專利名稱：外用重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子凍干制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物制品領(lǐng)域。特別是涉及一種外用重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子的凍干制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
皮膚是機(jī)體避免遭受感染和脫水的重要屏障，嚴(yán)重創(chuàng)傷、燒燙傷以及某些疾病例如糖尿病引起的皮膚潰瘍會給患者帶來身體和精神上的巨大影響。因此，對皮膚創(chuàng)面的修復(fù)是醫(yī)藥領(lǐng)域十分關(guān)注的問題。自上世紀(jì)末開始，已對創(chuàng)傷后的組織修復(fù)過程、發(fā)生機(jī)制和治療等進(jìn)行了多種研究，其中，分子生物學(xué)的迅速發(fā)展以及各學(xué)科之間的相互交叉影響，使創(chuàng)傷修復(fù)與組織再生等水平得到不斷提升。目前，已構(gòu)建了多種促進(jìn)肉芽組織生長、血管化和再上皮化的基因， 例如表皮細(xì)胞因子、堿性成纖維細(xì)胞生長因子和轉(zhuǎn)化生長因子等。已發(fā)現(xiàn)堿性成纖維細(xì)胞生長因子(Basic fibroblast growth factor，簡寫為 bFGF)在體內(nèi)可參與多種組織的創(chuàng)傷修復(fù)過程，是重要的創(chuàng)傷愈合因子之一，它能誘導(dǎo)微血管的形成、發(fā)育和分化，同時直接刺激成纖維細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)的蛋白合成，以形成膠原纖維，增加創(chuàng)面的抗張力強(qiáng)度，并促進(jìn)真皮細(xì)胞的移行、分裂、分化，以完成皮膚的修復(fù)過程， 并能促進(jìn)皮膚軟骨組織、骨組織和神經(jīng)組織損傷修復(fù)和肢體再生。大量基礎(chǔ)研究和臨床試驗證實，bFGF對燒傷、外傷及各種慢性難愈合創(chuàng)面具有顯著的促修復(fù)作用，并且安全、有效、 無不良反應(yīng)。重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子(Recombinant bovine basic fibroblast growth factor，簡寫為rb-bFGF)是由含有高效表達(dá)牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子基因的大腸桿菌，經(jīng)發(fā)酵、分離和高度純化后得到的活性因子。rb-bFGF可促進(jìn)創(chuàng)面愈合，用于燒傷創(chuàng)面(包括淺II度、深I(lǐng)I度、肉芽創(chuàng)面)、慢性創(chuàng)面(包括體表慢性潰瘍等)和新鮮創(chuàng)面(包括外傷、供皮區(qū)創(chuàng)面、手術(shù)傷等)。現(xiàn)有技術(shù)中尚未公開重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子外用凍干制劑的配方和制備工藝。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種安全有效、穩(wěn)定性好的外用重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子凍干制劑及其制備方法。本發(fā)明的發(fā)明目的通過以下的實施方式來實現(xiàn)。一種外用重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子凍干制劑，其特征在于所述外用凍干劑的組分及用量為重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子20000-50000IU、蛋白保護(hù)劑5_10mg和稀釋劑50-100mg ；其中，所述的蛋白保護(hù)劑選自人血白蛋白、甘露醇和聚乙二醇，優(yōu)選人血白蛋白；稀釋劑選自甘露醇、乳糖醇或葡萄糖；該凍干粉末的制備工藝為將重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子、蛋白保護(hù)劑和稀釋劑用注射用水溶解后，用0. 22μπι的濾膜無菌過濾，分裝于西林瓶中，裝盤后送入凍干機(jī)中，先將樣品在-20°C --40°C預(yù)凍2-5小時，然后開啟冷凝器，開啟真空系統(tǒng)，開始升溫升華，完畢后在15°C -40°C干燥4-8小時，即得。本發(fā)明具有以下的優(yōu)點和效果①本品安全有效，可用于治療各種燒傷創(chuàng)面(包括淺II度、深I(lǐng)I度、肉芽創(chuàng)面)、 慢性創(chuàng)面(包括體表慢性潰瘍等)和新鮮創(chuàng)面(包括外傷、供皮區(qū)創(chuàng)面、手術(shù)傷等)。②本品制備工藝簡單、穩(wěn)定性好，適合工業(yè)化生產(chǎn)的應(yīng)用。③使用方便，增強(qiáng)了病人的順應(yīng)性。
具體實施例方式下面結(jié)合本發(fā)明的實施例和試驗例做進(jìn)一步的說明。實施例1 凍干前溶液處方重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子350000IU ；人血白蛋白75mg;葡萄糖IOOOmg ；注射用水適量_共制1000 支具體制備方法為將重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子、人血白蛋白和葡萄糖用注射用水溶解后，用0. 22 μ m的濾膜無菌過濾，分裝于西林瓶中，裝盤后送入凍干機(jī)中，先將樣品在-20°C預(yù)凍2小時，然后開啟冷凝器，開啟真空系統(tǒng)，開始升溫升華，完畢后在15°C干燥4小時，即得。實施例2 凍干前溶液處方重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子250000IU ；聚乙二醇50mg;甘露醇800mg ；注射用水適量_共制1000 支具體制備方法為將重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子、聚乙二醇和甘露醇用注射用水溶解后，用0. 22 μ m的濾膜無菌過濾，分裝于西林瓶中，裝盤后送入凍干機(jī)中，先將樣品在-40°C預(yù)凍5小時，然后開啟冷凝器，開啟真空系統(tǒng)，開始升溫升華，完畢后在40°C干燥 8小時，即得。實施例3 凍干前溶液處方重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子450000IU ；人血白蛋白75mg;乳糖醇500mg ；
注射用水適量_共制1000 支具體制備方法為將重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子、人血白蛋白和乳糖醇用注射用水溶解后，用0. 22 μ m的濾膜無菌過濾，分裝于西林瓶中，裝盤后送入凍干機(jī)中，先將樣品在-30°C預(yù)凍4小時，然后開啟冷凝器，開啟真空系統(tǒng)，開始升溫升華，完畢后在30°C干燥6小時，即得。試驗例1 :rb_bFGF外用凍干粉末促進(jìn)表皮細(xì)胞生長及燒傷創(chuàng)面愈合的實驗研究1、試劑及儀器rb-bFGF ；細(xì)胞培養(yǎng)箱；流式細(xì)胞儀；電腦圖象分析系統(tǒng)。2、動物燒傷創(chuàng)面模型選20_25kg白色小豬5只，在實驗的前一天用刀片給動物的背部去毛。制成直徑為2. 5厘米的圓形深ΙΓ度燒傷創(chuàng)面18個(燒傷深度由病理切片和免疫組化分析證實)。每3個創(chuàng)面為一平行組，以不含rb-bFGF的生理鹽水用于創(chuàng)面作為陰性對照組，直接在創(chuàng)面涂1 %的磺胺嘧啶銀霜作為陽性對照組。3、給藥方式陽性對照組是向清創(chuàng)后的創(chuàng)面直接涂的磺胺嘧啶銀；陰性對照組是向清創(chuàng)后的創(chuàng)面直接涂抹不含rb-bFGF的生理鹽水；本發(fā)明組是向清創(chuàng)后的創(chuàng)面涂抹實施例1的外用凍干劑溶于8ml生理鹽水后的溶液；三組樣品每天換藥一次，共用藥10天。4、創(chuàng)面愈合指標(biāo)在每次換藥時照相，照片經(jīng)電腦圖象分析系統(tǒng)灰度積分來比較分析創(chuàng)面愈合的程度，創(chuàng)面面積越小，表明愈合效果越好。5、結(jié)果從表1可以看出，當(dāng)分別本發(fā)明組、陽性對照組和陰性對照組樣品48小時后，在倒置顯微鏡下可觀察到，含rb-bFGF的本發(fā)明組的平均創(chuàng)面面積小于陽性對照組和陰性對照組，表明本發(fā)明組的創(chuàng)面愈合較快。表1、各組樣品涂抹前和涂抹48小時后的平均創(chuàng)面面積(cm2)
權(quán)利要求
1.一種外用重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子的凍干制劑，其特征在于其組分及用量為重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子20000-50000IU、蛋白保護(hù)劑5_10mg和稀釋劑 50-100mg;其中，蛋白保護(hù)劑選自人血白蛋白、甘露醇或聚乙二醇；稀釋劑選自甘露醇、乳糖醇或葡萄糖；該凍干劑的制備工藝為將重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子、蛋白保護(hù)劑和稀釋劑用注射用水溶解后，用0. 22 μ m的濾膜無菌過濾，分裝于西林瓶中，裝盤后送入凍干機(jī)中，先將樣品在-20°C --40°C預(yù)凍2-5小時，然后開啟冷凝器，開啟真空系統(tǒng)，開始升溫升華，完畢后在15°C _40°C干燥4-g小時，即得。
2.如權(quán)利要求1所述的凍干制劑，其特征在于，所述的蛋白保護(hù)劑為人血白蛋白。
3.如權(quán)利要求1所述的凍干制劑，其特征在于，所述的稀釋劑為甘露醇。
全文摘要
一種外用重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子的凍干制劑。該外用凍干劑的組分及用量為重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子20000-50000IU、蛋白保護(hù)劑5-10mg和稀釋劑50-100mg；其中，所述的蛋白保護(hù)劑選自人血白蛋白、甘露醇和聚乙二醇，優(yōu)選人血白蛋白；稀釋劑選自甘露醇、乳糖醇或葡萄糖；本品具有穩(wěn)定性好，復(fù)溶后不含不溶物的特點。
文檔編號A61K38/18GK102389402SQ20111034245
公開日2012年3月28日 申請日期2011年11月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月2日
發(fā)明者方海洲, 朱愛堂, 藍(lán)瑄, 鄭贊順, 黃賢科 申請人:珠海億勝生物制藥有限公司