專利名稱：脂肪酸-rgd-脂肪醇偶聯(lián)物介導(dǎo)表阿霉素靶向脂質(zhì)體制備及抗腫瘤活性評(píng)價(jià)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及靶向釋藥載體，尤其涉及脂肪酸-RGD-脂肪醇介導(dǎo)靶向藥物載體及其構(gòu)建方法，本發(fā)明還涉及藥物載體在制備靶向抗腫瘤藥物脂質(zhì)體中的應(yīng)用，屬于生物醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
許多惡性腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移均與整合素表達(dá)異常或分子結(jié)構(gòu)改變相關(guān)。整合素是一跨膜蛋白大家族，由a、^兩種亞基構(gòu)成異二聚體。目前發(fā)現(xiàn)a約有18種，P約有8 種，至少有24種異二聚體的整合素形式。整合素在腫瘤的進(jìn)展可能具有兩重性I)腫瘤發(fā)生早期，整合素表達(dá)降低可致瘤細(xì)胞與基底膜或ECM成分的粘附作用減弱，從而有利于腫瘤在局部生長(zhǎng)與擴(kuò)散；2)瘤細(xì)胞進(jìn)入血循環(huán)后，整合素表達(dá)增高有利于瘤細(xì)胞粘附于血管內(nèi)皮，繼而定位增殖。整合素在腫瘤細(xì)胞表面的表達(dá)高于正常細(xì)胞是公認(rèn)的事實(shí)。
已知，精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸三肽序列(Arg-Gly-Asp，RGD)是整合素特異識(shí)別序列片段，RGD三肽及修飾物通過與整合素特異結(jié)合，具有阻止腫瘤細(xì)胞定位增殖、抗腫瘤新生血管生成作用。
脂質(zhì)體(liposome)是直徑50 IOOOnm的球型脂質(zhì)雙層，磷脂膜的組成成分靈活，可以制成種類、大小、表面特征不同的多種類型，作為生物活性物質(zhì)的有效運(yùn)輸載體。親水性藥物可以包容在脂質(zhì)體的水核內(nèi)，脂溶性藥物可以嵌入磷脂雙層間，中性藥物可以通過調(diào)整脂質(zhì)體內(nèi)的PH值或通過添加反相離子與藥物形成分子復(fù)合物而穩(wěn)定地結(jié)合于脂質(zhì)體內(nèi)。
普通脂質(zhì)體不具有靶向性。如在脂質(zhì)體表面結(jié)合抗體、配體，利用腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞表面表達(dá)的抗原受體的差異，通過抗原、抗體和受體、配體的特異性作用增加脂質(zhì)體的主動(dòng)靶向性，這樣可以提高治療指數(shù)。
抗腫瘤藥物的主動(dòng)靶向性制劑將是改進(jìn)抗腫瘤藥物制劑的新趨向。為了使載體系統(tǒng)具有特異靶向性，可將各種活性物質(zhì)耦聯(lián)到載體表面。借助這種特異性相互作用可將載有各種抗腫瘤藥物的載體系統(tǒng)靶向到含有特異性受體的器官、組織或細(xì)胞；同時(shí)受體與配體結(jié)合可促進(jìn)載體系統(tǒng)內(nèi)藥物釋放到腫瘤細(xì)胞內(nèi)。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及一種作為錨點(diǎn)化合物的偶聯(lián)化合物，其化學(xué)式如下=CH3(CH2) nC0-Arg-Gly-Asp-0CH2 (CH2)ltlCH3,其中，n = 4-16。
優(yōu)選的偶聯(lián)化合物，n = 6，8，10，12，14。
本發(fā)明還包括所述的作為錨點(diǎn)化合物的偶聯(lián)化合物的方法，包括將 Arg-Gly-Asp與脂肪酸鏈進(jìn)行綴合，再與十二醇進(jìn)行綴合，即得。
本發(fā)明還涉及一種抗腫瘤藥物靶向脂質(zhì)體，含有所述的作為錨點(diǎn)化合物的偶聯(lián)化合物。
進(jìn)一步的，所述的抗腫瘤藥物靶向脂質(zhì)體，由以下各組分組成抗腫瘤藥物，磷脂， 膽固醇和錨點(diǎn)化合物的偶聯(lián)化合物。
進(jìn)一步的，所述的抗腫瘤藥物靶向脂質(zhì)體，由以下組分制成，下述百分比均為質(zhì)量百分比抗腫瘤藥物2-8%，磷脂70-80%，膽固醇10-20%和權(quán)利要求I或2所述的作為錨點(diǎn)化合物的偶聯(lián)化合物為3-10%。
進(jìn)一步的，抗腫瘤藥物為表阿霉素，阿霉素，吡喃阿霉素，紫杉醇，多西紫杉醇，柔紅霉素阿克拉霉素、光輝霉素中的一種或多種。
進(jìn)一步的，磷脂為卵磷脂，大豆磷脂，二棕櫚酰磷脂酰膽堿，二硬脂酰磷脂酰膽堿中的一種或多種。
本發(fā)明涉及一種制備上述抗腫瘤藥物靶向脂質(zhì)體的方法，包括將除抗腫瘤藥物之外的其他各組分用氯仿溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，加入150mmol L^1 (NH4)2SO4溶液，超聲分散，得空白脂質(zhì)體混懸液。將空白脂質(zhì)體置透析袋中透析4-5次，每次透析約10h，取出透析內(nèi)液置于茄瓶中；另精密稱取抗腫瘤藥物適量，溶于水中，將此溶液加入至空白脂質(zhì)體混懸液，混勻，于熱水浴中放置，振搖，即得。
本發(fā)明涉及所述的具有兩親性的脂肪酸-RGD-脂肪醇綴合物在制備抗腫瘤靶向脂質(zhì)體藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明涉及所述的靶向脂質(zhì)體等各種藥物載體在制備治療腫瘤的藥物中的用途。
本發(fā)明涉及以腹水瘤S180小鼠為模型，采用尾靜脈給藥的治療方案評(píng)價(jià)所述的抗腫瘤靶向脂質(zhì)體制劑的抗腫瘤活性，結(jié)果顯示靶向脂質(zhì)體比各對(duì)照組具有更優(yōu)異的抗腫瘤活性。
本發(fā)明涉及以肝癌細(xì)胞H印G2為模型，采用MTT法評(píng)價(jià)所述的抗腫瘤靶向脂質(zhì)體制劑的抗腫瘤活性，結(jié)果顯示靶向脂質(zhì)體比各對(duì)照組具有更優(yōu)異的抗腫瘤活性。
以下為實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
本發(fā)明的抗腫瘤藥物靶向脂質(zhì)體對(duì)S180腹水瘤小鼠的治療作用
取腹腔接種S■腹水瘤第八天的昆明種小鼠一只，脫頸椎處死，用75%酒精消毒后置于超凈臺(tái)內(nèi)，用鑷子夾起腹部中線偏右的皮膚并用小剪刀剪一小口至可見乳白色腹水流出。將吸管由開口處輕輕插入腹腔吸出腹水。吸得的腹水加到裝有約3ml滅菌生理鹽水的15ml的離心管中，使體積增至約10ml。用吸管輕輕吹氣，使腹水與生理鹽水混勻。試管加蓋，1000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘。棄去上清液后，加9ml滅菌生理鹽水，1000轉(zhuǎn)/分離心5 分鐘,棄去上清液。往試管底部的乳白色膠狀物中加9ml滅菌生理鹽水，用吸管吹均勻。取 IOOu I該懸浮液加至9. 9ml滅菌生理鹽水中，混勻，加蓋，放入冰中待用。取IOOiU上述瘤細(xì)胞稀釋液置入Eppendoff小管中，加IOOy I臺(tái)盼蘭染液,混勻。取少許該混勻液加至計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)池內(nèi)，于顯微鏡下計(jì)算4個(gè)大格中被染上藍(lán)色的存活瘤細(xì)胞的個(gè)數(shù)。將原液中的存活瘤細(xì)胞稀釋成I. 5X IO7個(gè)/ml，用于接種。用2%碘酒棉球和75%酒精棉球在小鼠右側(cè)腋下消毒，并注入0. 2ml瘤細(xì)胞液，緩緩抽出針頭。按此方法給每批昆明種小鼠接種， 隨機(jī)分組，放入動(dòng)物室飼養(yǎng)。
藥物配制本實(shí)驗(yàn)共設(shè)14組1.表阿霉素注射液組；2.表阿霉素脂質(zhì)體(實(shí)施例2所制備)組；3.膜材中含有Ch3(CH2)10CO-GGD-O(CH2)11CH3的表阿霉素脂質(zhì)體組(實(shí)施例3所制備)組；4.膜材中含有Ch3(Ch2)6CO-RGDO(Ch2)11Ch3的表阿霉素脂質(zhì)體組(實(shí)施例4所制備)組；5.膜材中含有Ch3(Ch2)8CO-RGDO(Ch2)11Ch3的表阿霉素脂質(zhì)體組(實(shí)施例5所制備)組；6.膜材中含有Ch3(Ch2)10CO-RGDO(Ch2)11Ch3的表阿霉素脂質(zhì)體組(實(shí)施例6所制備)組；7.膜材中含有CH3(CH2)12C0-RGD0(CH2)nCH3的表阿霉素脂質(zhì)體組(實(shí)施例7所制備)組；8.膜材中含有Ch3(Ch2)14CO-RGDO(Ch2)11Ch3的表阿霉素脂質(zhì)體組(實(shí)施例8所制備)組9.膜材中含有小量CH3(CH2)1QC0-RGD0(CH2)nCH3的表阿霉素脂質(zhì)體組； 10.膜材中含有Ch3(Ch2)iciCO-RGDO(Ch2)11Ch3的大劑量表阿霉素脂質(zhì)體組；11.膜材中含有 Ch3(Ch2)10CO-RGDO(Ch2)11Ch3 的小劑量表阿霉素脂質(zhì)體組；12. Ch3(Ch2)10CO-RGDO(Ch2)11Ch3 脂質(zhì)體組(實(shí)施例6所制備)組；13.空白脂質(zhì)體組；14.生理鹽水溶液組。
藥物注射液制備精密稱取藥物，加入0.9%氯化鈉注射液溶解即得。陽性對(duì)照是表阿霉素的脂質(zhì)體，陰性對(duì)照為空白脂質(zhì)體。各組藥物除第10，11組(膜材中含有 CH3(CH2) 10CO-RGDO (CH2) nCH3的大劑量與小劑量表阿霉素脂質(zhì)體組)以0. 3mg/mL與0. Img/ ml夕卜,其余均為0. 25mg/mL配制,脂質(zhì)體制備方法采用硫酸銨梯度法。
實(shí)驗(yàn)方法將右側(cè)腋下接種有腹水瘤的小鼠隨機(jī)分組，每組10只，共14組。各組小鼠正常飼養(yǎng)，從接種后24小時(shí)開始給藥，每隔2天一次，共4次。每次尾靜脈注射上述藥物0.2ml。9天后將各組腹水瘤小鼠處死，解剖，取瘤。并稱瘤重，按抑瘤率=[(陰性對(duì)照組平均瘤重-治療組平均瘤重)/陰性對(duì)照組平均瘤重]X 100%計(jì)算抑瘤率。獲得的數(shù)據(jù)以(X 土SDg)表示，并做t檢驗(yàn)。結(jié)果見表I。
由表I可見，含有RGD肽偶聯(lián)物的表阿霉素脂質(zhì)體有優(yōu)越的抗腫瘤活性；通過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析可看出其中4，5，6，7，8，9，10組抗腫瘤作用均高于表阿霉素脂質(zhì)體組；2，3，4，5，6， 7,8,9,10組抗腫瘤作用均高于表阿霉素注射液組；4，5，6，7，8，9，10組抗腫瘤作用均高于含有對(duì)照化合物CH3 (CH2) 10CO-GGDO (CH2) nCH3的表阿霉素脂質(zhì)體組。
表I表阿霉素靶向制劑對(duì)腹水瘤S180小鼠的作用(n = 10)
藥剤瘤重(X土SDg)抑瘤率I.表阿霉素注射液組1.056士 0.29618.54%2.表阿霉素脂質(zhì)體組0.769士 0.231*40.83%3.含有CH3(CH2)ioCO-GGDO(CH2)nCH3的表阿霉素脂質(zhì)組0.767士 0.219*41.82%4.含有CH3(CH2)6CO-RGDO(CH2)nCH3的表阿霉素脂質(zhì)體組0.522士0.146*，#，&59.72%5.含有CH3(CH2)8CO-RGDO(CH2)nCH3的表阿霉素脂質(zhì)體組0.469士0.225*，#，&63.83%6.含有CH3(CH2)10CO-RGDO(CH2)nCH3的表阿霉素脂質(zhì)體組0.426士0.121*，#，&67.88%7.含有CH3(CH2)12CO-RGDO(CH2)nCH3的表阿霉素脂質(zhì)體組0.399±0.090*, #，&69.18%8.含有CH3(CH2)14CO-RGDO(CH2)nCH3的表阿霉素脂質(zhì)體組0.316士0.351*，#，&75.61%9.含有小量CH3(CH2)10CO-RGDO(CH2)nCH3的表阿霉素脂質(zhì)0.539士0.193*，#，&58.42%體組10.含有CH3(CH2)10CO-RGDO(CH2)nCH3的大劑量表阿霉素脂0.375士0.086*，#，&71.04%質(zhì)體組11.含有CH3(CH2)10CO-RGDO(CH2)nCH3的小劑量表阿霉素脂0.692士 0.22246.62%質(zhì)體組12. RGD脂質(zhì)體組0.999士 0.26022.92%13.空白脂質(zhì)體組1.201 士 0.13214.生理鹽水溶液1.296士 0.261
#對(duì)比于表阿霉素注射液有顯著意義(P < 0. 01) 對(duì)比于表阿霉素注射液有意義(P < 0. 05) ;*對(duì)比于表阿霉素脂質(zhì)體組有顯著意義(P < 0. 01) ;&對(duì)比于含有對(duì)照化合物Ch3(Ch2)iciCO-GGDO(Ch2)11Ch3的表阿霉素脂質(zhì)體組有顯著意義(P < 0. 01)。
本發(fā)明的抗腫瘤藥物靶向脂質(zhì)體對(duì)肝癌細(xì)胞株HepG2的抑制作用
細(xì)胞培養(yǎng)
人肝癌細(xì)胞株H印G2用含10%滅活的胎牛血清，青霉素濃度最終為100U/ml，硫酸鏈霉素的最終濃度為100ug/ml的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)，置37°C 5% C02恒溫培養(yǎng)箱中，每天換新培養(yǎng)液，每2-3天傳代一次。
藥物配制
實(shí)驗(yàn)組參照實(shí)施例4制備含CH3 (CH2) 6C0_RGD0 (CH2) nCH3的抗腫瘤藥物靶向脂質(zhì)體。藥物濃度分別為 I. 2、0. 6、0. 3、0. 15、0. 075ug/ml。
對(duì)照組參照實(shí)施例2制備抗腫瘤藥物普通脂質(zhì)體。藥物濃度分別為I. 2,0. 6、 0.3、0.15、0. 075ug/ml。
陰性對(duì)照組用含10%胎牛血清培養(yǎng)的H印G2細(xì)胞，不加藥
空白組含10%胎牛血清的培養(yǎng)液。
實(shí)驗(yàn)方法將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HepG2細(xì)胞用胰蛋白酶消化后，培養(yǎng)液稀釋，制成 3 X 104/ml細(xì)胞懸液，接種于96孔培養(yǎng)板內(nèi)，每孔IOOiU。實(shí)驗(yàn)設(shè)不同濃度實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組、 陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組。接種后培養(yǎng)24小時(shí)，分別加入以上各組5個(gè)濃度10ul，每個(gè)濃度重復(fù)5孔，37°C 5% C02培養(yǎng)48h，每孔加MTT lmg/ml 100 u I 37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4h。將 96孔板棄去上液，每孔加二甲亞砜150 ii I，振蕩器振搖lOmin，使充分溶解，自動(dòng)酶標(biāo)儀測(cè)定光密度OD值(測(cè)量波長(zhǎng)570nm，參比波長(zhǎng)630nm)。IfepG2細(xì)胞存活率％=[(抗癌藥物組 OD值-空白對(duì)照組OD值)/ (陰性對(duì)照組OD值-空白對(duì)照組OD值)]X 100%，計(jì)算半數(shù)抑制濃度(IC5tl)見表2實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明抗腫瘤藥物靶向脂質(zhì)體組比普通脂質(zhì)體組有更好的抗腫瘤活性。表2表阿霉素制劑對(duì)IfepG2細(xì)胞的抑制作用
制剤組半數(shù)抑制濃度(ug/ml)
表阿霉素普通脂質(zhì)體組0.471 ±0.013
含有 CH3(CH2)ioCO-GGDO(CH2)nCH3 的表0.453 士0.033
阿霉素非靶向脂質(zhì)體組
含有 CH3(CH2)6CO-RGDO(CH2)nCH3 的表0.377±0.011*#
阿霉素靶向脂質(zhì)體組_*對(duì)比于表阿霉素普通脂質(zhì)體組有顯著意義(P < 0. 05)#對(duì)比于表阿霉素非靶向脂質(zhì)體組有顯著意義(ρ < 0. 05)
具體實(shí)施例方式為了進(jìn)一步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實(shí)施例。這些實(shí)施例完全是例證性的，它們僅用來對(duì)本發(fā)明進(jìn)行具體描述，不應(yīng)當(dāng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例ICH3 (CH2) 10CO-Arg-Gly-Asp-OCH2 (CH2) 10CH3 的制備1) Boc-Arg (N02)-Gly-OBzl 的制備將1. 59g (5mmol) Boc-Arg (N02) -OH, 0. 68g (5mmol) N-羥基苯并三氮唑(HOBt)溶于無水THF中。冰浴下再滴入1. 34g(5. 75mmol) 二環(huán)己基羰二亞胺(DCC)的無水THF溶液， 冰浴下攪拌20分鐘，得到反應(yīng)液(I)。冰浴下把1. 69g(5. OmmoDTosOH · Gly-OBzl懸浮于適量無水DMF中，然后加入數(shù)滴N-甲基嗎啉(NMM)，調(diào)pH至7_8，得到反應(yīng)液(II)。冰浴下把反應(yīng)液⑴滴加入反應(yīng)液(II)中，先冰浴下攪拌lh，再室溫?cái)嚢?2h，TLC(氯仿/甲醇，10 1)顯示Boc-Arg (N02) -OH消失，停止反應(yīng)。濾除二環(huán)己基脲(D⑶)，濾液吹去DMF。 殘留物用150ml乙酸乙酯溶解。得到的溶液依次用5% NaHCO3水溶液、飽和NaCl水溶液、 5% KHSO4水溶液和飽和NaCl水溶液各洗三遍。乙酸乙酯層用無水Na2SO4干燥、過濾、濾液減壓濃縮至干，得到2. 09g(90% )標(biāo)題化合物，為白色固體。ESI-MS(m/z)467. 8[M+1]+， 489. 8 [M+23] +，955. 4 [2M+23] +。2) HCl · Arg (N02)-Gly-OBzl 的制備將2. 09g(4. 5mmol)Boc-Arg(N02) -Gly-OBzl 溶解在 5ml 4mol/l 氯化氫-乙酸乙酯溶液中，室溫?cái)嚢?小時(shí)，TLC(氯仿/甲醇)顯示原料點(diǎn)消失，減壓濃縮除去乙酸乙酯， 殘留物反復(fù)加少量乙醚進(jìn)行減壓濃縮以除去氯化氫氣。最后加少量乙醚將殘留物研磨成 1.52g(92. 5%)標(biāo)題化合物，為白色固體，直接用于下一步反應(yīng)。ESI-MS(m/z)367.4[M+l]+， 389. 4[M+23]+，733. 8[2M+1] +3) CH3 (CH2) 10CO-Arg (N02) -Gly-OBzl 的制備按照Boc-Arg (N02) -Gly-OBzl 的制備方法，由 1. OOg (5讓ol) CH3 (CH2) 10COOH 禾口 2. 38g(6. 5mmol)HCl 'Arg(N02)-Gly-OBzl 制得 2. 41g(88. 12% )標(biāo)題化合物，為白色固體。 ESI-MS (m/z)M9. 7[M+1]+，571. 7[M+23]+。 4) CH3 (CH2) 10CO-Arg (N02) -Gly-OH 的制備
將1. 81g(3. 3mmol)CH3(CH2) 10CO-Arg(N02)-Gly-OBzl 溶于 15ml 甲醇。冰浴下將得到的溶液用NaOHON)水溶液調(diào)pH至12并攪拌2h，TLC(氯仿/甲醇，10 1)顯示 CH3 (CH2) 10CO-Arg (N02) -Gly-OBzl消失。反應(yīng)混合物用飽合KHSO4水溶液調(diào)pH至7，減壓濃縮除甲醇。殘留物用飽合KHSOyK溶液調(diào)pH至2，用乙酸乙酯萃取(50mlX3)。合并的乙酸乙酯相用飽和NaCl水溶液洗3次，無水Na2SO4干燥。過濾，濾液減壓濃縮至干，得
1.466g(97. 6% )標(biāo)題化合物，為白色固體。ESI-MS(m/z)457. 7[Μ-1Γ。5) Boc-Asp (OBzl) -OCH2 (CH2) 10CH3 的制備按照Boc-Arg (N02)-Gly-OBzl 的制備方法，由 0. 93g (5mmol) CH3 (CH2)11OH 禾口
2.423(7. 5mmol)Boc-Asp (OBzl)-OH 制得 2. 078g(84. 8% )標(biāo)題化合物，為白色固體。ESI-MS (m/z)492. 7[M+1]+,514. 4[M+23]+, 1005. 5 [2M+23] +。6) HCl · Asp (OBzl) -OCH2 (CH2) 10CH3 的制備將2· 04 (4. 15mmol) Boc-Asp (OBzl) -OCH2 (CH2) 10CH3 溶解在 5ml 4mol/l 氯化氫-乙酸乙酯溶液中，室溫?cái)嚢?小時(shí)，TLC(氯仿/甲醇)顯示原料點(diǎn)消失，減壓濃縮除去乙酸乙酯，殘留物反復(fù)加少量乙醚進(jìn)行減壓濃縮以除去氯化氫氣。最后加少量乙醚將殘留物研磨成1.51g(93.5% )標(biāo)題化合物，為白色固體，直接用于下一步反應(yīng)。ESI-MS(m/ z)392. 7[Μ+1]+，783. 1[2M+1] +。7) CH3 (CH2) 10CO_Arg (N02) -Gly-Asp (OBzl) -OCH2 (CH2) 10CH3 的制備按M Boc-Arg (N02)-Gly-OBzl 的制備方法，1. 51g (3. 85mmol) HCl · Asp (OBzl)-OCH2 (CH2)10CH3 和 1. 465g(3. 2mmol) CH3 (CH2) 10CO-Arg (N02) -Gly-OH 制得 2. 39g(90. 2% )標(biāo)題化合物，為白色固體。[α ]d20 = -9. 73 (c = 1. 0，MeOH) ；ESI-MS (m/ ζ) 832. 4 [M+l] +，855. O [Μ+23] +。8) CH3 (CH2) 10CO-Arg-Gly-Asp-OCH2 (CH2) 10CH3 的制備將0. 831g (Immol) CH3 (CH2) 10CO_Arg (N02) -Gly-Asp (OBzl) OCH2 (CH2) 10CH3 置于250ml茄形瓶中、用乙醇溶解、加200mgPd/C Q5 % )、通H2 (0. 02Mba)，室溫?cái)嚢柚猎宵c(diǎn)消失。濾除Pd/C、濾液減壓濃縮至干，殘留物反復(fù)用石油醚研磨，得 0.6^g(90% )標(biāo)題化合物，為白色固體粉末。ESI-MS(m/z) :695·9[Μ_ Γ。(注CH3(CH2) nC0-Arg-Gly-Asp-0CH2 (CH2) IOCH3, η = 6,8,12,14 偶聯(lián)物的具體制備參照 CH3 (CH2) 10CO-Arg -Gly-Asp-OCH2(CH2)10CH3 的制備方法。)實(shí)施例2.表阿霉素脂質(zhì)體O)的制備采用硫酸銨梯度法制備。取適量磷脂和膽固醇至圓底燒瓶中用氯仿溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，在瓶壁形成一層透明的膜。將150mmol (NH4)2SO4溶液加至脂膜中，超聲分散，得空白脂質(zhì)體混懸液。將空白脂質(zhì)體置透析袋中透析4-5次，每次透析約10h，取出透析內(nèi)液置于茄瓶中；另精密稱取表阿霉素適量，溶于水中，將此溶液加入至空白脂質(zhì)體混懸液，于熱水浴中放置，并不時(shí)振搖。從熱水浴中取出后，即得表阿霉素脂質(zhì)體。粒徑 150 250nm，Zeta-Potential-20 _40mV。實(shí)施例3.膜材中含CH3 (CH2) 10CO-GGD-OCH2 (CH2) 10CH3的表阿霉素脂質(zhì)體(3)的制備各組分的用量表阿霉素2-8 % ；天然卵磷脂，膽固醇和 CH3 (CH2) 10CO-GGD-OCH2 (CH2) 10CH3 的混合物 90-97 %，該混合物中，天然卵磷脂 70-80 % (質(zhì)量百分比)，膽固醇10-20% (質(zhì)量百分比)和化合物CH3 (CH2) 10CO-GGD-OCH2 (CH2) 10CH33-10% (質(zhì)量百分比)。取磷脂，膽固醇和CH3 (CH2) 10CO-GGD-OCH2 (CH2) 10CH3至圓底燒瓶中以氯仿溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，在瓶壁形成一層透明的膜。將150mmol ·L—1 (NH4)2S04溶液加至脂膜中，超聲分散，得空白脂質(zhì)體混懸液。將空白脂質(zhì)體置透析袋中透析4-5次，每次透析約10h，取出透析內(nèi)液置茄瓶中；另精密稱取表阿霉素適量，溶于水中，將此溶液加入至空白脂質(zhì)體混懸液，置于熱水浴中，并不時(shí)振搖。從熱水浴中取出后，即得含CH3 (CH2) 10CO-GGD-OCH2 (CH2) 10CH3 的表阿霉素脂質(zhì)體。粒徑 150 250nm，Zeta-Potential-20 _40mV。實(shí)施例4.膜材中含CH3 (CH2)6C0-RGD_0CH2 (CH2) 10CH3的表阿霉素脂質(zhì)體⑷的制備各組分的用量表阿霉素2-8 % ；天然卵磷脂，膽固醇和 CH3 (CH2)6C0RGD-0CH2 (CH2) 10CH3的混合物90-97%，該混合物中，天然卵磷脂70-80% (質(zhì)量百分比)，膽固醇10-20% (質(zhì)量百分比)和整合素受體靶向錨點(diǎn)化合物3-10% (質(zhì)量百分比)。參照實(shí)施例2的制備方法，取磷脂，膽固醇和CH3 (CH2) 6C0RGD-0CH2 (CH2) 10CH3 至圓底燒瓶中以氯仿溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，在瓶壁形成一層透明的膜。將 150mmol (NH4)2SO4溶液加至脂膜中，超聲分散，得空白脂質(zhì)體混懸液。將空白脂質(zhì)體置透析袋中透析4-5次，每次透析約10h，取出透析內(nèi)液置茄瓶中；另精密稱取表阿霉素適量， 溶于少量蒸餾水中，將此溶液與空白脂質(zhì)體混懸液混合，于熱水浴中放置，不時(shí)振搖。取出， 即得含CH3 (CH2) 6C0RGD-0CH2 (CH2) 10CH3表阿霉素脂質(zhì)體。粒徑 150 250nm，Zeta-Potential-20 _40mV。實(shí)施例5.膜材中含CH3 (CH2)8C0-RGD_0CH2 (CH2) 10CH3的表阿霉素脂質(zhì)體(5)的制備各組分的用量表阿霉素2-8 % ；天然卵磷脂，膽固醇和 CH3 (CH2)8C0RGD-0CH2 (CH2) 10CH3的混合物90-97%，該混合物中，天然卵磷脂70-80% (質(zhì)量百分比)，膽固醇10-20% (質(zhì)量百分比)和整合素受體靶向錨點(diǎn)化合物3-10% (質(zhì)量百分比)。照實(shí)施例2的制備方法，取磷脂，膽固醇和CH3 (CH2) 8C0RGD_0CH2 (CH2) 10CH3 至圓底燒瓶中以氯仿溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，在瓶壁形成一層透明的膜。將 150mmol ^r1(NH4)2SO4溶液加至脂膜中，超聲分散，得空白脂質(zhì)體混懸液。將空白脂質(zhì)體置透析袋中透析4-5次，每次透析約10h，取出透析內(nèi)液置茄瓶中；另精密稱取表阿霉素適量，溶于水中，將此溶液加入至空白脂質(zhì)體混懸液，于熱水浴中放置，不時(shí)振搖。取出即得含 CH3 (CH2) 8C0RGD-0CH2 (CH2) 10CH3 的表阿霉素脂質(zhì)體。粒徑 150 250nm，Zeta-Potential-20 _40mV。實(shí)施例6.膜材中含CH3 (CH2) 10CO-RGD-OCH2 (CH2) 10CH3的表阿霉素脂質(zhì)體(6)的制備各組分的用量表阿霉素2-8 % ；天然卵磷脂，膽固醇和 CH3 (CH2) 10CORGD-OCH2 (CH2) 10CH3的混合物90-97%，該混合物中，天然卵磷脂70-80% (質(zhì)量百分比)，膽固醇10-20% (質(zhì)量百分比)和整合素受體靶向錨點(diǎn)化合物3-10% (質(zhì)量百分比)。照實(shí)施例2的制備方法，取磷脂，膽固醇和CH3 (CH2) 10CORGD-OCH2 (CH2) 10CH3 至圓底燒瓶中以氯仿溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，在瓶壁形成一層透明的膜。將 150mmol ^r1(NH4)2SO4溶液加至脂膜中，超聲分散，得空白脂質(zhì)體混懸液。將空白脂質(zhì)體置透析袋中透析4-5次，每次透析約10h，取出透析內(nèi)液置于茄瓶中；另精密稱取表阿霉素適量，溶于水中，將此溶液加入至空白脂質(zhì)體混懸液，于熱水浴中放置，不時(shí)振搖。即得含CH3 (CH2) 10CORGD-OCH2 (CH2) 10CH3 的表阿霉素脂質(zhì)體。 粒徑 150 250nm，Zeta-Potential-20 _40mV。實(shí)施例 7. CH3 (CH2) 12C0-RGD-0CH2 (CH2) 10CH3 脂質(zhì)體(7)的制備各組分的用量表阿霉素2-8 % ；天然卵磷脂，膽固醇和 CH3 (CH2) 12C0-RGD-0CH2 (CH2) 10CH3 的混合物 90-97 %，該混合物中，天然卵磷脂 70-80 % (質(zhì)量百分比)，膽固醇10-20% (質(zhì)量百分比)和化合物CH3 (CH2) 12C0-RGD-0CH2 (CH2) 10CH33-10 % (質(zhì)量百分比)。取磷脂，膽固醇和CH3 (CH2) 12C0-RGD-0CH2 (CH2) 10CH3至圓底燒瓶中以氯仿溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，在瓶壁形成一層透明的膜。將150mmol ·L—1 (NH4)2S04溶液加至脂膜中，超聲分散，得空白脂質(zhì)體混懸液。將空白脂質(zhì)體置透析袋中透析4-5次，每次透析約10h，取出透析內(nèi)液置茄瓶中；另精密稱取表阿霉素適量，溶于水中，將此溶液加入至空白脂質(zhì)體混懸液，置于熱水浴中，并不時(shí)振搖。從熱水浴中取出后，即得含CH3 (CH2) 12C0-RGD-0CH2 (CH2) 10CH3 的表阿霉素脂質(zhì)體。粒徑 150 250nm，Zeta-Potential-20 _40mV。實(shí)施例8. CH3 (CH2) 14C0-RGD_0CH2 (CH2) 10CH3 脂質(zhì)體(8)的制備各組分的用量表阿霉素2-8 % ；天然卵磷脂，膽固醇和 CH3 (CH2) 14C0-RGD-0CH2 (CH2) 10CH3 的混合物 90-97 %，該混合物中，天然卵磷脂 70-80 % (質(zhì)量百分比)，膽固醇10-20% (質(zhì)量百分比)和化合物CH3 (CH2) 14C0-RGD-0CH2 (CH2) 10CH33-10 % (質(zhì)量百分比)。取磷脂，膽固醇和CH3 (CH2) 14C0-RGD-0CH2 (CH2) 10CH3至圓底燒瓶中以氯仿溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，在瓶壁形成一層透明的膜。將150mmol ·L—1 (NH4)2S04溶液加至脂膜中，超聲分散，得空白脂質(zhì)體混懸液。將空白脂質(zhì)體置透析袋中透析4-5次，每次透析約10h，取出透析內(nèi)液置茄瓶中；另精密稱取表阿霉素適量，溶于水中，將此溶液加入至空白脂質(zhì)體混懸液，置于熱水浴中，并不時(shí)振搖。從熱水浴中取出后，即得含CH3 (CH2) 14C0-RGD-0CH2 (CH2) 10CH3 的表阿霉素脂質(zhì)體。粒徑 150 250nm，Zeta-Potential-20 _40mV。
權(quán)利要求
1.一種作為錨點(diǎn)化合物的脂肪酸-RGD-脂肪醇偶聯(lián)化合物，其結(jié)構(gòu)式如下CH3(CH2)n CO-Arg-Gly-Asp-OCH2 (CH2)ltlCH3,其中，n = 4-16。
2.權(quán)利要求I所述的偶聯(lián)化合物，其特征在于，其中，n= 6，8，10，12，14。
3.一種制備權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)所述的偶聯(lián)化合物的方法，包括將Arg-Gly-Asp與脂肪酸鏈進(jìn)行綴合，再與十二醇進(jìn)行綴合，即得。
4.一種抗腫瘤藥物靶向脂質(zhì)體，其特征在于含有權(quán)利要求I或2所述的偶聯(lián)化合物。
5.權(quán)利要求4所述的抗腫瘤藥物靶向脂質(zhì)體，其特征在于，由以下組分制成抗腫瘤藥物，磷脂，膽固醇和權(quán)利要求I或2所述的偶聯(lián)化合物。
6.權(quán)利要求5所述的抗腫瘤藥物靶向脂質(zhì)體，其特征在于，各組分質(zhì)量百分比為抗腫瘤藥物2-8%，磷脂70-80%，膽固醇10-20%，權(quán)利要求I或2所述的偶聯(lián)化合物3-10%。
7.權(quán)利要求6所述的抗腫瘤藥物靶向脂質(zhì)體，其特征在于，所述的抗腫瘤藥物選自 表阿霉素，阿霉素，吡喃阿霉素，紫杉醇，多西紫杉醇，柔紅霉素阿克拉霉素、光輝霉素中的一種或多種。
8.權(quán)利要求7所述的抗腫瘤藥物靶向脂質(zhì)體，其特征在于，所述的磷脂選自卵磷脂， 大豆磷脂，二棕櫚酰磷脂酰膽堿，二硬脂酰磷脂酰膽堿中的一種或多種。
9.一種制備權(quán)利要求4-8任一項(xiàng)所述抗腫瘤藥物靶向脂質(zhì)體的方法，包括以下步驟將除抗腫瘤藥物之外的其他各組分用氯仿溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，加入 150mmol L—1 (NH4)2S04溶液，超聲分散，得空白脂質(zhì)體混懸液。將空白脂質(zhì)體置透析袋中透析4-5次，每次透析約10h，取透析內(nèi)液置于茄瓶中；另精密稱取抗腫瘤藥物適量，溶于水中，將此溶液加入至空白脂質(zhì)體混懸液，混勻，于熱水浴中放置，振搖，即得。
10.權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)所述的偶聯(lián)化合物在制備抗腫瘤靶向脂質(zhì)體藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了脂肪酸-RGD-脂肪醇偶聯(lián)物介導(dǎo)表阿霉素靶向脂質(zhì)體制備及抗腫瘤活性評(píng)價(jià)，本發(fā)明的偶聯(lián)物，其結(jié)構(gòu)式如下CH3(CH2)nCO-Arg-Gly-Asp-OCH2(CH2)10CH3，其中，n＝4-16，本發(fā)明將抗腫瘤藥物引入到該偶聯(lián)物中得到抗腫瘤靶向脂質(zhì)體藥物，該脂質(zhì)體可以增加抗腫瘤藥物在靶部位的濃度并可減少其在非靶部位的毒副作用，提高藥物的治療指數(shù)。
文檔編號(hào)A61K47/42GK102532262SQ20121005443
公開日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2012年3月2日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月2日
發(fā)明者吳曼, 崔國(guó)輝, 崔純瑩 申請(qǐng)人:首都醫(yī)科大學(xué)