專利名稱：重組牛堿性成纖維細胞生長因子滴眼液的制作方法
技術領域：
本發明涉及生物制品領域。特別是涉及一種重組牛堿性成纖維細胞生長因子滴眼液及其制備方法。
背景技術：
堿性成纖維細胞生長因子(Basic fibroblast growth factor，簡寫為bFGF)主要分布于中胚層和神經胚層來源的組織器官，對許多組織細胞有作用，可促進細胞分裂，調節細胞代謝，影響細胞的形態、浸潤、分化和衰老，對角膜的上皮細胞基質細胞核內皮細胞均可產生影響，對堿燒傷角膜上皮的再生、角膜基質層和內皮層的修復均有促進作用。重組牛堿性成纖維細胞生長因子(Recombinant bovine basic fibroblast growth factor，簡寫為rb-bFGF)是由含有高效表達牛堿性成纖維細胞生長因子基因的大腸桿菌，經發酵、分離和高度純化后得到的活性因子。rb-bFGF可治療各種原因引起的角膜上皮缺損和點狀角膜病變、復發性淺層點狀角膜病變、輕中度干眼癥、大泡性角膜炎、角膜擦傷、輕中度化學燒傷、角膜手術及術后愈合不良、地圖狀(或營養性)單皰性角膜潰瘍等。中國專利申請99117113(申請人為廣州暨南大學醫藥生物技術研究開發中心)公開了一種滴眼劑，其含有0. 5-20μ g/ml選自堿性成纖維細胞生長因子、酸性成纖維細胞生長因子和表皮生長因子中一種或多種的水溶液。該滴眼劑通常需要添加抑菌劑例如苯甲酸鈉、羥苯乙酯等來保證其無菌性，而抑菌劑對眼睛尤其是眼睛受損部位的刺激性較大，易產生不良反應。中國專利申請201010149385(申請人為南海朗肽制藥有限公司)公開了一種滴眼液，其包含人堿性成纖維細胞生長因子、透明質酸鈉、甘露醇、白蛋白、肝素鈉和氯化鈉，滴眼液的PH為6. 75-7. 5。該滴眼液雖然沒有添加抑菌劑，但是其單位劑型中輔料的用量大， 增加了眼部刺激的可能性，同時輔料之間的配伍并非最佳選擇，滴眼液的穩定性有待進一
步提尚。因此，仍然有需要開發一種新的重組牛堿性成纖維細胞生長因子滴眼液，其使用的輔料用量較少，并且不含防腐劑，刺激性小且穩定性好。

發明內容
本發明的目的是提供一種刺激性小且穩定性好的重組牛堿性成纖維細胞生長因子滴眼液及其制備方法。本發明的發明目的通過以下的實施方式來實現。一種重組牛堿性成纖維細胞生長因子滴眼液，其特征在于所述滴眼液的組分及其用量為重組牛堿性成纖維細胞生長因子1000-3000IU ；蛋白保護劑0.01-0. 25mg;增稠劑1. 0-5. Omg ；
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滲透壓調節劑1. 0-5. Omg ；磷酸緩沖液適量注射用水加至0.鈿1;其中，蛋白保護劑選自人血白蛋白、甘露醇和聚乙二醇，優選人血白蛋白；增稠劑選自透明質酸、聚乙烯醇和羥丙基甲基纖維素，優選透明質酸或羥丙基甲基纖維素；滲透壓調節劑為氯化鈉、葡萄糖或山梨醇。在一個優選的實施方式中，所述的重組牛堿性成纖維細胞生長因子滴眼液的組分及其用量為重組牛堿性成纖維細胞生長因子1680IU蛋白保護劑OJmg增稠劑^ig滲透壓調節劑:3mg磷酸緩沖液適量注射用水加至0. 4ml ；其中，所述蛋白保護劑選自人血白蛋白、甘露醇和聚乙二醇，優選人血白蛋白；增稠劑選自透明質酸、聚乙烯醇和羥丙基甲基纖維素；滲透壓調節劑為氯化鈉、葡萄糖或山梨上述重組牛堿性成纖維細胞生長因子滴眼液的制備方法包含以下步驟(1)將增稠劑分散于適量注射用水中，在121°C熱壓滅菌，冷卻后備用；(2)將重組牛堿性成纖維細胞生長因子、人血白蛋白、滲透壓調節劑和磷酸緩沖液適量溶于適量注射用水中，用0. 22 μ m濾膜無菌過濾；(3)在無菌條件下將步驟(1)所得的溶液和步驟( 所得的溶液混合均勻，用無菌注射用水定容后立即分裝，即得。具體的，上述重組牛堿性成纖維細胞生長因子滴眼液的制備方法包含以下步驟(1)將1.0-5. Omg增稠劑分散于適量注射用水中，在121°C熱壓滅菌，冷卻后備用；(2)將1000-3000IU重組牛堿性成纖維細胞生長因子、0. 01-0. 25mg蛋白保護劑、 1. 0-5. Omg滲透壓調節劑、磷酸緩沖液適量溶于適量注射用水中，用0. 22 μ m濾膜無菌過濾；(3)在無菌條件下將步驟(1)所得的溶液和步驟( 所得的溶液混合均勻，用無菌注射用水定容后立即分裝，即得。所述的磷酸緩沖液為磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉的混合液，磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉兩者之間的配比百分比比例為公知技術的常規比例范圍，例如10-90% 90-10%，或 20-50% 50-80%。本發明與現有技術相比，具有以下的優點和效果①作用快速有效，可治療各種原因引起的角膜上皮缺損和點狀角膜病變、復發性淺層點狀角膜病變、輕中度干眼癥、大泡性角膜炎、角膜擦傷、輕中度化學燒傷、角膜手術及術后愈合不良、地圖狀(或營養性)單皰性角膜潰瘍等。②通過對重組牛堿性成纖維細胞生長因子選擇特定的輔料及用量，減小了滴眼液中輔料的使用量，同時保證了滴眼液的穩定性；③減小了滴眼液對眼睛使用部位的刺激性。
具體實施例方式下面結合本發明較佳的實施例做進一步的說明，這些實施例應理解為不會限制本發明的實施范圍，其變型及等同方式均被涵蓋在本發明的保護范圍內。實施例1 處方
重組牛堿性成纖維細胞生長因子1680000IU 人血白蛋白0.2 g 透明質酸3.5 g 羥丙基甲基纖維素0.5 g氯化鈉 2.5 g
磷酸二氫鈉0.2 g 磷酸氫二鈉0.5 g
注射用水加至400 ml;_
共制1000支具體制備方法為將透明質酸和羥丙基甲基纖維素分散于適量注射用水中，在121°C熱壓滅菌，冷卻后備用；將重組牛堿性成纖維細胞生長因子、人血白蛋白、氯化鈉、磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉溶于適量注射用水中，用0. 22μπι濾膜無菌過濾；在無菌條件下將上述兩個步驟所得的溶液混合均勻，用無菌注射用水定容后立即分裝。實施例2 處方
重組牛堿性成纖維細胞生長因子1600000 IU 人血白蛋白0.19g 聚乙烯醇4.2 g 山梨醇2.9 g
磷酸二氫鈉0.18 g 磷酸氫二鈉0.40 g和
注射用水加至400 ml;_
共制1000支具體制備方法為將聚乙烯醇分散于適量注射用水中，在121°C熱壓滅菌，冷卻后備用；將重組牛堿性成纖維細胞生長因子、人血白蛋白、山梨醇、磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉溶于適量注射用水
5中，用0. 22μπι濾膜無菌過濾；在無菌條件下將上述兩個步驟所得的溶液混合均勻，用無菌注射用水定容后立即分裝，即得。實施例3 處方
重組牛堿性成纖維細胞生長因子170000 IU 聚乙二醇0.23 g 羥丙基甲基纖維素3.8 g 葡萄糖3.5 g
磷酸二氫鈉0.21 g 磷酸氫二鈉0.45 g;和
注射用水加至400 ml·,_
共制1000支具體制備方法為將羥丙基甲基纖維素分散于適量注射用水中，在121°C熱壓滅菌，冷卻后備用；將重組牛堿性成纖維細胞生長因子、聚乙二醇、葡萄糖、磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉溶于適量注射用水中，用0. 22μπι濾膜無菌過濾；在無菌條件下將上述兩個步驟所得的溶液混合均勻， 用無菌注射用水定容后立即分裝，即得。試驗例1 :rb_bFGF滴眼液促進角膜堿燒傷模型愈合的試驗研究1、試驗方法試驗動物健康新西蘭白兔，體重2_3kg，雌雄并用，手電筒及裂隙燈檢查眼前段未見異常。120只動物隨機分為五組，每組M只動物。家兔角膜堿燒傷模型外眼檢查正常動物，生理鹽水滴洗右眼2次，以地卡因滴眼液滴眼2次，表面麻醉，肌注氯胺酮，全身麻醉，將濾紙圓片于NaOH溶液中浸透，小心貼敷于已固定眼球位置的右眼角膜正中區數分鐘，取下濾紙片后立即用生理鹽水沖洗角膜和結膜囊，即制成角膜堿燒傷模型。試驗樣品陰性對照品為不含重組牛堿性成纖維細胞生長因子的滴眼液，輔料組成同實施例1，每次1-2滴，每日4次；本發明樣品為實施例1滴眼液，每次1-2滴，每日4 次；陽性對照品為素高捷療眼膏，每次1滴，每日4次。給藥方法將陰性對照品、本發明滴眼液和陽性對照品分別對模型動物給藥，連續
治療二周；評價指標分別在治療1、2、4、6、10、14天時將熒光素染色裂隙燈顯微鏡標準照相照片，經過計算機圖象系統測量分析出各組不同時間角膜上皮愈合面積(結果見表1)和角膜上皮愈合率(結果見表2)。角膜上皮愈合面積和角膜上皮愈合率越高，表明治療效果越好。2、試驗結果表1、各組不同時間的角膜上皮愈合面積(mm2 ；X士S)
權利要求
1.一種重組牛堿性成纖維細胞生長因子滴眼液，其特征在于所述滴眼液的組分及其用量為重組牛堿性成纖維細胞生長因子1000-3000IU ；蛋白保護劑0.01-0. 25mg;；增稠劑 1. 0-5. Omg ；滲透壓調節劑1. 0-5. Omg ；磷酸緩沖液適量注射用水加至0. 4ml ；其中，蛋白保護劑選自人血白蛋白、甘露醇和聚乙二醇，增稠劑選自透明質酸、聚乙烯醇和羥丙基甲基纖維素，滲透壓調節劑為氯化鈉、葡萄糖或山梨醇。
2.根據權利要求1所述的重組牛堿性成纖維細胞生長因子滴眼液，其特征在于所述滴眼液的組分及其用量為重組牛堿性成纖維細胞生長因子1680IU ；蛋白保護劑0. 2mg；增稠劑4mg ；滲透壓調節劑:3mg ；磷酸緩沖液適量注射用水加至0. 4ml ；其中，所述蛋白保護劑選自人血白蛋白、甘露醇和聚乙二醇，增稠劑選自透明質酸、聚乙烯醇和羥丙基甲基纖維素；滲透壓調節劑為氯化鈉、葡萄糖或山梨醇。
3.如權利要求1或2所述的滴眼液，其特征在于，所述的蛋白保護劑為人血白蛋白。
4.如權利要求1所述的滴眼液，其特征在于，所述的增稠劑為透明質酸。
5.如權利要求1所述的滴眼液，其特征在于，所述的增稠劑為羥丙基甲基纖維素。
6.根據權利要求1-5任一所述的滴眼液其特征在于其制備工藝為(1)將增稠劑分散于適量注射用水中，在121°C熱壓滅菌，冷卻后備用；(2)將重組牛堿性成纖維細胞生長因子、人血白蛋白、滲透壓調節劑和磷酸緩沖液適量溶于適量注射用水中，用0. 22 μ m濾膜無菌過濾；(3)在無菌條件下將步驟(1)所得的溶液和步驟( 所得的溶液混合均勻，用無菌注射用水定容后立即分裝，即得。
全文摘要
一種重組牛堿性成纖維細胞生長因子滴眼液及其制備方法。所述滴眼液的組分及其用量為重組牛堿性成纖維細胞生長因子1000-3000IU；蛋白保護劑0.01-0.25mg；增稠劑1.0-5.0mg；滲透壓調節劑1.0-5.0mg；磷酸緩沖液適量；和注射用水加至0.4ml；本品具有刺激性小、穩定性好的特點。
文檔編號A61K9/08GK102357243SQ201110342439
公開日2012年2月22日 申請日期2011年11月2日 優先權日2011年11月2日
發明者唐祝華, 姜若峰, 方海洲, 朱愛堂, 藍瑄, 鄭贊順, 黃賢科 申請人:珠海億勝生物制藥有限公司