專利名稱：物理改性后的眼鏡蛇蛇毒在制備治療關節(jié)炎藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明藥物新用途技術領域，具體涉及一種物理改性后的眼鏡蛇蛇毒在制備治療關節(jié)炎藥物中的用途。
背景技術：
蛇毒是由蛇的毒腺分泌的多種組分構(gòu)成的復雜混合物。新鮮毒液呈蛋清樣粘稠液體，具有特殊的腥味。不同蛇種毒液色澤各異，中華眼鏡蛇蛇毒呈淡黃色。蛇毒的干物質(zhì)中 90%以上是蛋白質(zhì)，是其毒性和其生物學活性的主要成分。中華眼鏡蛇蛇毒成分主要有眼鏡蛇蛇毒因子(1% _2%)、心臟毒素(又名細胞毒素40%-50%)、神經(jīng)毒素(10%)等其它類蛋白質(zhì)。祖國傳統(tǒng)醫(yī)學認為眼鏡蛇及其毒性成分可通經(jīng)絡，祛風濕，并具有強身健體之功效。早在二十世紀初，人們就開始應用蛇毒來緩解惡性腫瘤疼痛、神經(jīng)痛和關節(jié)痛，隨后出現(xiàn)一系列關于蛇毒有類似嗎啡樣鎮(zhèn)痛作用的報道。隨著研究的不斷深入，現(xiàn)在，蛇毒及其制品已應用于臨床，除了鎮(zhèn)痛作用外，研究發(fā)現(xiàn)在抗風濕、抗腫瘤以及在神經(jīng)系統(tǒng)疾病治療方面都有很好的療效。臨床上觀察發(fā)現(xiàn)眼鏡蛇蛇毒對類風濕關節(jié)炎患者有明顯療效，特別能明顯改善晚期類風濕關節(jié)炎患者關節(jié)疼痛。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種物理改性后的眼鏡蛇蛇毒在制備治療關節(jié)炎藥物中的應用，提供了一種治療關節(jié)炎的新思路、新方法。為了解決現(xiàn)有技術中的這些問題，本發(fā)明提供的技術方案是本發(fā)明目的是提供改性中華眼鏡蛇蛇毒在制備治療炎性增生和關損傷藥物中的用途。—種物理改性后的眼鏡蛇蛇毒在制備治療關節(jié)炎藥物中的應用。優(yōu)選的，所述物理改性后的眼鏡蛇蛇毒是將眼鏡蛇蛇毒用去離子水溶解后加熱變性，加熱溫度在50 100°C之間，加熱時間為Imin 30min后得到的。優(yōu)選的，所述物理改性后的眼鏡蛇蛇毒選自物理改性后的中華眼鏡蛇蛇毒或物理改性后的泰國眼鏡蛇蛇毒。優(yōu)選的，所述關節(jié)炎包括具有炎性增生或關節(jié)損傷的疾病。優(yōu)選的，所述物理改性后的眼鏡蛇蛇毒的給藥劑型選自口腔速溶藥膜、口服液、膠囊、涂劑、巴布劑、噴霧劑和注射劑。優(yōu)選的，所述物理改性后的眼鏡蛇蛇毒與其他藥物活性成分組成復方制劑或物理改性后的眼鏡蛇蛇毒與藥用輔料形成單方制劑。本發(fā)明中眼鏡蛇蛇毒為眼鏡蛇總毒，將其物理改性后可用于制備治療炎癥性增生和關節(jié)損傷藥物。所述的眼鏡蛇蛇毒為中華眼鏡蛇總蛇毒，根據(jù)成份和藥效的相同性，所述蛇毒還包括泰國眼鏡蛇蛇毒。所述藥物可以制備成選自以下的劑型口腔速溶藥膜、口服液、膠囊、 涂劑、巴布劑、噴霧劑和注射劑。當然，所述藥物還包括各種單方和復方制劑。本發(fā)明涉及中華眼鏡蛇蛇毒在制備治療炎癥性增生和關節(jié)炎藥物中的用途。本發(fā)明經(jīng)動物實驗證實物理改性后的中華眼鏡蛇總毒在藥學上有效量(如大鼠10-3000 μ g/ kg，人1 ΙΟΟΟμ g/kg)范圍內(nèi)能抑制炎性疼痛、炎性增生，并對佐劑性關節(jié)炎有明顯的治療作用，其能減輕關節(jié)腫大，疼痛和關節(jié)損傷等癥狀，具有用量小、安全、可口服、可注射、可透過口鼻粘膜和皮膚給藥等優(yōu)點。本發(fā)明通過中華眼鏡蛇總毒經(jīng)物理方法處理達到減毒增效目的，物理處理后的眼鏡蛇毒有抑制無菌棉球誘導的炎癥性肉芽增生、抑制免疫佐劑誘發(fā)的關節(jié)腫脹，疼痛和關節(jié)損傷，因此具有治療關節(jié)炎的作用，其療效超過未經(jīng)處理的眼鏡蛇毒或純化的神經(jīng)毒素 (Cobratoxin)。所述藥物包括口服液、口腔速溶藥膜、膠囊、涂劑、巴布劑、噴霧劑和注射劑等，所述藥物還包括各種單方和復方制劑。中華眼鏡蛇蛇毒在臨床上已用于治療風濕和緩解惡性腫瘤疼痛、神經(jīng)痛和關節(jié)痛等，但都用純化的神經(jīng)毒素、多種蛇毒的混合制劑或眼鏡蛇毒和其它中藥的復方制劑。鑒于中華眼鏡蛇毒毒性比較大，蛇毒中的藥用成分主要是蛋白質(zhì)，其結(jié)構(gòu)和生物活性可以被理化因素改變。蛇毒在用過氧化氫處理后，二硫鍵被打開，其毒性大大降低，但是鎮(zhèn)痛作用也幾乎消失，提示生物學活性被破壞。而蛋白質(zhì)加熱后可發(fā)生可逆性變性，變性后空間結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變，或部分大分子蛋白質(zhì)因加熱部分分解為小分子量蛋白質(zhì)。小鼠試驗證明這種加熱變性之后的蛇毒毒性明顯減少，而藥效增加。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)加熱變性的中華眼鏡蛇蛇毒對甲醛引起的炎性疼痛、雞蛋清引起的腫脹、無菌紙片引起的肉芽腫、完全弗氏佐劑導致的動物關節(jié)腫脹、疼痛和關節(jié)損傷有明顯的緩解作用，提示對風濕、類風濕性關節(jié)炎有很好的治療作用。這一發(fā)現(xiàn)，將對炎性疼痛、炎性增生性疾病、風濕類風濕性關節(jié)炎的研究和藥物開發(fā)產(chǎn)生重大的影響，并有臨床實用價值，為中華眼鏡蛇蛇毒開辟臨床新的用途。所述的眼鏡蛇總毒是在用去離子水溶解的情況下，加熱溫度為50 100°C之間， 時間在Imin 30min后得到的。相對于現(xiàn)有技術中的方案，本發(fā)明的優(yōu)點是1.采用經(jīng)物理改性的中華眼鏡蛇總毒，毒性低而藥效高。2.中華眼鏡蛇蛇毒不僅能改善甲醛所致的炎性疼痛、雞蛋清所致的足腫脹，還能減輕紙片引起的肉芽腫重量。3.中華眼鏡蛇蛇毒不僅能改善原發(fā)性關節(jié)炎足腫脹，還能提高對機械性痛的閾值。4.中華眼鏡蛇蛇毒不僅能改善繼發(fā)性關節(jié)炎關節(jié)腫大、足腫脹和疼痛等癥狀，還能改善軟骨和滑膜的病理改變。5.中華眼鏡蛇蛇毒不僅能降低繼發(fā)性關節(jié)炎炎性因子腫瘤壞死因子-α水平，還能提高抗炎因子白細胞介素-10的水平。6.中華眼鏡蛇蛇毒用量少，有效范圍大，從10 3000 μ g/kg都有很好的治療類風濕性關節(jié)炎的作用。人用劑量約為1 ΙΟΟΟμ g/kg。7.加熱變性之后的中華眼鏡蛇蛇毒組藥效優(yōu)于雷公藤治療組，并且優(yōu)于不加熱處理組和神經(jīng)毒素。
本發(fā)明公開了中華眼鏡蛇蛇毒在制備治療炎性增生和關節(jié)炎藥物中的用途。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)改性中華眼鏡蛇總毒在(10-3000yg/kg)范圍內(nèi)能抑制炎性疼痛、炎性增生和佐劑性關節(jié)炎有明顯的治療作用，其能減輕關節(jié)腫大，疼痛和關節(jié)損傷等癥狀，具有用量小、安全、可口服、可注射、可透過口鼻粘膜和皮膚給藥等優(yōu)點。


下面結(jié)合附圖及實施例對本發(fā)明作進一步描述圖1為中華眼鏡蛇蛇毒給藥Mi后對甲醛致炎致痛添足時間的影響；圖2為中華眼鏡蛇蛇毒對紙片誘導的肉芽腫重量的影響；圖3為各種藥物對比治療類風濕性關節(jié)炎大鼠軟骨的藥效病理切片結(jié)果；圖4為各種藥物對比治療類風濕性關節(jié)炎大鼠滑膜的藥效病理切片結(jié)果。
具體實施例方式以下結(jié)合具體實施例對上述方案做進一步說明。應理解，這些實施例是用于說明本發(fā)明而不限于限制本發(fā)明的范圍。實施例中采用的實施條件可以根據(jù)具體實驗的條件做進一步調(diào)整，未注明的實施條件通常為常規(guī)實驗中的條件。實施例物理處理后的中華眼鏡蛇毒的動物藥效學實驗在中華眼鏡蛇蛇毒在治療類風濕性關節(jié)炎中的動物實驗中，實施例采用灌胃給藥，給藥劑量在10-3000 μ g/kg，一天一次。本實施例動物實驗研究情況如下甲醛致炎性痛模型是化學傷害性刺激引起的持續(xù)疼痛的有效模型，廣泛應用于疼痛機制的研究及鎮(zhèn)痛藥的篩選。將KM小鼠隨機分為6組(η = 12)雌性各半，體重18-22g: 生理鹽水對照組、中華眼鏡蛇蛇毒加熱小劑量組(30yg/kg)、中劑量組(90yg/kg)、大劑量組(270 μ g/kg)、中劑量不加熱組(90 μ g/kg)、Cobratoxin (30 μ g/kg)。單次給予中華眼鏡蛇蛇毒他后，于小鼠右側(cè)足底皮下注射5%甲醛溶液20 μ 1致痛，立即放回透明觀察容器內(nèi)，用計時器分別記錄小鼠添足時間(秒)，記錄兩個時相。第I時相為急性期即致痛后的0 5min，第II時相為強直期即致痛后20 30min。蛇毒中劑量和大劑量蛇毒明顯減少甲醛所致的炎性疼痛小鼠的添足時間，優(yōu)于中劑量不加熱組和Cobratoxin。結(jié)果見圖1
為中華眼鏡蛇蛇毒給藥他后對甲醛致炎致痛添足時間的影響(f ±SD,n=12)；與對照組相比*P < 0. 05, **P < 0. Ol0炎癥往往伴有紅、腫、熱、痛。總體來說炎癥分為三個時相。第一個時相是血管滲透性增加引起血管內(nèi)容物滲入到組織間隙所致，稱之為急性階段。第二個時相是白細胞從血液滲透到組織間隙中，稱之為亞急性階段。第三個時相是肉芽腫形成階段，稱之為慢性修復性階段。雞蛋清是含有很多成分的異物，通過足底皮下注射形成急性非特異性炎癥，觀察給予蛇毒對足腫脹的影響。10%雞蛋清右足足底皮下注射0. Iml引起足腫脹，于注射之前連續(xù)五天灌胃預防給藥，在注射蛋清之前測量大鼠右足的足體積為基礎值，并連續(xù)測量注射蛋清后0. 5h、lh、2h、4h這四個時間點的右足足體積，觀察指標為四個時間點的右足足體積與蛋清注射之前的足體積差值。0.證腫脹最為明顯，在Ih中劑量和大劑量蛇毒能明顯改善足腫脹，在其余的時間點具有改善足腫脹的趨勢。結(jié)果見表1。
表 權(quán)利要求
1.一種物理改性后的眼鏡蛇蛇毒在制備治療關節(jié)炎藥物中的應用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用，其特征在于所述物理改性后的眼鏡蛇蛇毒是將眼鏡蛇蛇毒用去離子水溶解后加熱變性，加熱溫度在50 100°C之間，加熱時間為Imin 30min后得到的。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用，其特征在于所述物理改性后的眼鏡蛇蛇毒選自物理改性后的中華眼鏡蛇蛇毒或物理改性后的泰國眼鏡蛇蛇毒。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用，其特征在于所述關節(jié)炎包括具有炎性增生或關節(jié)損傷的疾病。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用，其特征在于所述物理改性后的眼鏡蛇蛇毒的給藥劑型選自口腔速溶藥膜、口服液、膠囊、涂劑、巴布劑、噴霧劑和注射劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用，其特征在于所述物理改性后的眼鏡蛇蛇毒與其他藥物活性成分組成復方制劑或物理改性后的眼鏡蛇蛇毒與藥用輔料形成單方制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種物理改性后的眼鏡蛇蛇毒在制備治療關節(jié)炎藥物中的應用。本發(fā)明經(jīng)動物實驗證實物理改性后的中華眼鏡蛇總毒在(10-3000μg/kg)范圍內(nèi)能抑制炎性疼痛、炎性增生和佐劑性關節(jié)炎有明顯的治療作用，其能減輕關節(jié)腫大，疼痛和關節(jié)損傷等癥狀，具有用量小、安全、可口服、可注射、可透過口鼻粘膜和皮膚給藥等優(yōu)點。
文檔編號A61K35/58GK102406665SQ20111036192
公開日2012年4月11日 申請日期2011年11月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月16日
發(fā)明者朱扣柱, 秦正紅 申請人:蘇州人本藥業(yè)有限公司