專利名稱：：一種中藥組合物在制備抑制核轉(zhuǎn)錄因子活化藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種已知的中藥組合物在制備抑制核轉(zhuǎn)錄因子(NF-kB)活化藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：核轉(zhuǎn)錄因子(NF-kB)是一重要的轉(zhuǎn)錄因子，在調(diào)解免疫系統(tǒng)和其他非免疫系統(tǒng)的基因表達(dá)中起著重要的作用。激活的NF-kB可調(diào)節(jié)以下基因的表達(dá)，如cytokines,生長(zhǎng)因子，T-細(xì)胞受體，B-細(xì)胞受體，腫瘤壞死因子阿爾發(fā)受體，CD40，BAFF-BAFF受體，淋巴毒素-貝它受體，和Toll/白細(xì)胞介素受體。調(diào)節(jié)NF-KB的活性發(fā)生在幾個(gè)層面，包括控制NF-kB細(xì)胞質(zhì)-細(xì)胞核的穿梭及調(diào)控其轉(zhuǎn)錄活性。雖然NF-KB在維持細(xì)胞的許多功能中起著非常重要的作用。然而NF-KB能否作為有效的靶點(diǎn)來治療疾病卻未知。更無以NF-icB為靶點(diǎn)并應(yīng)用其抑制劑來治療目前尚無有效治療方法的病毒性疾病，癌癥，慢性炎癥和自身免疫疾病的先例。眾所周知，NF-KB在調(diào)節(jié)眾多促炎性介體的表達(dá)中起著關(guān)鍵作用，所述介體包括細(xì)胞因子，例如IL-6和IL-8;細(xì)胞粘附分子，如ICAM和VCAM;以及一氧化氮合成誘導(dǎo)酶(iNOS)。這些介體已知在炎癥部位的白細(xì)胞募集中起作用，并且在某些炎癥和自身免疫疾病中，iNOS可導(dǎo)致器官的破壞。通過對(duì)包括哮喘在內(nèi)的呼吸道炎癥的研究，更增強(qiáng)了NF-kB在炎癥中的重要性，據(jù)顯示在哮喘中NF-KB被活化。這種活化作用可能是這些疾病中細(xì)胞因子產(chǎn)生增加和白細(xì)胞浸潤(rùn)的基礎(chǔ)。另外，已知吸入類甾醇可減弱呼吸道的過度反應(yīng)性并抑制哮喘呼吸道的炎癥反應(yīng)。鑒于最近有關(guān)糖皮質(zhì)激素對(duì)NF-kB的抑制作用的發(fā)現(xiàn)，人們可能會(huì)想到這些作用是通過抑制NF-kB介導(dǎo)的。其它有關(guān)NF-icB在炎癥性疾病中的作用的證據(jù)來自類風(fēng)濕性滑膜的研究。雖然NF-kB—般以沒有活性的復(fù)合物形式存在于胞漿中，但最近的免疫組織化學(xué)研究表明在包含類風(fēng)濕性滑膜的細(xì)胞中，NF-kB存在于細(xì)胞中，因此是有活性的。此外，據(jù)顯示在對(duì)TNF-a敏感的人滑膜細(xì)胞中NF-kB是活化形式的。這種分布可能是該組織特征性細(xì)胞因子和類花生酸產(chǎn)生增加的基礎(chǔ)機(jī)制。受到NF-kB表達(dá)調(diào)節(jié)的基因不僅僅有iNOS和TNF-a，還有參與免疫炎癥反應(yīng)的IL-1、IL-6、IL-8等炎性細(xì)胞因子，ICAM-1、VCAM-1、ELAM-1等細(xì)胞粘附分子。更進(jìn)一步，已知炎性細(xì)胞因子通過結(jié)合于受體和各種通路來傳遞活化NF-icB的信號(hào)，這被認(rèn)為是炎癥更惡化的原因。這樣，在炎癥中NF-KB的活化可認(rèn)為是疾病的原因和惡化因子。所以，阻斷NF-icB的活化能夠抑制這些炎性細(xì)胞因子和粘附分子的基因和病毒的表達(dá)誘導(dǎo)，NF-kB抑制物質(zhì)有希望成為以NF-icB活化為直接或間接原因的疾病、特別是各種炎性疾病、自身免疫性疾病的治療藥物，免疫抑制劑，病毒性疾病的治療藥物。本申請(qǐng)人已經(jīng)申請(qǐng)了專利號(hào)為00131558.7、名稱為"一種治療中風(fēng)的藥物及其生產(chǎn)方法"、授權(quán)公告日為2003年6月11日、公開號(hào)為CN1111054C。該發(fā)明公開了一種治療中風(fēng)的中藥制劑，其主要活性原料的組份和重量百分含量為紅參6.05-15.8、三七8.95-10.08、當(dāng)歸5.12-8.34;雞血藤7,76-8.97、丹參8.01-11.13、紅花5.18-8,84;銀杏葉8.87-10.11、山楂7.76-8.55、菊花5.78-6.89、石決明5.80-6.53、何首烏7.77-8.84、石菖蒲5.03-5.74、葛根7.56-8.65。該藥物是將上述中藥原料利用醇提、水提等現(xiàn)代制藥生產(chǎn)工藝制成膠囊劑或顆粒劑、口服液、片劑。該藥物具有益氣活血、化瘀通絡(luò)、熄風(fēng)豁痰之功效，能抑制、消除動(dòng)脈粥樣硬化，抑制高膽固醇與高血脂、通血脈溶血栓、抗腦血管老化等功效，主治缺血性中風(fēng)(腦梗塞)、恢復(fù)期中經(jīng)絡(luò)之氣虛血瘀證、風(fēng)痰瘀血閉阻脈絡(luò)證，也可用于缺血性中風(fēng)急性期之早期，療效顯著，治療病譜寬，且標(biāo)本兼治。其藥品名稱為"腦脈泰"，由于其療效確切，至上市以來，贏得了廣大患者的信賴。近年來，本申請(qǐng)人繼續(xù)挖掘上述組合物的其他功效，功夫不負(fù)有心人，經(jīng)過近年的臨床與試驗(yàn)研究，本申請(qǐng)人發(fā)現(xiàn)上述中藥組合物還有抑制NF-kB活化的作用，而且到目前為止，還未發(fā)現(xiàn)上述組合物抑制NF-KB活化的報(bào)道。雖然有上述組合物治療中風(fēng)的報(bào)道，但中風(fēng)的治療是結(jié)果，并未詳細(xì)說明是通過哪一個(gè)或幾個(gè)環(huán)節(jié)或靶點(diǎn)的作用而使中風(fēng)得到治療，亦未見上述組合物抑制NF-kB活化的報(bào)道。本申請(qǐng)人通過潛心研究，發(fā)現(xiàn)所述組合物還有抑制NF-KB活化的作用，從而可用于治療一些由NF-kB活化所引起的疾病，成為一種新的治療NF-icB活化所致疾病的靶向藥物。有鑒于此，特提出本發(fā)明。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種中藥組合物在制備抑制核轉(zhuǎn)錄因子(NF-kB)活化藥物中的應(yīng)用。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案一種中藥組合物在制備抑制核轉(zhuǎn)錄因子(NF-kB)活化藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物的主要活性原料的組份和重量百分含量如下紅參6.0515.S、三七8.9510.08、當(dāng)歸5.128.34;雞血藤7.768.97、丹參8.0111.13、紅花5.188.84;銀杏葉8.8710.11、山楂7.768.55、菊花5.786.89、石決明5.806.53、何首烏7.778.84、石菖蒲5.035.74、葛根7.568.65。本發(fā)明所述的中藥組合物在制備治療核轉(zhuǎn)錄因子(NF-kB)活化所致疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所述的中藥組合物在制備核轉(zhuǎn)錄因子(NF-kB)活化所致類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松、炎癥性腸病、哮喘、皮膚病、自身免疫性疾病、組織和器官排斥反應(yīng)、阿爾茨海默氏病、血管性癡呆、中風(fēng)、動(dòng)脈粥樣硬化或再狹窄疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明中，所述藥物的劑型為任何一種藥劑學(xué)上所說的劑型，優(yōu)選膠囊劑、顆粒劑、口服液或片劑。所述藥物的制備方法可參見本申請(qǐng)人已經(jīng)申請(qǐng)了專利號(hào)為00131558.7、名稱為"一種治療中風(fēng)的藥物及其生產(chǎn)方法"、授權(quán)公告日為2003年6月11日、公開號(hào)為CN1111054C的發(fā)明專利。受到NF-kB表達(dá)調(diào)節(jié)的基因不僅僅有iNOS和TNF-a，還有參與免疫炎癥反應(yīng)的IL-1、IL-6、IL-8等炎性細(xì)胞因子，ICAM-1、VCAM-1、ELAM-1等細(xì)胞粘附分子。更進(jìn)一步的，巳知炎性細(xì)胞因子通過結(jié)合于受體和各種通路來傳遞活化NF-icB的信號(hào)，這被認(rèn)為是炎癥更惡化的原因。這樣，在炎癥中NF-KB的活化可認(rèn)為是疾病的原因和惡化因子。所以，阻斷NF-!cB的活化能夠完全抑制這些炎性細(xì)胞因子和粘附分子的基因和病毒的表達(dá)誘導(dǎo)，NF-kB抑制物質(zhì)有希望成為以NF-KB活化為直接或間接原因的疾病、特別是各種炎性疾病、自身免疫性疾病的治療藥物，免疫抑制劑，病毒性疾病的治療藥物。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)上述中藥組合物可以下調(diào)NF-kB的表達(dá)，降低NF-kB的活化，同時(shí)下調(diào)ICAM-1、TNF-a、IL-13蛋白的表達(dá)，因而，上述中藥組合物可用于治療NF-kB活化所致疾病，從而成為一種新的治療NF-kB活化所致疾病的革巴向藥物。圖l-A為Sham組對(duì)MCAO模型大鼠TUNEL蛋白表達(dá)的影響；圖l-B為腦脈泰大劑量組對(duì)MCAO模型大鼠TUNEL蛋白表達(dá)的影響；5圖l-C為腦脈泰中劑量組對(duì)MCAO模型大鼠TUNEL蛋白表達(dá)的影響；圖l-D為腦脈泰小劑量組對(duì)MCAO模型大鼠TUNEL蛋白表達(dá)的影響；圖1-E為MCAO組對(duì)MCAO模型大鼠TUNEL蛋白表達(dá)的影響；圖2-A為Sham組對(duì)MCAO模型大鼠ICAM-1蛋白表達(dá)的影響；圖2-B為MCAO組對(duì)MCAO模型大鼠ICAM-1蛋白表達(dá)的影響；圖2-C為腦脈泰大劑量組對(duì)MCAO模型大鼠ICAM-1蛋白表達(dá)的影響；圖2-D為腦脈泰中劑量組對(duì)MCAO模型大鼠ICAM-1蛋白表達(dá)的影響；圖2-E為腦脈泰小劑量組對(duì)MCAO模型大鼠ICAM-1蛋白表達(dá)的影響；圖3-A為Sham組對(duì)MCAO模型大鼠TNF-a蛋白表達(dá)的影響；圖3-B為MCAO組對(duì)MCAO模型大鼠TNF-a蛋白表達(dá)的影響；圖3-C為腦脈泰大劑量組對(duì)MCAO模型大鼠TNF-a蛋白表達(dá)的影響；圖3-D為腦脈泰中劑量組對(duì)MCAO模型大鼠TNF-a蛋白表達(dá)的影響；圖3-E為腦脈泰小劑量組對(duì)MCAO模型大鼠TNF-a蛋白表達(dá)的影響；圖4-A為Sham組對(duì)MCAO模型大鼠IL-1P蛋白表達(dá)的影響；圖4-B為MCAO組對(duì)MCAO模型大鼠IL-1P蛋白表達(dá)的影響；圖4-C為腦脈泰大劑量組對(duì)MCAO模型大鼠IL-1P蛋白表達(dá)的影響；圖4-D為腦脈泰中劑量組對(duì)MCAO模型大鼠IL-13蛋白表達(dá)的影響；圖4-E為腦脈泰小劑量組對(duì)MCAO模型大鼠IL-1e蛋白表達(dá)的影響；圖5-A為Sham組對(duì)MCAO模型大鼠NF-kB蛋白表達(dá)的影響；圖5-B為MCAO組對(duì)MCAO模型大鼠NF-kB蛋白表達(dá)的影響；圖5-C為腦脈泰大劑量組對(duì)MCAO模型大鼠NF-kB蛋白表達(dá)的影響；圖5-D為腦脈泰中劑量組對(duì)MCAO模型大鼠NF-kB蛋白表達(dá)的影響；圖5-E為腦脈泰小劑量組對(duì)MCAO模型大鼠NF-kB蛋白表達(dá)的影響。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，下述各實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而并非對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例1稱取以下中藥成分(單位g)紅參6三七9.0紅花5.5銀杏葉9.0何首烏7.5石菖蒲5.1當(dāng)歸5.5山楂7.8雞血藤7.8丹參8.5菊花6.0石決明5.9葛根7.6其生產(chǎn)步驟為1、取紅參4g,三七6g，粉碎，過80目篩，滅菌得中間產(chǎn)品A;2、剩余的紅參2g，三七3g與銀杏葉9.0g，丹參8.5g用4倍量70%的乙醇回流提取2小時(shí)，醇提液回收乙醇得中間產(chǎn)品B;3、醇提部分的藥渣與當(dāng)歸5.5g、雞血藤7.8g、紅花5.5g、山楂7.8g、菊花6.0g、石決明5.9g、何首烏7.5g、石菖蒲5.1g、葛根7.6g等九味藥材一起加5倍量水提取兩次，每次2小時(shí)，得提取液，與B部分混合，濃縮，得流浸膏，噴霧干燥，得中間產(chǎn)品干膏C;4、取中間產(chǎn)品A、C，混合制粒，用膠囊分裝，再用鋁箔包裝得成品，產(chǎn)品名稱為"三金腦脈泰膠囊"。實(shí)施例2稱取以下中藥成分(單位g):紅參8三七IO當(dāng)歸6雞血藤8.2丹參9.2紅花5.8銀杏葉9.5山楂8.1菊花6.6石決明6.6何首烏8.0石菖蒲5.5葛根7.9其生產(chǎn)步驟為-1、取全部紅參8g，三七10g與銀杏葉9.5g，丹參9.2g用4.5倍量60%的乙醇回流提取2小時(shí)，醇提液回收乙醇得中間產(chǎn)品B1;2、醇提部分的藥渣與當(dāng)歸6g、雞血藤8.2g、紅花5.8g、山楂8.1g、菊花6,6g、石決明6.6g、何首烏8.0g、石菖蒲5.5g、葛根7.9g等九味藥材一起加8倍量水提取兩次，每次2小時(shí)，得提取液，與Bi部分混合，濃縮，得相對(duì)密度為1.051.20/55-60。C的流浸膏C1;3、取中間產(chǎn)品流浸膏Cp與適量輔料混合制粒，分裝，包裝得成品，產(chǎn)品名稱為"三金腦脈泰顆粒"。實(shí)施例3稱取以下中藥成分(單位g):紅參IO三七8當(dāng)歸7雞血藤8.5丹參10.2紅花6.5銀杏葉IO山楂8.2菊花6.5石決明6.2何首烏8.5石菖蒲5.3葛根8.3其生產(chǎn)步驟為1、取全部紅參10g，三七8g與銀杏葉10g，丹參10.2g用7倍量50%的乙醇回流提取23小時(shí)，醇提液回收乙醇得中間產(chǎn)品B2;2、醇提部分的藥渣與當(dāng)歸7g、雞血藤8.5g、紅花6.5g、山楂8.2g、菊花6.5g、石決明6.2g、何首烏8.5g、石菖蒲5.3g、葛根8.3g等九味藥材一起加8倍量水提取兩次，每次2小時(shí)，得提取液，與B2部分混合，濃縮，得相對(duì)密度為1.051.20/55-60。C的流浸膏C2;3、取中間產(chǎn)品流浸膏C2，與適量糖漿或蜂蜜混勻，滅菌，分裝，再滅菌，包裝得成品，產(chǎn)品名稱為"三金腦脈泰口服液"。實(shí)施例4稱取以下中藥成分(單位g):紅參8.0三七9.0當(dāng)歸5.8雞血藤8.0丹參8.8紅花5.6銀杏葉9.2山楂8.1菊花6.2石決明6.3何首烏7.8石菖蒲5.5葛根7.8其生產(chǎn)步驟為1、取紅參5g，三七5g，粉碎，過80目篩，滅菌得中間產(chǎn)品A3;2、剩余的紅參3g，三七4g與銀杏葉9.2g，丹參8.8g用5倍量70%的乙醇回流提取2-3小時(shí)，醇提液回收乙醇得中間產(chǎn)品B3;3、醇提部分的藥渣與當(dāng)歸5.8g、雞血藤8.0g、紅花5.6g、山楂8.1g、菊花6.2g、石決明6.3g、何首烏7.8g、石菖蒲5.5g、葛根7.8g等九味藥材一起加5倍量水提取兩次，每次2小時(shí)，得提取液，與B3部分混合，濃縮，得流浸膏，噴霧干燥，得中間產(chǎn)品干膏C3;4、取中間產(chǎn)品A3、C3，混合制粒，壓片，包裝，得成品，產(chǎn)品名稱為"三金腦脈泰片"。下面本申請(qǐng)人將通過具體的藥效學(xué)試驗(yàn)對(duì)該中藥組合物具有抑制NF-kB活化的用途進(jìn)行說明。1試驗(yàn)材料和方法1.1材料(l)藥品與試劑腦脈泰膠囊桂林三金藥業(yè)股份有限公司批號(hào)(060801)，規(guī)格0.5g/粒，含生藥材1.865g。尼莫地平山西亞寶藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司批號(hào)國藥準(zhǔn)字H14022821號(hào)規(guī)格20mg/片；兔抗ICAM-1、IL-1P、NF-kB和TNF-a多克隆抗體購自武漢博士德公司和上海生工生物工程有限公司。SDS、甘氨酸、過硫酸胺、巰基乙醇、Tris、EDTA、瓊脂糖、溴化乙錠為Sigma公司產(chǎn)品。MPO測(cè)定試劑盒購自南京建成生物工程研究所。(2)動(dòng)物SpragueDawley(SD)大鼠，雄性，體重(300土30)g，清潔級(jí)，購自中南大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部。(3)主要儀器設(shè)備深低溫冰箱(-80。C)美國(IMP公司)；高速低溫離心機(jī)(德國Eppendorf公司)；JY3002型電子天平(上海)；722分光光度計(jì)、HHS-2電子恒溫不銹鋼水浴鍋(上海)；LEICADMLB2型雙目顯微鏡(德國)；OLYMPUS光學(xué)顯微鏡(日本)；Haier醫(yī)用微波爐；MIAS醫(yī)學(xué)圖象分析系統(tǒng)；S2-93自動(dòng)雙重純水蒸餾器(上海)；Shandon325型石蠟切片機(jī)(英國)；DNP-9162型電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海)；MoticB5顯微攝像系統(tǒng)(麥克奧迪)；DU-7紫外分光光度計(jì)((DU800，Beckman公司，美國)；HPIAS-1000高清晰度彩色病理圖像分析系統(tǒng)(美國)。1.2方法1.2.1分組SD大鼠，隨機(jī)分成假手術(shù)組(sham-operation)、腦缺血再灌注模型組(middlecerebralarteryocclusion,MCAO)、腦脈泰(2,24、1.12、0.56g'kg-lM￡(MCAO+腦脈泰)和尼莫地平組(MCAO+nimodipine)，每組10只。腦缺血再灌注模型腦脈泰組和尼莫地平組大鼠MCAO前五天，每天兩次灌胃給于腦脈泰2.24、1.12、0.56g，kg-l體重；尼莫地平組每天兩次灌胃給于尼莫地平10mgkg-l體重。大腦中動(dòng)脈栓塞(MCAO)90分鐘，再灌注24小時(shí)。1.2.2局灶性腦缺血再灌注模型制作按Longa法制作大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型大鼠稱重，腹腔注射體積分?jǐn)?shù)10%水合氯醛3mlkg"麻醉，做頸部正中切口，暴露右頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈和頸內(nèi)動(dòng)脈，在頸外動(dòng)脈距其始端約2mm處做一小切口，用一端烤成小球形的3-0尼龍線小球端經(jīng)切口處插入頸外動(dòng)脈，再經(jīng)頸內(nèi)動(dòng)脈至大腦中動(dòng)脈始端，栓塞大腦中動(dòng)脈，造成局灶性腦缺血大鼠腦缺血90分鐘后，拔出尼龍線，恢復(fù)腦組織供血。假手術(shù)組大鼠在尼龍線小球端插入至大腦中動(dòng)脈始端后，立即拔出實(shí)驗(yàn)過程中維持直腸溫度在37'C。1.2.3組織處理和免疫組化染色腦缺血再灌注24h后，用10%水合氯醛麻醉大鼠，打開胸腔，于右心耳部剪一小口，從左心室插入導(dǎo)管至主動(dòng)脈，向主動(dòng)脈內(nèi)緩慢注入37t:肝素化的生理鹽水200ml，至右心房流出液變清亮，然后注入4%的多聚甲醛磷酸鹽緩沖液350ml,灌流固定30min后，斷頭取腦，放入相同固定液中固定72h。經(jīng)梯度酒精脫水、二甲苯透明、浸蠟、包埋，以視交叉和其后4mm處冠狀切片，片厚4nm。載玻片經(jīng)多聚賴氨酸處理。凋亡細(xì)胞檢測(cè)采用TUNEL法原位標(biāo)記DNA片段檢測(cè)凋亡，試劑盒由武漢博士德公司購得，嚴(yán)格按說明書進(jìn)行操作。用兔抗ICAM-1、IL-ie、NF-kB禾PTNF-a多克隆抗體進(jìn)行SABC免疫組化染色，檢測(cè)ICAM-1、IL-1P、NF-kB和TNF-a的蛋白表達(dá)，具體步驟按試劑盒說明書進(jìn)行石蠟切片脫蠟至水；新鮮配置3%過氧化氫孵育10min以滅活內(nèi)源性酶，蒸餾水洗2minX3次；熱修復(fù)抗原將切片浸入O.OlmolL—1枸櫞酸鹽緩沖液(pH6.0)，98°C恒溫水浴10min，冷卻至室溫；0.1molL"PBS洗滌2minX2次；滴加抗原修復(fù)液，室溫10min，蒸餾水洗2minX3次；滴加正常山羊血清封閉液，室溫孵育20min，傾去多余液體；滴加1:200的兔抗多克隆抗體，4'C孵育過夜；O.lmolL—1PBS洗，2minX3次；滴加生物素化山羊抗兔IgG，37。C孵育20min;O.lmol-U1PBS洗，2minX3次；滴加鏈霉親和素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物(SABC)，37'C孵育20min;0.1mo卜L"PBS洗，5minX4次；DAB顯色，蘇木素輕度復(fù)染；梯度酒精脫水，透明，封片，光鏡下觀察。根據(jù)大鼠腦缺血半暗帶的定位方法，將大腦中動(dòng)脈阻塞的同側(cè)額頂葉皮質(zhì)上部界定為半暗帶的等值區(qū)。陽性免疫反應(yīng)產(chǎn)物為棕黃色或棕褐色，呈顆粒狀，背景呈紫藍(lán)色。TUNEL陽性物質(zhì)位于細(xì)胞核內(nèi)。TNF-a陽性物質(zhì)位于胞質(zhì)，ICAM-1陽性物質(zhì)位于細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)，ICAM-1的表達(dá)主要在微血管內(nèi)皮細(xì)胞，NF-kB陽性細(xì)胞的細(xì)胞核染成黃褐色，采用NikonECLIPSEE600全自動(dòng)圖像分析系統(tǒng)，在400倍的視野下，隨機(jī)選取5個(gè)視野，計(jì)數(shù)TNF-ci、IL-1I3陽性細(xì)胞數(shù)；測(cè)定ICAM-1陽性表達(dá)的血管內(nèi)皮細(xì)胞時(shí)計(jì)數(shù)陽性血管數(shù)目。1.2.4腦組織髓過氧化物酶(MPO)活性測(cè)定取損傷側(cè)腦組織，經(jīng)冰冷生理盆水漂洗，除去血液，濾紙拭干，稱重，加入配制的MPO勻漿介質(zhì)(0.0001mmol七-1Na2EDTA溶液)制成10%腦組織勻漿，不離心。取組織勻漿上清200ul，按MPO試劑盒操作步驟，依次加入底物及顯色劑，混勻，37'C水浴30分鐘，加入供氫體，60。C水浴10分鐘，取出后立即在460mm處，lcm光徑，蒸餾水調(diào)零，測(cè)各管OD值。一個(gè)酶活力單位(U)表示每克組織濕片在37'C的反應(yīng)體系中11202被分解lpmol。計(jì)算公式為MPO活力(U/g'組織濕片)K測(cè)定管OD值一空白管OD值)/(11.3X取樣量)1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有資料用X士S表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS11.0軟件。多組間均數(shù)比較用F檢驗(yàn)，均數(shù)間兩兩比較用q檢驗(yàn)。2結(jié)果2.1腦脈泰和對(duì)大鼠半暗帶神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響凋亡神經(jīng)元陽性細(xì)胞主要見于梗死灶周圍的紋狀體及額頂部皮質(zhì)，Sham組有少量凋亡細(xì)胞存在。MCAO組大鼠缺血1.5h再灌注24h時(shí)，可見較多凋亡細(xì)胞，其陽性率顯著增加，與Sham組比較有顯著差異(P<0.01)。腦脈泰大劑量組和中劑量組陽性率與MCAO組比較差異顯著(P<0.01)。見表1和圖1-A—E。10表l腦脈泰對(duì)腦缺血再灌注大鼠半暗帶凋亡細(xì)胞的影響(X±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>與Sham組比較AP<0.05，AAP<0.01;與MCAO組比較*P<0.05，**P<0.012.2腦脈泰對(duì)MCAO再灌注腦組織MPO活性(U/g'wettissue)的影響MCAO再灌注后，各組大鼠腦組織的MPO活性均明顯增高，與Sham組比較，升高顯著(PO.Ol)。腦脈泰大劑量組和中劑量組下調(diào)升高的MPO活性，與MCAO組比較，下調(diào)顯著(P0.05)。表2.腦脈泰對(duì)MCAO再灌注腦組織MPO活性比較(X±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注與Sham組比較AP<0.05，AAP<0.01;與MCAO組比較*P<0.05，**P<0.012.3腦脈泰對(duì)MCAO再灌注腦組織ICAM-1、TNF-a、IL-13、NF-kB免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞的影響腦脈泰大、中劑量組可顯著下調(diào)MCAO再灌注后升高的ICAM-1、TNF-a、IL-1e、NF-kb蛋白的表達(dá)(P<0.05,P<0.01)。見表3和圖2-A—E、圖3-A—E、圖4-A_E、圖5-A—E。表3腦脈泰對(duì)MCAO再灌注腦組織ICAM-1免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞的影響(X±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注與Sham組比較AP<0.05，AAP<0.01;與MCAO組比較*P<0.05，**P<0.01此外，臨床資料顯示，本發(fā)明所述的中藥組合物可用治療核轉(zhuǎn)錄因子活化所致類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松、炎癥性腸病、哮喘、皮膚病、自身免疫性疾病、組織和器官排斥反應(yīng)、阿爾茨海默氏病、血管性癡呆、中風(fēng)、動(dòng)脈粥樣硬化或再狹窄疾病。臨床資料顯示，治療上述疾病的總有效率達(dá)到90%，療效明顯高于其他藥物，且無明顯不良反應(yīng)和毒副作用。權(quán)利要求1、一種中藥組合物在制備抑制核轉(zhuǎn)錄因子活化藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物的主要活性原料的組份和重量百分含量如下紅參6.05～15.8、三七8.95～10.08、當(dāng)歸5.12～8.34；雞血藤7.76～8.97、丹參8.01～11.13、紅花5.18～8.84；銀杏葉8.87～10.11、山楂7.76～8.55、菊花5.78～6.89、石決明5.80～6.53、何首烏7.77～8.84、石菖蒲5.03～5.74、葛根7.56～8.65。2、權(quán)利要求1所述的中藥組合物在制備治療核轉(zhuǎn)錄因子活化所致疾病藥物中的應(yīng)用。3、權(quán)利要求2所述的中藥組合物在制備核轉(zhuǎn)錄因子活化所致類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松、炎癥性腸病、哮喘、皮膚病、自身免疫性疾病、組織和器官排斥反應(yīng)、阿爾茨海默氏病、血管性癡呆、中風(fēng)、動(dòng)脈粥樣硬化或再狹窄疾病藥物中的應(yīng)用。4、根據(jù)權(quán)利要求l-3任意一項(xiàng)所述的中藥組合物的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物的劑型為任何一種藥劑學(xué)上所說的劑型。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的中藥組合物的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物的劑型為膠囊劑、顆粒劑、口服液或片劑。全文摘要本發(fā)明涉及一種中藥組合物在制備抑制核轉(zhuǎn)錄因子(NF-κB)活化藥物中的應(yīng)用，所述藥物的主要活性原料的組份和重量百分含量如下紅參6.05～15.8、三七8.95～10.08、當(dāng)歸5.12～8.34；雞血藤7.76～8.97、丹參8.01～11.13、紅花5.18～8.84；銀杏葉8.87～10.11、山楂7.76～8.55、菊花5.78～6.89、石決明5.80～6.53、何首烏7.77～8.84、石菖蒲5.03～5.74、葛根7.56～8.65。所述中藥組合物具有抑制核轉(zhuǎn)錄因子(NF-κB)活化的作用，從而可用于治療一些由核轉(zhuǎn)錄因子(NF-κB)活化所引起的疾病，成為一種新的治療核轉(zhuǎn)錄因子(NF-κB)活化所致疾病的靶向藥物。文檔編號(hào)A61K36/88GK101653526SQ20081014751公開日2010年2月24日申請(qǐng)日期2008年8月20日優(yōu)先權(quán)日2008年8月20日發(fā)明者征王,鄒節(jié)明申請(qǐng)人:桂林三金藥業(yè)股份有限公司