部位分別萃取后，再 經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析等傳統(tǒng)方法分離純化制得成品，然而，由于遠(yuǎn)志酸和遠(yuǎn)志皂苷 元的化學(xué)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)都極其相似，很難做到一次性將該兩種物質(zhì)進(jìn)行同步分離， 需多次重復(fù)分離過程，因此時(shí)間長，溶劑消耗量大，成本高，單體得率低，無法 實(shí)現(xiàn)大批量生產(chǎn)。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明旨在克服上述缺陷，提供一種遠(yuǎn)志酸和遠(yuǎn)志皂苷元的高效分離提純方 法，此方法不但可實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)志酸和遠(yuǎn)志皂苷元的同步分離，且分離效率高，工藝穩(wěn) 定，可大量制備得到純度大于98%的單體。同時(shí)本發(fā)明還提供了一種遠(yuǎn)志酸和 遠(yuǎn)志皂苷元的高效液相色譜分析方法。為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下一種遠(yuǎn)志酸和遠(yuǎn)志皂苷元的分離提純方法，包括步驟A:半成品的制備、步 驟B:半成品的溶解及步驟C:成品的分離純化，其特征在于它是以甲醇回流提 取遠(yuǎn)志原藥材、經(jīng)鹽酸水解制備得到半成品后，采用分析型高效液相色譜儀測定 遠(yuǎn)志酸和遠(yuǎn)志皂苷元的含量；然后選用四氫呋喃溶劑溶解半成品，以四氫呋喃、 水和有機(jī)酸的混合溶劑作為洗脫流動(dòng)相，采用高效制備液相色譜分離系統(tǒng)，對(duì)半 成品溶解步驟獲得的過濾物進(jìn)行洗脫分離后得到純度均大于98%的遠(yuǎn)志酸和遠(yuǎn) 志皂苷元純品。本發(fā)明的具體工藝步驟如下A、 半成品的制備取遠(yuǎn)志原藥材，加入5~10倍量體積百分比濃度為 70%~95%的甲醇溶液回流提取，提取液經(jīng)濾過、經(jīng)減壓回收甲醇后，加入體積 百分比濃度為10%~30%的鹽酸10~30倍量，于80 10CTC的溫度下加熱水解 2h 4h后過濾出沉淀物，所得沉淀物經(jīng)烘干后即得半成品。通過分析型高效液相 色譜儀以峰面積歸一法測得遠(yuǎn)志酸的含量為30%~40%，遠(yuǎn)志皂苷元的含量為 45%~55%。所述分析型高效液相色譜儀的色譜條件是色譜柱十八烷基鍵合硅膠(4.6x250mm， 5pim);流動(dòng)相四氫呋喃-水-有機(jī)酸系統(tǒng)，其中有機(jī)酸是甲酸、 冰醋酸或磷酸；流速1.0ml/min;柱溫室溫；檢測波長210nm。所述流動(dòng)相中四氫呋喃、水、有機(jī)酸的體積比為30 60 : 40~70 : 0.1 1。B、 半成品的溶解將步驟A制得的半成品，按每克半成品加四氫呋喃3 8 毫升于50 6(TC的水浴下加溫?cái)嚢枞芙猓氤善啡咳芙夂螅x用0.45pm有 機(jī)相濾膜對(duì)溶液進(jìn)行過濾，收集濾液待用。C、 成品的分離純化將步驟B所得的濾液，用高壓輸液泵泵入高效制備液 相色譜柱，每次15~250毫升，以四氫呋喃-水-有機(jī)酸30~60 : 40~70 : 0.1 1(V/V/V)為洗脫流動(dòng)相，其中有機(jī)酸是甲酸、冰醋酸或磷酸，流速為60~500ml/min，以紫外檢測器在210nm的波長下進(jìn)行跟蹤檢測，根據(jù)色譜圖分 段收集目標(biāo)流份遠(yuǎn)志酸與目標(biāo)流份"II"一遠(yuǎn)志皂苷元；回收溶劑后，再采用高效液相色譜儀用峰面積歸一化法對(duì)各流份進(jìn)行純度檢測，純度為98%以上的流份為合格成品，純度低于98%的流份"i "與"n"重復(fù)上述步驟B與C。所述高效制備液相色譜柱的填料為小顆粒球形十八烷基鍵合反相硅膠，粒徑 為10^n 30nm,孔徑為100 A，色譜柱規(guī)格為50 150mmx250mm。 本發(fā)明的有益效果表現(xiàn)在-1、 采用分析型高效液相色譜儀分析遠(yuǎn)志酸和遠(yuǎn)志皂苷時(shí)，曾采用甲醇-水-有機(jī)酸系統(tǒng)及乙腈-水-有機(jī)酸系統(tǒng)作為流動(dòng)相，發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)志酸、遠(yuǎn)志皂苷元兩個(gè)峰 的分離度很差，未能達(dá)到基線分離。而采用本發(fā)明所述的四氫呋喃-水-有機(jī)酸系 統(tǒng)作為流動(dòng)相，兩個(gè)峰卻分得很開，分離度很好，優(yōu)于2005版藥典中遠(yuǎn)志藥材 含量測定項(xiàng)下的分析條件，為同時(shí)定量分析遠(yuǎn)志酸和遠(yuǎn)志皂苷元提供了可能。2、 由于遠(yuǎn)志酸和遠(yuǎn)志皂苷的溶解性很差，采用甲醇、乙腈等高效液相色譜 常用溶劑均不能較好的對(duì)其進(jìn)行溶解，而本發(fā)明通過采用四氫呋喃溶劑卻有效地 解決了遠(yuǎn)志酸和遠(yuǎn)志皂苷半成品的溶解性問題，從而大大提高了后續(xù)步驟高效制 備液相色譜分離系統(tǒng)的處理量，提高了生產(chǎn)效率。3、 本發(fā)明選用四氫呋喃-水-有機(jī)酸系統(tǒng)作為高效制備液相色譜法的洗脫流 動(dòng)相，極大地提升了雜質(zhì)與目標(biāo)產(chǎn)物的分離度， 一次性就能夠迅速解決遠(yuǎn)志酸和 遠(yuǎn)志皂苷元的同步分離，時(shí)間消耗少，有機(jī)溶劑可再回收利用，且遠(yuǎn)志酸和遠(yuǎn)志 皂苷元含量均達(dá)到98%以上。4、 本發(fā)明整體工藝高效，環(huán)保，得率高，適合工業(yè)化生產(chǎn)。


圖1為本發(fā)明半成品的高效液相色譜圖 圖2為本發(fā)明制備遠(yuǎn)志酸和遠(yuǎn)志皂苷的高效液相色譜圖 圖3為本發(fā)明遠(yuǎn)志酸單體(含量>98%)的高效液相色譜圖 圖4為本發(fā)明遠(yuǎn)志皂苷元單體(含量>98%)的高效液相色譜圖具體實(shí)施方式
實(shí)施例l一種遠(yuǎn)志酸和遠(yuǎn)志皂苷元的分離提純方法，其特征在于按如下工藝步驟進(jìn)行A、 半成品的制備取遠(yuǎn)志原藥材10千克，加入80升體積百分比濃度為70%的甲醇溶液回流提取，提取液經(jīng)濾過、經(jīng)減壓回收甲醇后，加入體積百分比濃度為30%的鹽酸30倍量，于90'C的溫度下加熱水解4小時(shí)后過濾出沉淀物，所得 沉淀物經(jīng)烘干后即得半成品200克；通過分析型高效液相色譜儀以峰面積歸一法 測得遠(yuǎn)志酸、遠(yuǎn)志皂苷元的含量分別為的32%、 50%。所述分析型高效液相色譜儀的色譜條件是色譜柱十八垸基鍵合硅膠(4.6x250mm， 5pm);流動(dòng)相四氣呋喃-水-磷酸(30:70:0.1) (V/V/V);流 速1.0ml/min;柱溫室溫；檢測波長210nm。B、 半成品的溶解取30克步驟A制得的半成品，加四氫呋喃150毫升于 50 6(TC的水浴下加溫?cái)嚢枞芙猓氤善啡咳芙夂螅x用0.45拜有機(jī)相濾膜 對(duì)溶液進(jìn)行過濾，收集濾液待用。C、 成品的分離純化將步驟B所得的濾液，用高壓輸液泵泵入高效制備液相色譜柱， 一次30毫升，以四氫呋喃-水-磷酸(60 : 40 : o.i) (v/v/v)為洗脫流動(dòng)相，流速為60ml/min，以紫外檢測器在210nm的波長下進(jìn)行跟蹤檢測，根據(jù)色譜圖分段收集目標(biāo)流份"r'一遠(yuǎn)志酸與目標(biāo)流份"n"—遠(yuǎn)志皂苷元；再采用高效液相色譜儀用峰面積歸一化法對(duì)各流份進(jìn)行純度檢測，分別合并純度為98%以上的流份"1"與"n"，回收溶劑后，再將流份"r，與"n"烘干，分別得到純度達(dá)98%以上的遠(yuǎn)志酸單體7克、遠(yuǎn)志皂苷元單體6克。純度低于98%的流份"i"與"n"。純度低于98%的流份"i"與"n"經(jīng)濃縮后重復(fù)上述步驟B、 c分離純化至純度達(dá)到98%以上，再次分別得遠(yuǎn)志酸、遠(yuǎn)志皂苷元合格產(chǎn)品1.6g、 3.1g，得率分別為卯％、 61%。所述高效制備液相色譜柱的填料選用粒徑為lOnm、孔徑為100 A的小顆粒 球形十八垸基鍵合反相硅膠，規(guī)格為50mmx250mm。實(shí)施例2一種遠(yuǎn)志酸和遠(yuǎn)志皂苷元的分離提純方法，其特征在于按如下工藝步驟進(jìn)行A、 半成品的制備取遠(yuǎn)志原藥材10千克，加入50升體積百分比濃度為80% 的甲醇溶液回流提取，提取液經(jīng)濾過、經(jīng)減壓回收甲醇后，加入體積百分比濃度為20%的鹽酸20倍量，于100'C的溫度下加熱水解2小時(shí)后過濾出沉淀物，所 得沉淀物經(jīng)烘干后即得半成品190克；通過分析型高效液相色譜儀以峰面積歸一 法測得遠(yuǎn)志酸、遠(yuǎn)志皂苷元的含量分別為的34%、 52%。所述分析型高效液相色譜儀的色譜條件是色譜柱十八烷基鍵合硅膠 (4.6x250mm， 5—;流動(dòng)相四氫呋喃-水-甲酸(50 : 50 : 0.5)(曹/V);流 速1.0ml/min;柱溫室溫；檢測波長210nm。B、 半成品的溶解取100克步驟A制得的半成品，加四氫呋喃400毫升于 50 6(TC的水浴下加溫?cái)嚢枞芙猓氤善啡咳芙夂螅x用0.45拜有機(jī)相濾膜 對(duì)溶液進(jìn)行過濾，收集濾液待用。C、 成品的分離純化將步驟B所得的濾液，用高壓輸液泵泵入高效制備液 相色譜柱， 一次80毫升，以四氫呋喃-水-磷酸30 : 70 : 0.5 (V/V/V)為洗脫流 動(dòng)相，流速為220ml/min，以紫外檢測器在210nm的波長下進(jìn)行跟蹤檢測，根據(jù)色譜圖分段收集目標(biāo)流份"r'一遠(yuǎn)志酸與目標(biāo)流份"n"—遠(yuǎn)志皂苷元；再采用高效液相色譜儀用峰面積歸一化法對(duì)各流份進(jìn)行純度檢測，分別合并純度為98%以上的流份"i"與"n"，回收溶劑后，再將流份"r，與"n"烘干，分別得到純度達(dá)98%以上的遠(yuǎn)志酸單體25克、遠(yuǎn)志皂苷元單體23克。純度低于98%的流份"i "與"n"。純度低于98%的流份"i"與"n"經(jīng)濃縮后重復(fù)上述步驟B、 C分離純化至純度達(dá)到98%以上，再次分別得遠(yuǎn)志酸、遠(yuǎn)志皂苷元合格產(chǎn)品5g、 9.7g, 得率分別為88%、 63%。所述高效制備液相色譜柱的填料選用粒徑為20^im、孔徑為100 A的小顆粒 球形十八烷基鍵合反相硅膠，規(guī)格為150mmx250mm。實(shí)施例3一種遠(yuǎn)志酸和遠(yuǎn)志皂苷元的分離提純方法，其特征在于按如下工藝步驟進(jìn)行A、半成品的制備取遠(yuǎn)志原藥材10千克，加入100升體積百分比濃度為 95%的甲醇溶液回流提取，提取液經(jīng)濾過、經(jīng)減壓回收甲醇后，加入體積百分比濃度為10%的鹽酸10倍量，于8(TC的溫度下加熱水解3小時(shí)后過濾出沉淀物， 所得沉淀物經(jīng)烘干后即得半成品180克；通過分析型高效液相色譜儀以峰面積歸 一法測得遠(yuǎn)志酸、遠(yuǎn)志皂苷元的含量分別為的35%、 51%。所述分析型高效液相色譜儀的色譜條件是色譜柱十八垸基鍵合硅膠(4.6x250rmn， 5pm);流動(dòng)相四氫呋喃-水-冰醋酸(60 : 40 : 1) (V/V/V);流 速1.0ml/min;柱溫室溫；檢測波長210nm。B、 半成品的溶解取150克步驟A制得的半成品，加四氫呋喃500毫升于 50 6(TC的水浴下加溫?cái)嚢枞芙猓氤善啡咳芙夂螅x用0.45pm有機(jī)相濾膜 對(duì)溶液進(jìn)行過濾，收集濾液待用。C、 成品的分離純化將步驟B所得的濾液，用高壓輸液泵泵入高效制備液 相色譜柱， 一次250毫升，以四氫呋喃-水-冰醋酸(40 : 60 : 1) (V/V/V)為洗 脫流動(dòng)相，流速為500mlAnin，以紫外檢測器在210nm的波長下進(jìn)行跟蹤檢測， 根據(jù)色譜圖分段收集目標(biāo)流份"I"一遠(yuǎn)志酸與目標(biāo)流份"II"一遠(yuǎn)志皂苷元；再 采用高效液相色譜儀用峰面積歸一化法對(duì)各流份進(jìn)行純度檢測，分別合并純度為98%以上的流份"1"與"n"，回收溶劑后，再將流份"r，與"n"烘干，分別得到純度達(dá)98%以上的遠(yuǎn)志酸單體39克、遠(yuǎn)志皂苷元單體35克。純度低于98% 的流份"I"與"II"。純度低于98°/。的流份"I"與"n"經(jīng)濃縮后重復(fù)上述步驟B、 C分離純化至純度達(dá)到98X以上，再次分別得遠(yuǎn)志酸、遠(yuǎn)志皂苷元合格產(chǎn)品7g、 16g，得率分別為88%、 67%。所述高效制備液相色譜柱的填料選用粒徑為30pm、孔徑為100 A的小顆粒 球形十八烷基鍵合反相硅膠，規(guī)格為150mmx250mm。
權(quán)利要求
1、一種遠(yuǎn)志酸和遠(yuǎn)志皂苷元的分離提純方法，包括步驟A半成品的制備、步驟B半成品的溶解及步驟C成品的分離純化，其特征在于它是以甲醇回流提取遠(yuǎn)志原藥材、經(jīng)鹽酸水解制備得到半成品后，采用分析型高效液相色譜儀測定遠(yuǎn)志酸和遠(yuǎn)志皂苷元的含量；然后選用四氫呋喃溶劑溶解半成品，以四氫呋喃、水和有機(jī)酸的混合溶劑作為洗脫流動(dòng)相，采用高效制備液相色譜分離系統(tǒng)，對(duì)半成品溶解步驟獲得的過濾物進(jìn)行洗脫分離后得到純度均大于98％的遠(yuǎn)志酸和遠(yuǎn)志皂苷元純品。
2、 如權(quán)利要求l所述的分離提純方法，其特征在于所述步驟A半成品的制 備為取遠(yuǎn)志原藥材，加入5 10倍量體積百分比濃度為70% 95%的甲醇溶液回 流提取，提取液經(jīng)濾過、經(jīng)減壓回收甲醇后，加入體積百分比濃度為10%~30% 的鹽酸10~30倍量，于80 100'C的溫度下加熱水解2h 4h后過濾出沉淀物，所 得沉淀物經(jīng)烘干后即得半成品。
3、 如權(quán)利要求2所述的分離提純方法，其特征在于所述半成品通過分析型 高效液相色譜儀以峰面積歸一法測得遠(yuǎn)志酸的含量為30%~40%，遠(yuǎn)志皂苷元的 含量為45%~55%。
4、 如權(quán)利要求1或3所述的分離提純方法，其特征在于所述分析型高效液 相色譜儀以四氫呋喃-水-有機(jī)酸系統(tǒng)為流動(dòng)相，其中有機(jī)酸是甲酸、冰醋酸或磷 酸。
5、 如權(quán)利要求4所述的分離提純方法，其特征在于所述流動(dòng)相中四氫呋喃、 水、有機(jī)酸的體積比為30~60 : 40-70 : 0.1~1。
6、 如權(quán)利要求l所述的分離提純方法，其特征在于所述步驟B半成品的溶 解為按每克半成品加四氫呋喃3~8毫升于50 60'C的水浴下加溫?cái)嚢柚涟氤善?全部溶解，溶液用有機(jī)相濾膜過濾，收集濾液待用。
7、 如權(quán)利要求1所述的分離提純方法，其特征在于所述步驟C成品的分離 純化為將步驟B所得的濾液，用高壓輸液泵泵入高效制備液相色譜柱，每次 15 250毫升，以四氫呋喃-水-有機(jī)酸30~60 : 40~70 : 0.1~1為洗脫流動(dòng)相，其中 有機(jī)酸是甲酸、冰醋酸或磷酸，流速為60~500ml/min，以紫外檢測器在210nm的波長下進(jìn)行跟蹤檢測，根據(jù)色譜圖分段收集目標(biāo)流份"I "一遠(yuǎn)志酸與目標(biāo)流 份"II"一遠(yuǎn)志皂苷元；回收溶劑后，再采用高效液相色譜儀用峰面積歸一化法對(duì) 各流份進(jìn)行純度檢測，純度為98%以上的流份為合格成品，純度低于98%的流份"i "與"n"重復(fù)上述步驟b與c。
8、如權(quán)利要求7所述的分離提純方法，其特征在于所述高效制備液相色譜 柱的填料為小顆粒球形十八垸基鍵合反相硅膠，粒徑為1(Him 30(im，孔徑為100 A，色譜柱規(guī)格為50 150mmx250mm。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種遠(yuǎn)志酸和遠(yuǎn)志皂苷元的高效分離提純方法，它是以甲醇回流提取遠(yuǎn)志原藥材、經(jīng)鹽酸水解制備得到半成品后，采用分析型高效液相色譜儀測定遠(yuǎn)志酸和遠(yuǎn)志皂苷元的含量；然后選用四氫呋喃溶劑溶解半成品，以四氫呋喃-水-有機(jī)酸的混合溶劑作為洗脫流動(dòng)相，采用高效制備液相色譜分離系統(tǒng)，對(duì)半成品溶解步驟獲得的過濾物進(jìn)行洗脫分離后得到純度均大于98％的遠(yuǎn)志酸和遠(yuǎn)志皂苷元純品。本發(fā)明可實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)志酸和遠(yuǎn)志皂苷元的同步分離，制備量大、收率高、產(chǎn)品純度好，適合工業(yè)化生產(chǎn)。同時(shí)本發(fā)明還提供了一種遠(yuǎn)志酸和遠(yuǎn)志皂苷元的高效液相色譜分析方法，極大的提高了遠(yuǎn)志酸和遠(yuǎn)志皂苷元在液相色譜圖中的分離度。
文檔編號(hào)A61K36/185GK101260138SQ20081004504
公開日2008年9月10日 申請(qǐng)日期2008年3月24日 優(yōu)先權(quán)日2008年3月24日
發(fā)明者丁 劉, 黎 張, 王妙聞, 董維珍 申請(qǐng)人:成都普思生物科技有限公司