專利名稱：靜注人免疫球蛋白的生產工藝的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種免疫球蛋白的生產工藝，具體涉及一種靜注人免疫球蛋白的生產工藝。
背景技術：
目前，從血漿中提取白蛋白的分離提取工藝主要采用基于Cohn6法的低溫乙醇法來進行，該方法是根據血漿蛋白理化性質的差別，加入不同濃度的鹽、有機溶劑和酸堿，通過改變影響蛋白質穩定性的條件而分別沉淀提取出不同的蛋白質。在低溫乙醇法中影響蛋白質沉淀反應的因素主要有5個，即pH值、溫度、蛋白濃度、離子強度、乙醇濃度。通過控制這些參數可以逐級沉淀血漿中的不同蛋白質成份，一般先從血漿中沉淀出組份I + II +III，然后再分離出組份II，最終從組份II中獲得人免疫球蛋白。

發明內容
本發明的目的是提供一種直接從低溫乙醇法組份I + II +III沉淀中提取靜注人免疫球蛋白產品的生產工藝。本發明所采用的技術方案是
一種靜注人免疫球蛋白的生產工藝，其特征在于 由以下步驟實現
步驟一取組份I + II +III沉淀，注入10-15倍體積、5°C以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液溫度在1 5°C攪拌溶解后，調節pH值至5. 2士0. 1，加入乙醇至濃度13-15%，并控制溶液溫度在-5--3°C之間；
步驟二 待沉淀產生完全后，在混合溶液中按體積加入珍珠巖至3. 0士0. 2g/L，硅藻土至3.0士0. 2g/L，加壓過濾分離出體系中產生的沉淀，取出濾過液，調節pH值至7. 1 士0. 1， 按體積加入氯化鈉至3. 7士0. lg/L，繼續添加乙醇至濃度19 21%，控制液體溫度在-8 -6°C ；
步驟三待沉淀產生完全后，在混合溶液中按體積加入珍珠巖至3. 0士0. 2g/L，硅藻土至3. 0士0. 2g/L，壓濾分離出體系中產生的沉淀；
步驟四將步驟三得到的沉淀用5 7倍體積、5°C以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液溫度在1 5°C，攪拌1. 5 2小時令其溶解；調節pH值至6. 8士0. 2，繼續添加乙醇至濃度 4. 5 士 1%，同時降溫至0 士 1 °C，深層過濾；
步驟五將深層過濾后的濾液，調節電導率至0. 14士0. 05ms/m, pH值至6. 8士0.2， 用Q-瓊脂糖凝膠FF進行離子交換層析，流出液調節pH值至5. 2士0.2，電導率至 0. 10 士0. 05ms/m，用DEAE SFF進行離子交換層析處理；
步驟六層析后的液體調節PH值至4. 2士0. 3，進行超濾處理，用8 10倍注射用水透析，最后濃縮至蛋白含量在50 90g/L之間；步驟七濃縮后的液體采用孔徑0. 1 μ m的濾芯預過濾，之后再用15-20nm孔徑的納米膜進行過濾去除病毒；
步驟八納米膜過濾后的液體超濾濃縮至蛋白濃度102士 lg/L，調節pH值至4. 8士0.3， 按體積加入250士40mmol/L的甘氨酸或L-脯氨酸；
步驟九將配制好的蛋白質溶液除菌分裝后，37°C下放置4小時進行低pH病毒滅活，經燈檢包裝后獲得靜注人免疫球蛋白制品。所述的pH值調節均采用氫氧化鈉。所述的添加乙醇的質量分數為95%。本發明具有以下優點
與一般靜注人免疫球蛋白產品生產工藝相比，該發明有效提高了人免疫球蛋白的總收得率，降低了生產成本，提高了企業利潤；在分離過程中按各組份分步沉淀，并采用離子交換層析進行純化，生產工藝更加精細，提高了制品的質量。采用低PH孵放滅活病毒工藝和納米膜過濾去除病毒的二次病毒滅活工藝，提高了產品的安全性。
具體實施例方式下面結合具體實施方式
對本發明進行詳細的說明。本發明采用白蛋白提取過程中產生的組份I + II +III沉淀，通過調節蛋白質溶液的PH值、溫度、蛋白濃度、離子強度、乙醇濃度，經分步壓濾分離技術分離出不同成份的蛋白質，有效提取組份I + II +III沉淀中的人免疫球蛋白。本發明所述的靜注人免疫球蛋白產品的生產工藝由以下步驟實現 實施例一
步驟一從冷庫中取出組份I + II +III沉淀，稱重后置于潔凈的不銹鋼反應罐中，向反應罐中注入10倍體積、5°C以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液溫度在1°C，攪拌3小時令其溶解。待沉淀完全溶解后，加入pH=4. 3的醋酸緩沖液調節pH值至4. 7，再加入pH=5. 9的醋酸緩沖液調節PH值至5. 1。緩慢加入95% (ν/ν)的乙醇令溶液中乙醇含量達到13%，并控制溶液溫度在_5°C之間。步驟二 待沉淀產生完全后，按體積加入珍珠巖至2. 8g/L，硅藻土至2. 8g/L，繼續攪拌使液體呈漿狀。用加壓過濾的方法分離出體系中產生的沉淀即F I +III沉淀。將濾過液即F I +III上清液移入潔凈的不銹鋼反應罐中，加入0.2 mol/L的氫氧化鈉調節pH值至 7. 0，按體積加入氯化鈉至3. 6g/L，繼續添加乙醇至濃度19%，控制液體溫度在-8°C。步驟三待體系中沉淀產生完全后按體積加入珍珠巖至2. 8g/L，硅藻土至2. Sg/ L，繼續攪拌使液體呈漿狀。壓濾分離出體系中產生的沉淀即F II沉淀，濾液棄做他用。步驟四將F II沉淀用5倍體積、5°C以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液溫度在 1°C攪拌1. 5小時令其溶解。用0. 2 mol/L的氫氧化鈉調節pH值至6. 6，緩慢添加95% (ν/ ν)的乙醇至濃度4. 4%，同時降溫至_1°C，深層過濾。步驟五將深層過濾后的濾液，調節電導率至0. 09ms/m，pH值至6. 6，用Q-瓊脂糖凝膠FF (Q-SFF)進行離子交換層析。流出液調節pH值至5. 0，電導率至0. 05ms/m,用DEAE SFF進行離子交換層析處理。步驟六層析后的液體調節PH值至3. 9進行超濾處理，用8倍注射用水透析，最后濃縮至蛋白含量在50g/L之間。步驟七濃縮后的液體采用孔徑0. Iym的濾芯預過濾，之后再用15nm孔徑的納米膜進行過濾去除病毒。步驟八納米膜過濾后的液體超濾濃縮至蛋白濃度101g/L，調節pH值至4. 5，按體積加入210mmol/L的甘氨酸。步驟九將配制好的蛋白質溶液除菌分裝后，37°C下放置4小時進行低pH病毒滅活，經燈檢包裝后獲得靜注人免疫球蛋白制品。實施例二
步驟一從冷庫中取出組份I + II +III沉淀，稱重后置于潔凈的不銹鋼反應罐中，向反應罐中注入10倍體積、5°C以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液溫度在3°C，攪拌4小時令其溶解。待沉淀完全溶解后，加入pH=4. 3的醋酸緩沖液調節pH值至4. 8，再加入pH=5. 9的醋酸緩沖液調節PH值至5. 2。緩慢加入95% (ν/ν)的乙醇令溶液中乙醇含量達到14%，并控制溶液溫度在_4°C之間。步驟二 待沉淀產生完全后，按體積加入珍珠巖至3. Og/L，硅藻土至3. Og/L，繼續攪拌使液體呈漿狀。用加壓過濾的方法分離出體系中產生的沉淀即F I +III沉淀。將濾過液即F I +III上清液移入潔凈的不銹鋼反應罐中，加入0.2 mol/L的氫氧化鈉調節pH值至 7. 1，按體積加入氯化鈉至3. 7g/L，繼續添加乙醇至濃度20%，控制液體溫度在-7。C。步驟三待體系中沉淀產生完全后按體積加入珍珠巖至3. Og/L，硅藻土至3. Og/ L，繼續攪拌使液體呈漿狀。壓濾分離出體系中產生的沉淀即F II沉淀，濾液棄做他用。步驟四將F II沉淀用6倍體積、5°C以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液溫度在 3°C攪拌1. 5小時令其溶解。用0. 2 mol/L的氫氧化鈉調節pH值至6. 8，緩慢添加95% (ν/ ν)的乙醇至濃度4. 5%，同時降溫至0°C，深層過濾。步驟五將深層過濾后的濾液，調節電導率至0. Hms/m，pH值至6. 8，用Q-瓊脂糖凝膠FF (Q-SFF)進行離子交換層析。流出液調節pH值至5. 2，電導率至0. 10ms/m,用DEAE SFF進行離子交換層析處理。步驟六層析后的液體調節pH值至4. 2進行超濾處理，用9倍注射用水透析，最后濃縮至蛋白含量在70g/L之間。步驟七濃縮后的液體采用孔徑0. Ιμπι的濾芯預過濾，之后再用15nm孔徑的納米
膜進行過濾去除病毒。步驟八納米膜過濾后的液體超濾濃縮至蛋白濃度102g/L，調節pH值至4. 8，按體積加入250mmol/L的甘氨酸。步驟九將配制好的蛋白質溶液除菌分裝后，37°C下放置4小時進行低pH病毒滅活，經燈檢包裝后獲得靜注人免疫球蛋白制品。實施例三
步驟一從冷庫中取出組份I + II +III沉淀，稱重后置于潔凈的不銹鋼反應罐中，向反應罐中注入15倍體積、5°C以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液溫度在5°C，攪拌5小時令其溶解。待沉淀完全溶解后，加入pH=4. 3的醋酸緩沖液調節pH值至4. 9，再加入pH=5. 9的醋酸緩沖液調節PH值至5. 3。緩慢加入95% (ν/ν)的乙醇令溶液中乙醇含量達到15%，并控制溶液溫度在_3°C之間。
步驟二 待沉淀產生完全后，按體積加入珍珠巖至3. 2g/L，硅藻土至3. 2g/L，繼續攪拌使液體呈漿狀。用加壓過濾的方法分離出體系中產生的沉淀即F I +III沉淀。將濾過液即F I +III上清液移入潔凈的不銹鋼反應罐中，加入0.2 mol/L的氫氧化鈉調節pH值至 7. 2，按體積加入氯化鈉至3. 8g/L，繼續添加乙醇至濃度21%，控制液體溫度在-6°C。步驟三待體系中沉淀產生完全后按體積加入珍珠巖至3. 2g/L，硅藻土至3. 2g/ L，繼續攪拌使液體呈漿狀。壓濾分離出體系中產生的沉淀即F II沉淀，濾液棄做他用。步驟四將F II沉淀用7倍體積、5°C以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液溫度在 5°C攪拌2小時令其溶解。用0. 2 mol/L的氫氧化鈉調節pH值至7. 0，緩慢添加95% (ν/ν) 的乙醇至濃度4. 6%，同時降溫至1°C，深層過濾。步驟五將深層過濾后的濾液，調節電導率至0. 19ms/m，pH值至7.0，用Q-瓊脂糖凝膠FF (Q-SFF)進行離子交換層析。流出液調節pH值至5. 4，電導率至0. 15ms/m,用DEAE SFF進行離子交換層析處理。步驟六層析后的液體調節pH值至4. 5進行超濾處理，用10倍注射用水透析，最后濃縮至蛋白含量在90g/L之間。步驟七濃縮后的液體采用孔徑0. 1 μ m的濾芯預過濾，之后再用20nm孔徑的納米膜進行過濾去除病毒。步驟八納米膜過濾后的液體超濾濃縮至蛋白濃度103g/L，調節pH值至5. 1，按體積加入^Ommol/L的L-脯氨酸。步驟九將配制好的蛋白質溶液除菌分裝后，37°C下放置4小時進行低pH病毒滅活，經燈檢包裝后獲得靜注人免疫球蛋白制品。
權利要求
1.一種靜注人免疫球蛋白的生產工藝，其特征在于 由以下步驟實現步驟一取組份I + II +III沉淀，注入10-15倍體積、5°C以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液溫度在1 5°C攪拌溶解后，調節pH值至5. 2士0. 1，加入乙醇至濃度13-15%，并控制溶液溫度在-5--3°C之間；步驟二 待沉淀產生完全后，在混合溶液中按體積加入珍珠巖至3. 0士0. 2g/L，硅藻土至3.0士0. 2g/L，加壓過濾分離出體系中產生的沉淀，取出濾過液，調節pH值至7. 1 士0. 1， 按體積加入氯化鈉至3. 7士0. lg/L，繼續添加乙醇至濃度19 21%，控制液體溫度在-8 -6°C ；步驟三待沉淀產生完全后，在混合溶液中按體積加入珍珠巖至3. 0士0. 2g/L，硅藻土至3. 0士0. 2g/L，壓濾分離出體系中產生的沉淀；步驟四將步驟三得到的沉淀用5 7倍體積、5°C以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液溫度在1 5°C，攪拌1. 5 2小時令其溶解；調節pH值至6. 8士0. 2，繼續添加乙醇至濃度 4. 5 士 1%，同時降溫至0 士 1 °C，深層過濾；步驟五將深層過濾后的濾液，調節電導率至0. 14士0. 05ms/m, pH值至6. 8士0.2， 用Q-瓊脂糖凝膠FF進行離子交換層析，流出液調節pH值至5. 2士0.2，電導率至 0. 10 士0. 05ms/m，用DEAE SFF進行離子交換層析處理；步驟六層析后的液體調節PH值至4. 2士0. 3，進行超濾處理，用8 10倍注射用水透析，最后濃縮至蛋白含量在50 90g/L之間；步驟七濃縮后的液體采用孔徑0. 1 μ m的濾芯預過濾，之后再用15-20nm孔徑的納米膜進行過濾去除病毒；步驟八納米膜過濾后的液體超濾濃縮至蛋白濃度102士 lg/L，調節pH值至4. 8士0.3， 按體積加入250士40mmol/L的甘氨酸或L-脯氨酸；步驟九將配制好的蛋白質溶液除菌分裝后，37°C下放置4小時進行低pH病毒滅活，經燈檢包裝后獲得靜注人免疫球蛋白制品。
2.根據權利要求1所述的靜注人免疫球蛋白的生產工藝，其特征在于 所述的PH值調節均采用氫氧化鈉。
3.根據權利要求1或2所述的靜注人免疫球蛋白的生產工藝，其特征在于 所述的添加乙醇的質量分數為95%。
全文摘要
本發明涉及一種免疫球蛋白的生產工藝，具體涉及一種靜注人免疫球蛋白的生產工藝。從血漿中提取白蛋白的分離提取工藝主要采用基于Cohn6法的低溫乙醇法來進行。本發明取組份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀，溶解沉淀，調節pH值，加入乙醇至濃度13-15%；待沉淀產生完全后，加入珍珠巖和硅藻土，加壓過濾分離出體系中產生的沉淀，取出濾過液，加入氯化鈉和乙醇；在混合溶液中再加入珍珠巖和硅藻土，壓濾分離沉淀，溶解沉淀，繼續添加乙醇；深層過濾后調節電導率和pH值，離子交換層析，進行超濾處理，再用納米膜進行過濾，加入甘氨酸或L-脯氨酸。本發明提高了人免疫球蛋白的總收得率，降低了生產成本，生產工藝更加精細，提高了制品的質量。
文檔編號A61K47/16GK102552906SQ20121000687
公開日2012年7月11日 申請日期2012年1月11日 優先權日2012年1月11日
發明者張華平, 張振, 張泓喆, 趙軍 申請人:西安回天血液制品有限責任公司