專利名稱：基于選擇病毒受體結合位點的特異性抗體在制備防治病毒感染的生物制品中的應用的制作方法
技術領域：
本發明屬于生物領域，具體地，涉及一種基于選擇病毒受體結合位點的特異性抗體在制備防治病毒感染的生物制品中的應用。
背景技術：
隨著世界經濟的不斷發展，空間的距離已不再成為人們溝通的障礙，但是伴隨著 這種進步，由各種病毒引起的傳染病也遍及世界各地。其中以逆轉錄病毒為病因的艾滋病引起的危害最為引人注目，每年都有數以百萬的人口死于艾滋病。中和抗體在抵制病毒感染的作用中有著至關重要的地位。逆轉錄病毒進入細胞的過程包括吸附，受體結合，膜融合進而將病毒內含物主要為核酸和酶運送入細胞內。中和抗體能夠結合病毒表面的蛋白從而阻止病毒進入細胞。中和抗體的作用對象通常是病毒的囊膜蛋白，某些病毒其中一個重要的靶點為位于病毒顆粒表面的囊膜蛋白的融合蛋白亞單位gp41。長期以來有很多研究人員意圖通過各種抗原誘導機制產生類似中和抗體，但成功的例子鮮有報道。研究者們逐漸認識到對于慢性病毒來說，其中和抗體大多為構象型抗體。以往的相關疫苗設計研究主要集中在2F5作用靶點，但幾乎沒有得到相應的中和抗體。一種解釋認為，這些疫苗沒有將這段2F5識別序列放在一個合適的環境中，因此不能呈遞出正確的構象。

發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種基于選擇病毒受體結合位點的特異性抗體在制備防治病毒感染的生物制品中的應用。通過將具有本申請記載的特定氨基酸序列的特異性抗體選擇性的結合于gp41 MPER，可以使抗體和病毒發生較好的中和反應，起到較好的防治病毒感染作用。本發明解決上述技術問題所采用的技術方案是基于選擇病毒受體結合位點的特異性抗體在制備防治病毒感染的生物制品中的應用，所述特異性抗體重鏈可變區基因VH包含氨基酸含序列為GYNFASEW、IYP⑶SDT、ARQNHYGSGSYFYRTAYYYAMDV中的一個或多個⑶Rs，特異性抗體輕鏈可變區基因VL包含氨基酸含序列為QSISSY、AAS、QQSYNTPFT中的一個或多個CDRs，具有該氨基酸序列的特異性抗體選擇性的結合于gp41 MPER。本申請的病毒以HIV-I為例，其包膜來自宿主細胞膜，包膜中的兩種糖蛋白gpl20和gp41是病毒重要的抗原標志，均由env基因編碼。gpl60分子為糖蛋白前體，可裂解為gpl20和gp41。Gpl20分子稱外膜蛋白，能與T細胞CD4分子特異性結合而識別靶細胞。Gp41平時鑲嵌在包膜內，當gpl20與⑶4分子結合時，gpl20發生構象變化，暴露出病毒輔助受體的結合位點，然后與輔助受體結合后，gp41介導病毒與CD4細胞融合,從而病毒進入細胞內。病毒表面包膜蛋白的免疫原性比病毒核心蛋白強。幾乎979^100%艾滋病患者血清中可檢測到針對gpl20、gpl60的抗體。Gp41抗體穩定而持久，對病毒的診斷和防治有重要意義。通過比較不同特異性抗體的重鏈可變區基因VH和輕鏈可變區基因VL的氨基酸順序發現，變異僅集中在其中少數區域的氨基酸上(15% 20% )，稱為超變區，超變區是抗體的抗原結合位，與抗原決定簇的結構互補，故又稱為互補決定區(complementarity —determining regions, Q)Rs)。本申請將gp41MPER區域作為祀點進行了相關研究由于gp41MPER難以在gp41本身蛋白骨架背景下產生特異性免疫，所以通過蛋白融合，并在免疫過程中模擬gp41跨膜前域(MPER)的天然構象，將這個區域的表位呈遞給免疫系統，以期獲得針對gp41MPER區域的特異性抗體，并分析所獲得抗體的中和活性。所述重鏈可變區基因VH包含氨基酸含序列為GYNFASEW、IYP⑶SDT、ARQNHYGSGSYFYRTAYYYAMDV的三個CDRs，輕鏈可變區基因VL包含氨基酸含序列為QSISSY、AAS、QQSYNTPFT 的三個 CDRs。具體地，所述生物制品為生物載體。
或者，所述生物制品為生物片段。或者，所述生物制品為抗體。本發明的有益效果是本發明通過將具有特定序列的特異性抗體選擇性的結合于gp41 MPER，可以使抗體和病毒發生較好的中和反應，起到較好的防治病毒感染的作用。
具體實施例方式下面結合具體實施方式
對本發明作進一步的詳細描述，但本發明的實施方式不僅限于下述實施例。本事實例為基于選擇病毒受體結合位點的特異性抗體在制備防治病毒感染的生物制品中的應用，所述特異性抗體重鏈可變區基因VH包含氨基酸含序列為GYNFASEW、IYP⑶SDT、ARQNHYGSGSYFYRTAYYYAMDV的三個CDRs，特異性抗體輕鏈可變區基因VL包含氨基酸含序列為QSISSY、AAS、QQSYNTPFT的三個CDRs。本實施例的單克隆抗體，擁有的可變重鏈和可變輕鏈序列，重鏈可變區基因VH具體序列為
Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly GluSer Leu Lys He Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Asn Phe Ala Ser GluTrp He Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp MetGly Ile He Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Lys Tyr Ser Pro Ser PheGln Gly Gln Val Ile He Ser Ala Asp Lys Ser He Asn Thr Ala TyrLeu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala He Tyr Tyr CysAla Arg Gln Asn His Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Phe Tyr Arg Thr AlaTyr Tyr Tyr Ala Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr ValSer Ser
輕鏈可變區基因VL的氨基酸的具體序列為
Val Ala Gln Ala Ala Asp He Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser LeuSer Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ala Ser GlnSer He Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys AlaPro Asn Leu Leu lie Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Asn Thr Pro Phe Thr Leu Gly Pro Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg
下表I為本實施例已確定的CDR區域的氨基酸序列 表I.單克隆抗體VH和VL的⑶R區域
權利要求
1.基于選擇病毒受體結合位點的特異性抗體在制備防治病毒感染的生物制品中的應用，其特征在于，所述特異性抗體重鏈可變區基因VH包含氨基酸含序列為GYNFASEW、IYPGDSDT, ARQNHYGSGSYFYRTAYYYAMDV中的一個或多個CDRs，特異性抗體輕鏈可變區基因VL包含氨基酸含序列為QSISSY、AAS、QQSYNTPFT中的一個或多個⑶Rs，具有該氨基酸序列的特異性抗體選擇性的結合于gp41 MPER。
2.根據權利要求I所述的應用，其特征在于，所述重鏈可變區基因VH包含氨基酸含序列為 GYNFASEW、IYP⑶SDT、ARQNHYGSGSYFYRTAYYYAMDV 的三個 CDRs，輕鏈可變區基因 VL 包含氨基酸含序列為QSISSY、AAS、QQSYNTPFT的三個CDRs。
3.根據權利要求I或2所述的應用，其特征在于，所述生物制品為生物載體。
4.根據權利要求I或2所述的應用，其特征在于，所述生物制品為生物片段。
5.根據權利要求I或2所述的應用，其特征在于，所述生物制品為抗體。
全文摘要
本發明公開了一種基于選擇病毒受體結合位點的特異性抗體在制備防治病毒感染的生物制品中的應用。該特異性抗體重鏈可變區基因VH包含氨基酸含序列為GYNFASEW、IYPGDSDT、ARQNHYGSGSYFYRTAYYYAMDV中的一個或多個CDRs，特異性抗體輕鏈可變區基因VL包含氨基酸含序列為QSISSY、AAS、QQSYNTPFT中的一個或多個CDRs，具有該氨基酸序列的特異性抗體選擇性的結合于gp41MPER。本發明通過將具有特定序列的特異性抗體選擇性的結合于gp41MPER，可以使抗體和病毒發生較好的中和反應，起到較好的防治病毒感染的作用。
文檔編號A61P31/20GK102727889SQ20121020720
公開日2012年10月17日 申請日期2012年6月21日 優先權日2012年6月21日
發明者丁兆, 朱仲玉 申請人:四川匯宇制藥有限公司