專利名稱：雙旋覆花內酯甲在制備腫瘤壞死因子抑制劑藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及藥物，具體涉及旋覆花提取物在制藥中的應用，尤其涉及雙旋覆花內酯甲在制備腫瘤壞死因子抑制劑藥物中的應用。
背景技術：
1975年Caswell等首先將卡介苗和內毒素給小鼠注射，在其血清中發現一種能使小鼠腫瘤發生出血性壞死的物質，稱為腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor)。TNF是單核巨噬細胞系統細胞產生的一種蛋白質，不僅對人與動物的多種腫瘤細胞有細胞毒性和細胞靜止作用，而且是機體炎癥與免疫的重要調節因子。它與機體發熱、休克、惡液質等的發生有密切關系，因此受到人們的日益重視和注意。TNF是由單核細胞/巨噬細胞產生的，具有與風濕性關節炎及骨關節炎發病機理有關的多種生物活性，首先通過刺激內皮可以促進所有類型白細胞的積累以表達粘附分子并釋放二級趨化性胞質，如白介素8 ；其次，TNF可以刺激關節內細胞，合成并表達可誘導的環氧合酶及可誘導的NO合酶。這些酶的產物，前列腺素及NO均是疼痛和發炎的主要介質； 再次，也可能是最重要的一點，TNF像白介素1 一樣，可以活化軟骨細胞，降解其自身的細胞外基質，并抑制導致軟骨破壞的軟骨基質成分的合成。除了這些作用外，TNF在其他胞質生產的調節中起著關鍵作用。腫瘤壞死因子-α (TNF-α)是一種具有多種生物活性的細胞因子，具有致炎、 引發細胞壞死和新血管形成等作用，參與風濕性關節炎、過敏性皮炎、哮喘乃至肝硬化、 糖尿病、冠心病等多種復雜炎癥或免疫性疾病的發病過程和病情進展過程。降低組織內的TNF-a水平或阻斷其病理作用對這些疾病的治療具有重要價值。近年來，臨床上以抗 TNF-α抗體治療自身免疫性炎癥疾病取得重大進展，進一步證明細胞外阻斷這種促炎細胞因子是一種有效的治療手段。由于TNF-α抗體等生物制品價格昂貴且必須注射給藥，當前更多的研究關注開發可以口服的長效TNF-a小分子抑制劑。然而，相對于TNF-a單抗等生物制劑，TNF-α的小分子拮抗劑的基礎和應用研究進展緩慢。目前報道的小分子TNF拮抗劑限于腫瘤壞死因子轉化酶(TACE，一種參與TNF合成和分泌的關鍵酶)抑制劑、機制不明的TNF-a表達抑制劑、基于細胞水平分析的機制不明的TNF-a活性抑制劑、以及各種與TNF-α表達和活性相關的細胞內信號通路抑制劑(包括NF-kB、AP-I和JNK/p38通路抑制劑)等。而直接以TNF-α分子為靶標的小分子抑制劑僅為2005年SCIENCE報道1例 [Science 2005 ；310 :1022]。旋覆花屬(Inula L.)植物是菊科(Compositae)中的一屬，全世界約有100種，分別于亞洲、歐洲和非洲，以地中海地區為主。中國有20余種，本屬有多種植物供藥用，如土木香(I.helenium)可作為健胃、利尿、祛痰和驅蟲藥；大花旋覆花(I. britarmica)具有消痰、下氣、軟堅、行水等功效。倍半萜類化合物是本屬植物的特征性成分，以桉烷型、吉馬烷型和愈創木烷型為主，還包括偽愈創木烷型、裂環桉烷型、欖烷型、蒼耳烷型和少量的無環倍半萜及倍半萜二聚體。研究表明，該屬植物中的倍半萜類化合物具有驅蟲殺蟲、抗菌抗腫瘤、抗病毒、免疫抑制的功效。旋覆花(Inula japonica)又名金佛花，金佛草(江浙)，六月菊(河北)。多年生草本，根狀莖短，橫走或斜生，有粗壯的須根。分布在中國北部、東北部、中部、東部、四川、 廣東等地，可供藥用。旋覆花的根及葉可治療刀傷疔毒；煎服可平喘鎮咳；其花是健胃祛痰藥，也治療胸中痞悶、胃部膨脹、噯氣、咳嗽、嘔逆等(《江蘇省藥材志》)。旋覆花在古方為祛痰、除濕、利腸，又為治水腫的主要藥?；衔镫p旋覆花內酯甲(Japonicone Α)是旋覆花(安徽亳州)的提取物，其化學結構式I如下
權利要求
1.雙旋覆花內酯甲在制備腫瘤壞死因子抑制劑藥物中的應用，其特征在于，所述雙旋覆花內酯甲的化學結構式如下
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述雙旋覆花內酯甲通過下列方法制備(1)提取將旋覆花的地上部分干燥，粉碎，以80 95%乙醇室溫浸泡提取3 4次， 每次12 M小時；合并提取液，提取液減壓濃縮成流浸膏，加水稀釋后，先以石油醚萃取， 再以二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，收集二氯甲烷萃取部位；(2)分離將上述二氯甲烷萃取部位應用硅膠柱色譜，以體積比為100 0 2 1的二氯甲烷/甲醇系統梯度洗脫，薄層色譜檢測，收集含有雙旋覆花內酯甲的流分，再經葡聚糖凝膠柱色譜，以體積比為1 1的二氯甲烷/甲醇洗脫，最后經液相色譜制備，得雙旋覆花內酯甲。
3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述藥物為由雙旋覆花內酯甲作為活性成分與藥用載體組成的藥物組合物。
4.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述應用為制備治療骨關節病、哮喘、支氣管炎或過敏性鼻炎藥物中的應用。
全文摘要
本發明提供了雙旋覆花內酯甲(化學結構式I)在制備腫瘤壞死因子抑制劑藥物中的應用。雙旋覆花內酯甲為旋覆花提取物。本發明采用反相對接技術虛擬篩選，發現TNF-α為雙旋覆花內酯甲的潛在結合蛋白，又通過BIACORE技術，證明雙旋覆花內酯甲可直接與偶聯在芯片上的TNF-α結合，可以抑制TNF-α與偶聯于傳感器芯片的TNF-R的結合。并進一步通過實驗確認雙旋覆花內酯甲能直接結合于TNF-α，并抑制其與TNF受體的相互作用，可用于制備腫瘤壞死因子抑制劑藥物。本發明所述藥物是由雙旋覆花內酯甲作為活性成分與藥用載體組成的藥物組合物?？勺鳛榕c治療腫瘤壞死因子相關的疾病如骨關節病、哮喘、支氣管炎、過敏性鼻炎等，為治療這些疾病提供了新的途徑，有較大的臨床應用價值。
文檔編號A61P19/02GK102406637SQ201110361799
公開日2012年4月11日 申請日期2011年11月15日 優先權日2011年11月15日
發明者單磊, 張衛東, 李慧梁, 沈云亨, 胡振林, 蘇娟, 覃江江, 趙靜, 金慧子 申請人:中國人民解放軍第二軍醫大學