專利名稱：老年斑磁共振納米診斷試劑及其制備方法
技術領域：
本發明屬于醫學及診斷試劑領域，具體涉老年斑磁共振診斷試劑。
背景技術：
長期以來，生物醫學中阿爾茨海默病(Alzheimer Disease,AD)的診斷只有依靠病理活檢或尸檢來確診，但病理學活檢接受度不高，而利用腦脊液標志物來進行實驗室診斷， 則面臨診斷準確性以及難以量化評估AD的嚴重程度等問題。如何在AD發病的早期階段利用非創傷性方法來定性又定量的診斷AD，一直是廣大神經病學專家和研究者試圖解決的難題，現代分子影像學的飛速發展為早期診斷AD帶來可能，利用磁性納米顆粒對活體進行AD 老年斑的特異性磁共振顯像，是分子影像學與納米技術交叉整合的熱點和難點。將磁性納米鐵顆粒進行表面修飾，完成與生物肽段的連接，通過生物肽段(Αβ4(ι肽段)特異性能與老年斑相結合的特性達到其靶向性作用，此部分已經通過我們前期863工作完成，然而如何突破血腦屏障，將靶向性的納米診斷試劑帶入腦內，卻成為另外一個難題。之前我們通過靜脈注射高滲透甘露醇，以輔助打開血腦屏障，讓連接了生物Αβ4(ι 肽段的磁性納米顆粒進入大腦實質，從而對AD老年斑進行活體磁共振成像。然而甘露醇對血腦屏障具有破壞性的損傷，且所需的靶向納米診斷試劑劑量明顯增大，必定會帶來副作用相應增大，因而注射甘露醇打開血腦屏障的方法應用受限。

發明內容
本發明的任務是提供一種老年斑磁共振納米診斷試劑，使其對AD老年斑具有特異靶向性，與現有的AD診斷方法相比具有安全無創性和能即時成像等特點。實現本發明的技術方案是本發明提供的這種老年斑磁共振納米診斷試劑，是結合有人體免疫缺陷病毒 (HIV-I)的轉錄活化因子肽段(簡稱為=HIV-ITat肽段)和A β 4(|肽段的超順磁性納米氧化鐵顆粒(USPIO)，簡稱為=Tat-USPIO-A β 4(1。將該結合有人體免疫缺陷病毒(HIV-I)的轉錄活化因子肽段(HIV-ITat肽段)和Αβ4(ι肽段的超順磁性納米氧化鐵顆粒(USPIO)用生理可接受的稀釋劑稀釋，即可作為老年斑磁共振診斷試劑使用，所述的稀釋劑可以是PBS緩沖液或生理鹽水。用稀釋劑稀釋后，以鐵元素含量計量該診斷試劑中Tat-USPIO-A β 4Q的濃度，其鐵元素含量為0. 01-20摩爾/升。該老年斑磁共振納米診斷試劑中所用的超順磁性納米氧化鐵顆粒的粒徑大小為 6-10納米。本發明提供的這種老年斑磁共振納米診斷試劑的制備方法，包括以下步驟步驟一、在超順磁性納米氧化鐵顆粒表面連上氨基官能團，得到表面官能化的超順磁性納米氧化鐵顆粒；步驟二、將5-10重量份的3- (2-吡啶二巰基)丙酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(SPDP) 溶于1-2體積份的二甲基亞砜中，得交聯劑溶液，再將該交聯劑溶液與濃度為0. 1-0. 2mol/L、PH = 7. 4-8的磷酸鹽緩沖溶液，(如PBS溶液、D-Hanks溶液等)混合，得到交聯劑溶液與磷酸鹽緩沖溶液的混合液，交聯劑溶液與磷酸鹽緩沖溶液的體積用量比為1 1-2;步驟三、將表面官能化的超順磁性納米氧化鐵顆粒加入到步驟二得到的混合液中，表面官能化的超順磁性納米氧化鐵顆粒與該混合液的重量/體積用量比為3-5 2-3， 在室溫下放置60 120分鐘，置于超濾管中，6000-8000轉/分離心50-60分鐘，過濾去除雜質和未反應的交聯劑溶液，得到經交聯溶液處理過的表面官能化的超順磁性納米氧化鐵顆粒(USPIO)磷酸鹽溶液；步驟四、取經交聯溶液處理過的表面官能化的超順磁性納米氧化鐵顆粒(USPIO) 溶液3-5體積份，向其中加入1-2體積份的濃度為0. 02mol/L的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS) 溶液和1-2體積份的濃度為0. 2mol/L的3- 二甲胺基丙基碳二亞胺(EDC)溶液，于37°C下放置30-90分鐘，然后再加入3-5重量份的人體免疫缺陷病毒HIV-I的轉錄活化因子肽段 (HIV-ITat肽段)和3-5重量的份A β 4(|肽段，混合后室溫下放置10-12小時；置于超濾管中，6000-8000轉/分離心40-60分鐘，過濾去除雜質和未反應的溶液，得到結合有人體免疫缺陷病毒(HIV-I)的轉錄活化因子肽段(簡稱=HIV-ITat肽段)和A β 4(|肽段的超順磁性納米氧化鐵顆粒，即老年斑磁共振納米診斷試劑。上述步驟一所述的在超順磁性納米氧化鐵顆粒表面連上氨基官能團，得到表面官能化的超順磁性納米氧化鐵顆粒的具體方法是超順磁性納米氧化鐵顆粒加入絮凝劑，于 8000-9000轉/分離心10-20分鐘，棄上清，下部沉淀物均勻溶解于蒸餾水中，取2_4體積份的該溶液與10-15體積份的NaBH4的NaOH溶液中，室溫下均勻混合，于惰性氣體環境下升溫至60-70°C，邊攪拌邊加入3-5體積份的表氯醇，反應10-12小時后停止反應；加入絮凝劑，5000-7000轉/分離心3-5分鐘，均勻溶解于蒸餾水中，重復以上加入絮凝劑、離心、溶解于蒸餾水的操作三至五次；然后，于50-60°C惰性氣體環境下，加入5-10體積份乙二胺，反應10-12小時后停止反應，加入絮凝劑，5000-8000轉/分離心3_5分鐘，均勻溶解于蒸餾水中，重復以上加入絮凝劑、離心、溶解于蒸餾水的操作三至五次，得到表面官能化的USPI0， 該USPIO可均勻溶解于PH值為7. 4-8的磷酸緩沖溶液(PBS)中保存，其中所述的NaBH4的 NaOH溶液的配制方法是將1-3重量份的NaBH4溶于濃度為1. 8-2mol/L的NaOH溶液；所述的絮凝劑是乙醇、甲醇、丙醇、或丁醇；所述的惰性氣體為氮氣或氬氣。上述方法中所述的超順磁性氧化鐵納米粒可以是超順磁性三氧化二鐵納米粒或超順磁性四氧化三鐵納米粒。超順磁性納米氧化鐵顆粒的具體制備方法，可參見專利申請號為2004100U883. 4，名稱為“一種制備超小型超順磁性磁共振對比劑的方法”的中國專利申請文件。上述方法中所述的人免疫缺陷病毒HIV-I的轉錄活化因子肽段——HIV-ITat肽段，可來源于多肽合成，其氨基酸序列為GRKKRRQRRRPPQ，[參見1. Dennison SR, Baker RD, NichollID, Phoenix DA.Interactions of cell penetrating peptide Tat with model membranes :a biophysical study Biochem Biophys Res Commun. 2007 Nov 9 ； 363(1) :178-82. Epub 2007Sep 4 (PMID :17854767) ；2. Futaki S. Membrane-permeable arginine—rich peptides and the translocation mechanisms Adv Drug Deliv Rev. 2005Feb 28 ；57 (4) :547-58. Epub 2004 Decl6 (PMID :15722163)]；所述的 Αβ4(ι 肽段， 可來源于多肽合成，氨基酸序列為DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGW。
本發明通過NHS和EDC的作用，以及超濾純化等方法，將Αβ 4(1肽段、HIV-ITat肽段與官能化的USPIO進行連接，獲得了具有超順磁性的靶向磁性納米材料Tat-USPio-A β 4(|。 HIV-Tat蛋白轉導域(protein transduction domain,PTD)是一種在蛋白轉導過程中能高效穿過生物膜的結構域，能與其他分子共價結合，介導穿過組織和細胞，甚至血腦屏障，被認為是一種有效的運載工具。本發明利用Tat PTD與磁性納米材料結合，增加磁性納米材料對血腦屏障的滲透作用，使靶向納米材料能夠進入腦實質，并且具有對AD老年斑結合的特異性，以增強其在腦組織中對靶分子的顯影效果，減少造影對比劑的用量，從而克服了在循環血液中注射高滲甘露醇輔助打開血腦屏障的不足。


圖 1為按照實施例1、2方法制備的USPIO的透射電子顯微鏡圖，納米氧化鐵粒子均勻分散于基底中，總體來看其大小在7nm以下，呈球形。圖2為按照實施例2、4方法制備的官能化的USPIO樣品的水化半徑分布圖官能化的USPIO樣品，其水化半徑主要分布在50nm左右。圖3為按照實施例3、6方法制備的官能化的USPIO樣品的電荷分布圖。這種官能化的USPIO樣品其表面帶有負電荷，電荷大小為-8. 003mV。圖4為按照實施例4、9方法制備的官能化的USPIO樣品在進行弛豫性能檢測時的磁共振儀屏幕截圖。截圖中，樣品按照鐵濃度(mmol/L)依次排列，從下至上，樣品中鐵濃度依次遞增。圖5為按照實施例4、9方法制備的官能化的USPIO樣品其弛豫時間倒數(1/T2) 與樣品中鐵濃度(mmol/L)之間的曲線圖。橫坐標為樣品中鐵濃度(mmol/L)，縱坐標為樣品的T2弛豫時間的倒數(1/T2)。通過對該曲線的線性擬合計算可以得到樣品的R2值為 140(mM-lsec-1)。圖6為按照實施例4、9方法制備Tat-USPIO-Aβ 40的園二色譜對照。圖7Tat-USPIO-Ai34Q與神經干細胞孵育后鐵染色驗證細胞內可見藍色鐵顆粒 (A=Perl' s染色)與棕褐色鐵顆粒(B :DAB復染)，如箭頭所示，細胞胞體內存在均勻分布的Tat-USPIO-A β 4(|，其中的鐵元素使細胞染色呈藍色(左圖)和棕褐色(右圖)。圖STat-USPIO-A β 40與神經干細胞孵育后體外磁共振檢測驗證其弛豫性(Α，B)， 透射電鏡證實細胞質內散在分布鐵顆粒(C，D):神經干細胞與Tat-USPIO-Aii4ci孵育后 1. 5TMRI 成像結果(EP 管 1、2、3、4 分別對應培養基，Tat-USP10-Α β 4(1，與 Tat-USPIO-A^40 共孵育后的神經干細胞，單純的神經干細胞)，從上述四個樣品的MR圖像上可以清楚看到， 第3管的T2信號強度介于第2管和第4管之間，即與Tat-USPIO-Aβ 4(|共孵育過的細胞的 T2信號強度介于單純的Tat-USPIO-A β 4(1與單純的神經干細胞之間。圖OTat-USPIO-A β 40靜脈注射后磁共振活體成像(Α，B)以及組織學驗證(C為腦組織切片老年斑Thioflavine熒光染色，D為腦組織切片鐵染色)，圖中箭頭1、2、3、4、5分別對應于相同部位的老年斑。
具體實施例方式實施例1
向超順磁性納米鐵顆粒中加入無水乙醇直至有黑色絮凝出現為止，通過8000轉/ 分的速度離心10分鐘，棄去上清液，收集下部黑色沉淀均勻溶解于60ml的蒸餾水中。取該溶液20ml，在室溫下加入IOml含0. Ig NaBH4的NaOH溶液(NaOH溶液濃度為2mol/L)，混合均勻后，再于惰性氣體環境下升溫至60°C，磁力攪拌速度200轉/分下，注入3ml表氯醇，反應10小時后停止反應，加入無水乙醇直至有黑色絮凝出現為止，通過8000轉/分的速度離心，棄去上清液，收集下部黑色沉淀溶于50ml的蒸餾水中，然后在50°C的惰性氣體環境下， 向其中加入5ml乙二胺，反應10小時后停止反應，加入無水乙醇直至有黑色絮凝出現為止， 通過8000轉/分的速度離心，棄去上清液，收集下部黑色沉淀(即表面官能化的USPI0)溶于PH值為7. 4的磷酸緩沖液(PBS溶液)中。將IOOuL濃度為0. 02mol/L的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)溶液與IOOuL濃度為 0. 2mol/L的3-二甲胺基丙基碳二亞胺(EDC)溶液混合，然后向其中加入0. Iml表面官能化的USPIO溶液，37°C下放置30mins ；再向其中加入Img的SPDPjP 0. 128ml 二甲基亞砜，然后再加入0. Iml的HIV-I Tat (FITC)溶液和0. Iml的A β 4(1肽段溶液，混合后在室溫下放置反應10小時；然后置于規格為0. 5ml、100k的超濾管中，在離心機上離心，離心機的轉速為 6000轉/分，離心時間為50mins，超濾法過濾去除雜質和未反應的溶液，得到結合有人體免疫缺陷病毒(HIV-I)的轉錄活化因子肽段(簡稱=HIV-ITat肽段)和Αβ4(ι肽段的超順磁性納米氧化鐵顆粒老年斑磁共振納米診斷試劑，于4°C下保存。實施例2向超順磁性納米鐵顆粒中加入無水乙醇直至有黑色絮凝出現為止，通過8000轉/ 分的速度離心10分鐘，棄去上清液，收集下部黑色沉淀超聲溶于60ml的蒸餾水中。取該溶液25ml，在室溫下加入15ml含0. Ig NaBH4的NaOH溶液(NaOH溶液濃度為2mol/L)，混合均勻后，再于惰性氣體環境下升溫至60°C，磁力攪拌速度300轉/分下，注入4ml表氯醇，反應11小時后停止反應，加入無水乙醇直至有黑色絮凝出現為止，通過8000轉/分的速度離心，棄去上清液，收集下部黑色沉淀溶于50ml的蒸餾水中，然后在50°C的惰性氣體環境下， 向其中加入8ml乙二胺，反應11小時后停止反應，加入無水乙醇直至有黑色絮凝出現為止， 通過8000轉/分的速度離心，棄去上清液，收集下部黑色沉淀(即表面官能化的USPI0)溶于PH值為7. 8的磷酸緩沖液(PBS溶液)中。將150uL濃度為0. 02mol/L的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)溶液與150uL濃度為 0. 2mol/L的3-二甲胺基丙基碳二亞胺(EDC)溶液混合，然后向其中加入0. 2ml表面官能化的USPIO溶液，37°C下放置50mins ；再向其中加入Img的SPDPjP 0. 128ml 二甲基亞砜，然后再加入0. 2ml的HIV-I Tat (FITC)溶液和0. 2ml的A β 4(1肽段溶液，混合后在室溫下放置反應11小時，然后置于規格為0. 5ml、100k的超濾管中，在離心機上離心，離心機的轉速為 7000轉/分，離心時間為40mins，過濾去除雜質和未反應的溶液，得到結合有人體免疫缺陷病毒(HIV-I)的轉錄活化因子肽段(簡稱HIV-1 Tat肽段)和Αβ4(ι肽段的超順磁性納米氧化鐵顆粒老年斑磁共振納米診斷試劑，于4°C下保存。實施例3向超順磁性納米鐵顆粒中加入無水乙醇直至有黑色絮凝出現為止，通過8000轉/ 分的速度離心10分鐘，棄去上清液，收集下部黑色沉淀溶于60ml的蒸餾水中。取該溶液 30ml，在室溫下加入20ml含0. Ig NaBH4的NaOH溶液(NaOH溶液濃度為2mol/L)，混合均勻后，再于惰性氣體環境下升溫至60°C，磁力攪拌速度400轉/分下，注入5ml表氯醇，反應 12小時后停止反應，加入無水乙醇直至有黑色絮凝出現為止，通過8000轉/分的速度離心， 棄去上清液，收集下部黑色沉淀溶于50ml的蒸餾水中，然后在50°C的惰性氣體環境下，向其中加入IOml乙二胺，反應12小時后停止反應，加入無 水乙醇直至有黑色絮凝出現為止， 通過8000轉/分的速度離心，棄去上清液，收集下部黑色沉淀(即表面官能化的USPIO)溶于PH值為7. 4的磷酸緩沖液(PBS溶液)中。將200uL濃度為0. 02mol/L的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)溶液與200uL濃度為 0. 2mol/L的3-二甲胺基丙基碳二亞胺(EDC)溶液混合，然后向其中加入0. 3ml表面官能化的USPIO溶液，37°C下放置60mins ；再向其中加入Img的SPDP、和0. 128ml 二甲基亞砜，然后再加入0. 3ml的HIV-ITat (FITC)溶液和0. 3ml的A β 4(1肽段溶液，混合后在室溫下放置反應12小時；然后置于規格為0. 5ml、100k的超濾管中，在離心機上離心，離心機的轉速為 8000轉/分，離心時間為30mins，過濾去除雜質和未反應的溶液，得到結合有人體免疫缺陷病毒(HIV-I)的轉錄活化因子肽段(簡稱HIV-1 Tat肽段)和A β 4(|肽段的超順磁性納米氧化鐵顆粒老年斑磁共振納米診斷試劑，于4°C下保存。實施例4向超順磁性納米鐵顆粒中加入無水乙醇直至有黑色絮凝出現為止，通過8000轉/ 分的速度離心10分鐘，棄去上清液，收集下部黑色沉淀溶于60ml的蒸餾水中。取該溶液 30ml，在室溫下加入IOml含0. Ig NaBH4的NaOH溶液(NaOH溶液濃度為2mol/L)，混合均勻后，再于惰性氣體環境下升溫至60°C，磁力攪拌速度500轉/分下，注入5ml表氯醇，反應 12小時后停止反應，加入無水乙醇直至有黑色絮凝出現為止，通過8000轉/分的速度離心， 棄去上清液，收集下部黑色沉淀溶于50ml的蒸餾水中，然后在50°C的惰性氣體環境下，向其中加入IOml乙二胺，反應12小時后停止反應，加入無水乙醇直至有黑色絮凝出現為止， 通過8000轉/分的速度離心，棄去上清液，收集下部黑色沉淀(即表面官能化的USPI0)溶于PH值為7. 4的磷酸緩沖液(PBS溶液)中。將IOOuL濃度為0. 02mol/L的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)溶液與150uL濃度為 0. 2mol/L的3-二甲胺基丙基碳二亞胺(EDC)溶液混合，然后向其中加入0. Iml表面官能化的USPIO溶液，37°C下放置30mins ；再向其中加入Img的SPDPjP 0. 128ml 二甲基亞砜，然后再加入0. 15ml的HIV-I Tat (FITC)溶液和0. 15ml的A β 4(1肽段溶液，混合后在室溫下放置反應12小時；然后置于規格為0. 5ml、100k的超濾管中，在離心機上離心，離心機的轉速為6000轉/分，離心時間為60mins，過濾去除雜質和未反應的溶液，得到結合有人體免疫缺陷病毒(HIV-I)的轉錄活化因子肽段(簡稱HIV-1 Tat肽段)和A β 4(|肽段的超順磁性納米氧化鐵顆粒老年斑磁共振納米診斷試劑，于4°C下保存。實施例5-14 其成分及配比見下表，其制備過程同實例1-4
權利要求
1.一種老年斑磁共振納米診斷試劑，其特征在于，它是結合有人體免疫缺陷病毒 (HIV-I)的轉錄活化因子肽段(HIV-1 Tat肽段)和A β 4(|肽段的超順磁性納米氧化鐵顆粒 (USPIO)，即 Tat-USPio-A β 40。
2.根據權利要求1所述的老年斑磁共振納米診斷試劑，其特征在于含有生理可接受的稀釋劑。
3.根據權利要求2所述的老年斑磁共振納米診斷試劑，其特征在于所述的稀釋劑可以是PBS緩沖液或生理鹽水。
4.根據權利要求2或3所述的老年斑磁共振納米診斷試劑，其特征在于，以鐵元素含量計量該診斷試劑中Tat-USPIO-A β 4(1的濃度為其鐵元素含量為0. 01-20摩爾/升。
5.據權利要求1所述的老年斑磁共振納米診斷試劑，其特征在于，所用的超順磁性納米氧化鐵顆粒的粒徑大小為6-10納米。
6.結合有人體免疫缺陷病毒(HIV-I)的轉錄活化因子肽段(HIV-1Tat肽段)和Αβ4(ι 肽段的超順磁性納米氧化鐵顆粒在制備老年斑磁共振納米診斷試劑中的應用。
7.—種老年斑磁共振納米診斷試劑的制備方法，包括以下步驟步驟一、在超順磁性納米氧化鐵顆粒表面連上氨基官能團，得到表面官能化的超順磁性納米氧化鐵顆粒；步驟二、將5-10重量份的3-(2-吡啶二巰基)丙酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(SPDP)溶于 1-2體積份的二甲基亞砜中，得交聯劑溶液，再將該交聯劑溶液與濃度為0. 1-0. 2mol/L、PH =7. 4-8的磷酸鹽緩沖溶液(如PBS溶液、D-Hanks溶液等)混合，得到交聯劑溶液與磷酸鹽緩沖溶液的混合液，交聯劑溶液與磷酸鹽緩沖溶液的體積用量比為1 1-2;步驟三、將表面官能化的超順磁性納米氧化鐵顆粒加入到步驟二得到的混合液中，表面官能化的超順磁性納米氧化鐵顆粒與該混合液的重量/體積用量比為3-5 2-3，在室溫下放置60 120分鐘，置于超濾管中，6000-8000轉/分離心50-60分鐘，過濾去除雜質和未反應的交聯劑溶液，得到經交聯溶液處理過的表面官能化的超順磁性納米氧化鐵顆粒 (USPIO)磷酸鹽溶液；步驟四、取經交聯溶液處理過的表面官能化的超順磁性納米氧化鐵顆粒(USPIO)溶液 3-5體積份，向其中加入1-2體積份的濃度為0. 02mol/L的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)溶液和1-2體積份的濃度為0. 2mol/L的3- 二甲胺基丙基碳二亞胺(EDC)溶液，于37°C下放置30-90分鐘，然后再加入3-5重量份的人體免疫缺陷病毒HIV-I的轉錄活化因子肽段 (HIV-1 Tat肽段)和3-5重量的份A β 4(|肽段，混合后室溫下放置10-12小時；置于超濾管中，6000-8000轉/分離心40-60分鐘，過濾去除雜質和未反應的溶液，得到結合有人體免疫缺陷病毒(HIV-I)的轉錄活化因子肽段(簡稱HIV-1 Tat肽段)和A β 4(|肽段的超順磁性納米氧化鐵顆粒，即老年斑磁共振納米診斷試劑。
8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，步驟一所述的在超順磁性納米氧化鐵顆粒表面連上氨基官能團，得到表面官能化的超順磁性納米氧化鐵顆粒的具體方法是: 超順磁性納米氧化鐵顆粒加入絮凝劑，于8000-9000轉/分離心10-20分鐘，棄上清，下部沉淀物均勻溶解于蒸餾水中；取2-4份體積份的該溶液與10-15體積份的NaBH4的NaOH溶液中，室溫下均勻混合，于惰性氣體環境下升溫至60-70°C，邊攪拌邊加入3-5體積份的表氯醇，反應10-12小時后停止反應；加入絮凝劑，5000-7000轉/分離心3_5分鐘，均勻溶解于蒸餾水中，重復以上加入絮凝劑、離心、溶解于蒸餾水的操作三至五次；然后，于50-60°C 惰性氣體環境下，加入5-10體積份乙二胺，反應10-12小時后停止反應，加入絮凝劑， 5000-7000轉/分離心3-5分鐘，均勻溶解于蒸餾水中，重復以上加入絮凝劑、離心、溶解于蒸餾水的操作三至五次，得到表面官能化的USPI0，均勻溶解于PH值為7. 4-8的磷酸緩沖溶液(PBS)中保存，其中所述的NaBH4的NaOH溶液的配制方法是將1_3重量份的NaBH4溶于濃度為1. 8-2mol/L的NaOH溶液。
9.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述的絮凝劑是乙醇、甲醇、丙醇、或丁醇；所述的惰性氣體為氮氣或氬氣。
10.根據權利要求9所述的結合有人體免疫缺陷病毒HIV-I的轉錄活化因子肽段 (HIV-ITat肽段)和A β 4(|肽段的超順磁性納米氧化鐵顆粒在制備老年斑磁共振納米診斷試劑中的應用，其特征在于，所述的結合有人體免疫缺陷病毒HIV-I的轉錄活化因子肽段 (HIV-1 Tat肽段)和A β 4(|肽段的超順磁性納米氧化鐵顆粒按權利要求7、8或9所述的方法制得。
全文摘要
一種特異性活體標記老年斑的體內磁共振納米診斷試劑的制備方法，屬于生物診斷試劑的開發領域。該方法制得的磁共振納米診斷試劑可以順利地通過血腦屏障，既能與腦內老年斑特異性結合，又具有超順磁性，可以進行核磁共振老年斑特異性成像。實驗以核磁共振對比劑——超順磁性納米氧化鐵顆粒(USPIO)為核心，在其表面連上氨基官能團，再通過交聯劑的中介作用，連上具有功能的蛋白質。在這一系列的實驗中，每一步實驗的檢測都是必要的。通過一些物理方法和化學方法的檢測證實了這些實驗過程，從而最終制得的磁共振納米對比劑可以應用于生物醫學中阿爾茨海默病磁共振分子影像學成像上。
文檔編號A61K49/14GK102274530SQ20111023142
公開日2011年12月14日 申請日期2011年8月11日 優先權日2011年8月11日
發明者劉祖黎, 吳軍, 夏星, 張旻, 張蘇明, 李慧, 李震, 杜桂煥, 楊華靜, 湛彥強, 熊永潔, 王東, 褚倩, 閔喆, 馬銘 申請人:華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院